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文檔簡介
1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以豬的呼吸道癥狀、新生仔豬的高死亡率以及母豬繁殖障礙為特征的傳染病,對全球范圍內(nèi)的養(yǎng)豬業(yè)產(chǎn)生嚴重的危害。PRRS于1987年首次在美國被發(fā)現(xiàn),我國于1996年分離出PRRSV毒株。在2006年,我國爆發(fā)了高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(HP-PRRS),并迅速傳播至東南亞,造成了巨大的經(jīng)濟損失。近年來,PRRS一直是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要病毒感染性疾病。目前防治P
2、RRS的主要手段是疫苗免疫,但是PRRSV的易變異性及疫苗的安全性導(dǎo)致疫苗接種預(yù)防的效果并不理想,而至今尚無被批準的防治PRRS的藥物。因此,發(fā)展防控PRRS的新策略以及開發(fā)新型抗PRRSV藥物變得尤為緊迫。
我國傳統(tǒng)的中醫(yī)藥在病毒性疾病防治上發(fā)揮著重要的作用,從天然藥物中尋找抗PRRSV的藥物是一條重要途徑。原花青素(Procyanidin)和表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGC
3、G)均屬于茶多酚類化合物,具有抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、抗腫瘤等藥理活性,其中以抗氧化活性被人們所熟知,目前已廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、保健品等領(lǐng)域。本文對原花青素和EGCG體外抗PRRSV的活性進行了評價,并對其作用機制進行初步研究。
本研究建立了PRRSV感染Marc-145細胞模型,運用間接免疫熒光試驗的方法,從11種茶多酚類化合物中篩選出2種對PRRSV具有顯著抗病毒活性的化合物—原花青素和EGCG,在此基礎(chǔ)上對兩種
4、藥物開展了系統(tǒng)的藥效評價。病毒的mRNA和蛋白的合成水平分別采用熒光定量PCR、Western blot等方法測定。測定了原花青素和EGCG在感染后48 h的抗PRRSV藥效,以及感染后48 h內(nèi)不同時間點的藥效,還研究了藥物對PRRSV增殖的吸附、內(nèi)化、復(fù)制、釋放等不同階段的抑制效果,由此初步闡述原花青素和EGCG的抗PRRSV作用機制。
試驗結(jié)果表明,在感染后48 h,原花青素和EGCG在5~40μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈劑
5、量依賴性地顯著抑制PRRSV的增殖,并且40μg/mL的原花青素抑制效果優(yōu)于40μg/mL的利巴韋林。在感染后6~48 h內(nèi)的不同時間點,40μg/mL的原花青素和EGCG均能有效抑制PRRSV的NSP9 mRNA和N蛋白的合成,在第48 h時抑制效果優(yōu)于40μg/mL的利巴韋林。原花青素和EGCG在5~40μg/mL的濃度范圍對PRRSV的吸附、內(nèi)化和釋放的過程有明顯的抑制效果,且呈劑量依賴性;而40μg/mL的原花青素和EGCG對P
6、RRSV的合成和組裝階段有顯著的抑制作用。將藥物與PRRSV直接作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),5~40μg/mL的原花青素和EGCG均能使PRRSV感染Marc-145細胞的能力下降,呈劑量依賴性;而藥物與Marc-145細胞的預(yù)作用,則無法阻止PRRSV感染細胞。
本文首次發(fā)現(xiàn)原花青素具有體外抗PRRSV作用,并探討了原花青素和EGCG體外抗PRRSV的作用機制是通過抑制PRRSV病毒粒子本身以及抑制PRRSV增殖的吸附、內(nèi)化、復(fù)制和釋放
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