非AIDS相關(guān)隱球菌感染患者M(jìn)BL基因多態(tài)性分布及其相關(guān)研究.pdf

1、背景：隱球菌病(crytococcosis)是由隱球菌所致的全身感染性疾病,好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下患者,隨著HIV感染、血液系統(tǒng)惡性腫瘤、實(shí)體惡性腫瘤、實(shí)體器官移植等疾病增多,糖皮質(zhì)激素與免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用,其發(fā)病率日益增高,其病死率也居高不下。歐美國家以AIDS相關(guān)隱球菌病為多見,而在我國盡管AIDS發(fā)病率呈上升趨勢,但仍以非AIDS患者為主。更值一提的是,我國非AIDS相關(guān)隱球菌感染患者中又以無基礎(chǔ)疾病的免疫正常人群為主,占50％

2、～77％,而歐美國家僅占7％～32％。這些“免疫正?！被颊呤欠翊嬖跐撛诘拿庖吖δ苋毕葜档梦覀兲接?。機(jī)體免疫包括固有免疫和適應(yīng)性免疫,其中,固有免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)的第一道防線,模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors,PRRs)又是其關(guān)鍵。甘露糖結(jié)合凝集素(mannose binding leetin,MBL)是PRRs中的重要一員。MBL基因存在遺傳多態(tài)性,并與多種感染性疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),但與隱球

3、菌感染的關(guān)系目前尚未明確。
　　第一部分，隱球菌病患者M(jìn)BL基因多態(tài)性分布及其遺傳易感性的關(guān)聯(lián)分析
　　目的：分析我國非AIDS隱球菌感染患者M(jìn)BL基因多態(tài)性分布情況,驗(yàn)證MBL基因型與血漿MBL濃度水平的關(guān)系,探討MBL基因多態(tài)性與隱球菌易感性的關(guān)系。
　　方法：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用病例一對(duì)照遺傳關(guān)聯(lián)研究,病例組為隱球菌病患者170例,對(duì)照組為健康體檢者218例。提取受試者外周血標(biāo)本基因組DNA,PCR特異性擴(kuò)增MBL基因D

4、NA片段,對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列分析,以檢測隱球菌病患者與健康體檢者M(jìn)BL基因多態(tài)性。同時(shí),ELISA方法測定受試者血漿MBL濃度,驗(yàn)證MBL基因多態(tài)性與血漿MBL蛋白表達(dá)的關(guān)系。比較病例組和對(duì)照組MBL基因多態(tài)性分布的差異,以了解隱球菌感染患者M(jìn)BL基因多態(tài)性與疾病遺傳易感性的相關(guān)性。
　　結(jié)果：170例隱球菌病患者中,男性105例,女性65例,中位年齡45歲,62％(107/170)的患者無明顯免疫低下基礎(chǔ)疾病。隱球菌感染患者等位

5、基因A、B、C、D分別占80.6％(274/340)、18.5％(63/340)、0.0％(0/340)、0.9％(3/340),等位基因H和L分別占51.5％(175/340)和48.5％(165/340),Y和X分別占84.7％(288/340)和15.3％(52/340),P和Q分別占91.8％(312/340)和8.2％(28/340);單倍型HYPA、LYQA、LYPA、LXPA、LYPB、HYPD分別占50.3％(171/3

6、40)、8.2％(28/340)、7.1％(24/340)、15.0％(51/340)、18.5％(63/340)、0.9％(3/340):MBL基因型高/中水平組、低水平組、缺乏組各占63.5％(108/170)、25.3％(43/170)、11.2％(19/170)。健康體檢者等位基因A、B、C、D分別占84.6％(369/436)、15.4％(67/436)、0.0％(0/436)、0.0％(0/436);等位基因H和L分別占50

7、.5％(220/436)49.5％(216/436),Y和X分別占84.9％(370/436)和15.1％(66/436),P和Q分別占87.8％(383/436)和12.2％(53/436);單倍型HYPA、LYQA、LYPA、LXPA、LYPB、HYPD分別占50.7％(221/436)、12.2％(53/436)、6.7％(29/436)、15.1％(66/436)、15.4％(67/436)、0.0％(0/436);MBL基因型

8、高/中水平組、低水平組、缺乏組各占69.7％(152/218)、21.6％(47/218)、8.7％(19/218)。隱球菌病患者M(jìn)BL各等位基因、單倍型、基因型的分布與健康體檢者相仿,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。同時(shí)檢測89例受試者(病例組70例,對(duì)照組19例)血漿MBL水平,MBL基因型高/中水平組、低水平組和缺乏組血漿MBL平均濃度分別為2219.46、434.37和2.91ng/mL,三組比較P＜0.0001,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義,驗(yàn)證了MBL基因型各組與MBL血漿濃度水平的一致性。
　　170例隱球菌病患者中有103例為隱球菌性腦膜炎,其中MBL基因型高/中水平組占63.1％(65/103),低水平組占20.4％(21/103),缺乏組占16.5％(17/103)。免疫正常隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型高/中水平組占64.3％(36/56),低水平組占14.3％(8/56),缺乏組占21.4％(12/56)。隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型缺乏組的構(gòu)成

10、比顯著高于對(duì)照組(P=0.0390,OR=2.07),免疫正常隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型缺乏組更顯著高于對(duì)照組(P=0.0074,OR=2.86)。
　　結(jié)論：MBL基因型各組與MBL血漿濃度水平相一致,MBL基因多態(tài)性與總體隱球菌病易感性無關(guān);然而,隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型缺乏組的構(gòu)成比顯著高于對(duì)照組,提示MBL缺乏是隱球菌性腦膜炎的易感因素。
　　第二部分，隱球菌病患者M(jìn)BL基因多態(tài)性與發(fā)病機(jī)制關(guān)系初探

11、　　目的：分析我國非AIDS隱球菌感染患者M(jìn)BL基因多態(tài)性與隱球菌感染部位及播散性的關(guān)系,初探MBL基因多態(tài)性在隱球菌病的發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用成組分析方法。隱球菌病患者的MBL基因型按照血清(漿)MBL濃度分為高/中水平、低水平及缺乏3組,比較各組患者中感染部位、以及皤散性感染是否存在差異。
　　結(jié)果：顱內(nèi)感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組占14.6％(17/103),顯著高于顱外感染者的3.0％(2/6

12、7)(P=0.006,OR=6.42);免疫正常顱內(nèi)感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組占21.4％(12/56),也顯著高于顱外感染者的3.9％(2/51)(P=0.009,OR=6.68),而前者低水平組占14.3％(8/56),顯著低于后者的33.3％(17/51)(P=0.0200,OR=0.33)。隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型低水平組占18.6％(13/70),顯著低于肺隱球菌病者的34.4％(22/64)(P=0.0375,OR=0

13、.44),肺隱球菌病合并隱球菌性腦膜炎患者缺乏組占24.2％(8/33),顯著高于肺隱球菌病者的3.1％(2/64)(P=0.002.OR=9.92);免疫正常隱球菌性腦膜炎患者M(jìn)BL基因型低水平組占12.2％(5/41),也顯著低于肺隱球菌病患者的34.0％(17/50)(P=0.0156,OR=0.27),肺隱球菌病合并隱球菌性腦膜炎患者缺乏組占33.3％(5/15),也顯著高于肺隱球菌病患者的4.0％(2/50)(P=0.006,

14、OR=12.00)。播散性感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組占25.0％(9/36),顯著高于局部感染者的7.5％(10/134)(P=0.0030,OR=4.13);免疫正常播散性感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組占35.3％(6/17),也顯著高于局部感染者的8.9％(8/90)(P=0.0031,OR=5.59),而前者高/中水平組占41.2％(7/17),顯著低于后者的67.8％(61/90)(P=0.0366,OR=0.33)。
　　結(jié)

15、論：顱內(nèi)感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組的構(gòu)成比顯著高于以肺部為主的顱外感染者,提示MBL缺乏可能是中樞神經(jīng)系統(tǒng)較肺部易受累的機(jī)制之一。播散性感染患者M(jìn)BL基因型缺乏組的構(gòu)成比顯著高于局部感染者,提示MBL缺乏可能是播散性感染的原因之一。顱內(nèi)感染患者M(jìn)BL基因型低水平組的構(gòu)成比顯著低于顱外感染者,隱球菌性腦膜炎患者低水平組的構(gòu)成比顯著低于肺隱球菌病,播散性感染患者高/中水平組的構(gòu)成比顯著低于局部感染,提示MBL對(duì)防止隱球菌感染播散至中樞神經(jīng)系