急性肺炎模型中血漿氨基脲敏感型胺氧化酶活性的研究.pdf

1、氨基脲敏感型胺氧化酶是一系列對氨基脲敏感的胺氧化酶的統(tǒng)稱,活性位點(diǎn)由1個(gè)二價(jià)銅離子,一個(gè)輔酶TPQ和三個(gè)組氨酸殘基組成。其生理功能和病理意義尚不完全清楚。在人體組織中,SSAO以游離形式分布在血漿中,也以膜結(jié)合形式分布在組織和器官中,尤其在脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞中酶活性較高。已有研究發(fā)現(xiàn)在某些病理狀態(tài)下存在SSAO的活性變化,如急性腹膜炎、慢性皮膚炎、慢性肺炎的炎癥部位酶活性上調(diào)、肝硬化患者血漿酶活性上升等。然而有趣的是在已

2、報(bào)道的急性肺炎動(dòng)物模型中,肺組織的SSAO及酶活性都沒有發(fā)生變化,這和我們的預(yù)期不同。本實(shí)驗(yàn)就是在原有研究的基礎(chǔ)上選擇合適的動(dòng)物模型,對血漿中SSAO活性在急性肺炎模型中的變化情況進(jìn)行研究,并對血漿中是否存在SSAO內(nèi)源性抑制劑進(jìn)行探討。
　　主要研究內(nèi)容和方法:
　　1.建立Wistar、SD大鼠、新西蘭兔急性肺炎模型,通過比較,選擇適合SSAO活性研究需要的模型動(dòng)物,并對造模方法進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)。
　　2.通過動(dòng)物癥狀

3、觀察、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、病理切片等方法,評價(jià)新的急性肺炎模型造模方法的造模質(zhì)量。
　　3.比較不同給藥方式與給藥劑量對急性肺炎動(dòng)物模型血漿SSAO活性的影響。
　　4.檢測在急性肺炎發(fā)生過程中新西蘭兔血漿SSAO活性的變化。
　　5.對正常血漿和低活性血漿分別進(jìn)行變性、純化等處理,尋找可能參與 SSAO活性調(diào)控的內(nèi)源性物質(zhì)。
　　研究結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)證明,采用腹腔或耳緣靜脈等全身給藥方式,副作用較大,而氣管內(nèi)

4、給藥造模時(shí)藥物對其他部位的傷害較小,優(yōu)于全身性給藥;大鼠 SSAO活性很低,測量誤差較大,采用兔作模型比大鼠更理想;采用氣管直接插管給藥造模較傳統(tǒng)的氣管切開插管給藥產(chǎn)生的副作用小,操作時(shí)間短,可避免機(jī)械損傷產(chǎn)生的并發(fā)炎癥。該造模方法可能存在藥物在肺組織內(nèi)分布不均勻的缺點(diǎn),有待進(jìn)一步改進(jìn)。
　　2.以新西蘭兔為模型動(dòng)物,通過氣管直接插管法分別給入脂多糖1.0mg·kg-1、1.5mg·kg-1、2.0mg·kg-1、3.0mg·kg

5、-1。當(dāng)給入脂多糖2.0mg·kg-1時(shí),酶活性變化最明顯,因此選擇2.0mg·kg-1 LPS為兔急性肺炎造模的劑量。
　　3.在給入脂多糖后,新西蘭兔血漿SSAO活性發(fā)生有規(guī)律的波動(dòng)。SSAO活性在給藥后迅速上升,在第16h達(dá)到最高,然后大幅下降,在第48h降到最低點(diǎn),并開始逐漸恢復(fù),最終保持在略高于正常水平直至康復(fù)。若以給藥前酶活性為對照,其最大升幅為23.33±9.63％,最大降幅為17.83±8.69%,均有統(tǒng)計(jì)意義(P

6、<0.05)
　　4.經(jīng)70℃水浴變性除蛋白等處理后的血漿提取物對正常血漿酶活性有很大影響,其中正常血漿提取物可使酶活性下降幅度達(dá)到9.05%,而低活性血漿提取物可使降幅達(dá)到21.15%,由于該分離方法不能完全除去蛋白,含有其他成分的雜質(zhì)也很多,因此仍需進(jìn)一步對提取物分離純化,才可能得到其內(nèi)源性抑制物。
　　結(jié)論及意義:
　　1.通過新西蘭兔氣管直接插管給藥代替氣管切開等給藥方式,副作用小,造模質(zhì)量穩(wěn)定;兔血漿SSAO