乳腺癌淋巴結轉移、微轉移和孤立腫瘤細胞狀態(tài)下PTEN、MMP-9和CD4-CD8表達及其意義.pdf

1、區(qū)域淋巴結轉移狀態(tài)是乳腺癌臨床分期和決定輔助治療方案的重要依據(jù)之一，同時又是判斷乳腺癌預后最重要的獨立因素。在AJCC《癌癥分期手冊》第六版分期中將區(qū)分微轉移與孤立腫瘤細胞的標準進行了重新界定：微轉移是指轉移灶直徑超過0.2mm，但是不大于2mm，并且有組織學證據(jù)證明其具有惡性活性(增殖或者間質反應)；孤立腫瘤細胞(ITCs)是指最大直徑不大于0.2mm的單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞團，通常沒有組織學證據(jù)證明其具有惡性活性(增殖或者間質反應

2、)。乳腺癌的區(qū)域淋巴結轉移的發(fā)展過程是從孤立腫瘤細胞到微轉移，再形成淋巴結內廣泛轉移。這一發(fā)展過程中單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞團如何克服周圍淋巴細胞的影響生長和發(fā)展的機制尚不清楚，其在臨床上的意義亦有爭議。有人發(fā)現(xiàn)在無遠處轉移且常規(guī)染色沒有發(fā)現(xiàn)轉移的乳腺癌病人當中，通過免疫組化的方法，15％-90％病人區(qū)域淋巴結可檢測出孤立腫瘤細胞。有研究者認為這個發(fā)現(xiàn)是與臨床相關的預后指示因素之一，可作為選擇輔助治療的標準和評價輔助治療療效的指標。但不

3、少其他作者認為乳腺癌區(qū)域淋巴結內的單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞團部分可能不具有生物學意義，其臨床價值有待進一步研究。Dowlanthshahi指出淋巴結微小轉移灶對生存的影響需大樣本和經(jīng)10年以上的隨訪才能顯現(xiàn)出來。 PTEN基因是繼p53基因之后，另一改變較為廣泛的、與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關的抑癌基因。PTEN抑制腫瘤發(fā)生的功能主要是依靠脂質磷酸酶的活性，后者是磷酸肌醇通路的脂質脫磷酸，干擾PKB/Akt信號轉導。 基質金屬

4、蛋白酶(Matrixmetalloproteinascs，MMPs)是鋅離子依賴的內分泌蛋白酶。MMPs主要由體內單核細胞、組織中的巨噬細胞和相關的組織細胞等多種細胞分泌，它可以降解基底膜中的許多蛋白成分，而這些物質正是腫瘤細胞侵襲轉移的屏障，如膠原、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等，所以MMPs是一類與腫瘤的侵襲和轉移關系十分密切的蛋白水解酶。MMP-9是其中重要的一員，它以酶原的形式分泌，被激活之后，形成IV型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表

5、面細胞外基質的IV、V型膠原和明膠，然后腫瘤細胞沿著缺失的基底膜向周圍組織浸潤，最終導致腫瘤的侵潤和轉移。 CD4+細胞(T輔助細胞、Th細胞)主要通過分泌細胞因子及表面分子調節(jié)其他細胞的活性，對免疫反應的啟動、最終表現(xiàn)形式和強弱起關鍵作用。除此之外，CD4+淋巴細胞還引起T淋巴細胞自身的無反應性以及激活B淋巴細胞，促進體液免疫的發(fā)生。CD8+T細胞為Tc細胞，即CD8+殺傷性T細胞，又稱細胞毒性T淋巴細胞(CTL)。Tc細胞是

6、腫瘤細胞的殺傷作用的重要效應細胞?？商禺愋詺屑毎?其殺傷方式是使靶細胞裂解和凋亡。在殺傷靶細胞的過程中，Tc細胞自身不受損傷，可反復殺傷多個靶細胞。CD4+T細胞/CD8+T細胞比值可反映出機體的細胞免疫功能狀態(tài)。 本研究擬通過觀察乳腺癌腋窩淋巴結中單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞團、微轉移腫瘤細胞和明顯腫瘤細胞轉移時PTEN基因蛋白、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達變化以及轉移腫瘤周圍CD4+T細胞/CD8+T細胞數(shù)量和比值

7、變化，探討其在乳腺癌腋窩淋巴結中從單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞團到微腫瘤細胞轉移和明顯腫瘤細胞轉移發(fā)展過程中的意義。 研究對象和方法： 收集2005年6月～2006年3月在西南醫(yī)院乳腺中心住院手術的女性乳腺癌病人92例，年齡23歲～72歲，平均46.08±9.96歲。共收集淋巴結293枚。首先對常規(guī)HE染色陰性的乳腺癌患者腋窩淋巴結，運用免疫組化的方法（S-P法)行細胞角蛋白19(CK19)以及肌動蛋白染色，篩選出含有微轉移

8、、孤立腫瘤細胞的淋巴結。對篩選出的淋巴結行PTEN、MMP-9、CD4及CD8染色，觀察不同轉移情況下PTEN、MMP-9、CD4及CD8的表達情況，并在40X顯微鏡下對CD4+T淋巴和CD8+T淋巴細胞進行記數(shù)，以細胞膜出現(xiàn)棕褐色或棕黃色為陽性，記數(shù)200個細胞中的陽性細胞數(shù)。 主要結果： 1.通過CK19免疫組化染色觀察，所有293枚淋巴結中，無轉移的淋巴結為145枚(49.49％)，有明顯轉移的為84枚(28.67

9、％)，有微轉移的為42枚(14.33％)，孤立腫瘤細胞為22枚(7.51％)；通過平滑肌肌動蛋白的免疫組化染色，結果顯示所有明顯轉移灶周圍均有肌動蛋白表達，34枚(80.95％)含有微轉移的淋巴結中微轉移灶周圍有肌動蛋白表達； 2.PTEN在84枚含有明顯轉移的淋巴結中均呈低表達，在38枚含有微轉移的淋巴結中呈低表達，其余4枚未見PTEN表達；在所有84枚有明顯轉移的淋巴結中，MMP-9均呈陽性表達，其中66枚(78.57％)淋

10、巴結高表達(+++)，18枚(21.43％)為中度表達(++)；42枚含有微轉移的淋巴結中，1枚(2.38％)呈高表達(+++)，24枚(57.14％)淋巴結呈中度表達(++)，15枚(35.72％)淋巴結呈低表達(+)，2枚(4.76％)淋巴結無表達。22枚孤立腫瘤細胞中，3枚(13.64％)呈低表達，其余19枚(86.36％)淋巴結無表達。 3.CD4+細胞在有明顯轉移和無轉移的淋巴結之間有明顯差異(P＜0.05)，明顯轉移

11、與微轉移之間有明顯差異(P＜0.05)；CD8+細胞在有明顯轉移、微轉移及無轉移淋巴結之間沒有明顯差異(P＞0.05)；CD4+T/CD8+T在無轉移和含有微轉移淋巴結之間無明顯差異(P＞0.05)，無轉移和有明顯轉移之間有明顯差異(P＜0.05)。 主要結論： 1.淋巴結內間質反應中肌動蛋白表達變化在乳腺癌細胞進入淋巴結發(fā)展為微轉移灶及進一步發(fā)展為明顯轉移形成的過程中可能發(fā)揮重要的作用。 2.MMP-9的高表達