Trolox增強(qiáng)三氧化二砷對(duì)HL-60細(xì)胞毒性作用的研究.pdf

1、癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病。其發(fā)生是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程,該過(guò)程是無(wú)控制的細(xì)胞增殖伴隨著細(xì)胞凋亡的抑制。大部分的化療藥物都是通過(guò)抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的方式發(fā)揮他們的細(xì)胞毒性作用,所以用藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是有效的治療途徑。
　　三氧化二砷(As2O3)作為臨床治療急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)藥物,具有很好的療效。As2O3只能在較高的濃度下誘導(dǎo)非APL細(xì)胞發(fā)生凋亡,因

2、此其毒性限制了臨床應(yīng)用。有資料表明,在體外實(shí)驗(yàn)中一些抗氧化劑能夠促進(jìn)低濃度As2O3誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡作用。
　　Trolox,也稱水溶性維生素E(6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2- carboxylic acid),為維生素E衍生物。由于其較好的細(xì)胞通透性而可發(fā)揮較強(qiáng)的抗氧化活性,近年來(lái)在科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。如用Trolox協(xié)同As2O3作用,可能在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時(shí)減小As2O3細(xì)胞毒作

3、用,使As2O3更廣泛的應(yīng)用于臨床。
　　本文利用MTT,臺(tái)盼藍(lán)排染,Hoechst33258熒光染色、瑞氏-姬姆薩染色、單細(xì)胞凝膠電泳、流式細(xì)胞術(shù)以及DCHF-DA法檢測(cè)了As2O3單獨(dú)及聯(lián)合Trolox后對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞HL-60的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)作用、DNA損傷作用、周期阻滯和活性氧含量的影響,并通過(guò)單細(xì)胞凝膠電泳法檢測(cè)Trolox聯(lián)合As2O3對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞DNA損傷的影響。結(jié)果表明:
　　(1)低濃度A

4、s2O3(≤4μmol·L-1)對(duì)HL-60細(xì)胞具有生長(zhǎng)抑制效應(yīng),聯(lián)合100μmol·L-1 Trolox后,可以顯著增強(qiáng)As2O3對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用,較高濃度的As2O3(≥8μmol·L-1)聯(lián)合Trolox作用能夠誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞死亡。生長(zhǎng)抑制效應(yīng)和致死效應(yīng)都表現(xiàn)出顯著的時(shí)間和As2O3的劑量依賴性。
　　(2)As2O3作用于HL-60細(xì)胞可以導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷,損傷率具有明顯的劑量效應(yīng);聯(lián)合100μmol·L-1 T

5、rolox后,HL-60細(xì)胞DNA損傷明顯增強(qiáng)。DNA損傷可能是單獨(dú)及聯(lián)合作用引起細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及死亡的主要因素之一。
　　(3)As2O3聯(lián)合100μmol·L-1 Trolox可顯著影響細(xì)胞的周期分布,使細(xì)胞發(fā)生G2/M期周期阻滯;G2/M期阻滯可能是細(xì)胞DNA損傷激活檢驗(yàn)點(diǎn)的結(jié)果。姬姆薩和熒光染色的結(jié)果中細(xì)胞出現(xiàn)的多核狀態(tài),說(shuō)明也可能是藥物影響細(xì)胞骨架及分裂裝置構(gòu)建造成了 G2/M期阻滯。周期阻滯可能是 As2O3聯(lián)合100μ

6、mol·L-1 Trolox誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的上游事件。
　　(4)As2O3作用于 HL-60細(xì)胞可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧含量的增加,并表現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng);聯(lián)合100μmol·L-1Trolox后,低濃度 As2O3使得活性氧含量進(jìn)一步升高。
　　(5)流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示聯(lián)合組加入過(guò)氧化氫酶對(duì)細(xì)胞的凋亡率并沒(méi)有影響,說(shuō)明Trolox的增強(qiáng)As2O3誘導(dǎo)凋亡作用與細(xì)胞外H2O2的生成無(wú)關(guān)。
　　(6)在正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞