熱休克蛋白90抑制劑降低阿爾茨海默癥β淀粉樣肽的作用機(jī)制初步研究.pdf

1、目的：研究格爾德霉素(Geldanamycin，GA)對(duì)β淀粉樣肽(β-amyloid peptjde，Aβ)生成的影響，初步探討GA降低Aβ的作用機(jī)制。方法：利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體pCMV5，構(gòu)建β淀粉樣肽前體蛋白APP695(ainyloid beta-proteill precursor,，APP)全長(zhǎng)cDNA，以及三種缺失不同細(xì)胞內(nèi)吞信號(hào)的截短蛋白△NPXY、△YENP和△ε的重組質(zhì)粒。將上述四種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，篩選并

2、經(jīng)Western blotting鑒定，建立相應(yīng)的CHO細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。400nM GA處理細(xì)胞22小時(shí)后，用ELISA試劑盒檢測(cè)四種細(xì)胞株上清中分泌的Aβ量，同時(shí)Western blotting檢測(cè)細(xì)胞總的APP表達(dá)量。為了驗(yàn)證Hsp90抑制劑是否是通過激活熱休克蛋白家族另一成員——Hsp70，影響細(xì)胞分泌Aβ，將表達(dá)Hsp70的質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞并進(jìn)行檢測(cè)。另外，還采用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)了GA對(duì)Aβ生成的影響。結(jié)果：

3、與陰性對(duì)照相比，400nM GA處理22小時(shí)和過表達(dá)Hsp70，均可降低四種穩(wěn)定表達(dá)CHO細(xì)胞系(CHO/APP695、△NPXY、△YENP和△ε)上清中的Aβ量；其中CHO/APP695細(xì)胞系的Aβ量降低最明顯。Western blotting檢測(cè)細(xì)胞裂解液，顯示Hsp70表達(dá)可以使CHO/APP695細(xì)胞株總APP表達(dá)量明顯增多。結(jié)論：Hsp90抑制劑GA有可能是通過激活Hsp70的表達(dá)，降低Aβ產(chǎn)量，并且此過程可能涉及到Hsp7