乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、微轉(zhuǎn)移和孤立腫瘤細(xì)胞狀態(tài)下PTEN、MMP-9和CD4-CD8表達(dá)及其意義.pdf

1、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)是乳腺癌臨床分期和決定輔助治療方案的重要依據(jù)之一，同時(shí)又是判斷乳腺癌預(yù)后最重要的獨(dú)立因素。在AJCC《癌癥分期手冊(cè)》第六版分期中將區(qū)分微轉(zhuǎn)移與孤立腫瘤細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了重新界定：微轉(zhuǎn)移是指轉(zhuǎn)移灶直徑超過0.2mm，但是不大于2mm，并且有組織學(xué)證據(jù)證明其具有惡性活性(增殖或者間質(zhì)反應(yīng))；孤立腫瘤細(xì)胞(ITCs)是指最大直徑不大于0.2mm的單個(gè)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞團(tuán)，通常沒有組織學(xué)證據(jù)證明其具有惡性活性(增殖或者間質(zhì)反應(yīng)

2、)。乳腺癌的區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)展過程是從孤立腫瘤細(xì)胞到微轉(zhuǎn)移，再形成淋巴結(jié)內(nèi)廣泛轉(zhuǎn)移。這一發(fā)展過程中單個(gè)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞團(tuán)如何克服周圍淋巴細(xì)胞的影響生長(zhǎng)和發(fā)展的機(jī)制尚不清楚，其在臨床上的意義亦有爭(zhēng)議。有人發(fā)現(xiàn)在無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移且常規(guī)染色沒有發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的乳腺癌病人當(dāng)中，通過免疫組化的方法，15％-90％病人區(qū)域淋巴結(jié)可檢測(cè)出孤立腫瘤細(xì)胞。有研究者認(rèn)為這個(gè)發(fā)現(xiàn)是與臨床相關(guān)的預(yù)后指示因素之一，可作為選擇輔助治療的標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)價(jià)輔助治療療效的指標(biāo)。但不

3、少其他作者認(rèn)為乳腺癌區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)的單個(gè)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞團(tuán)部分可能不具有生物學(xué)意義，其臨床價(jià)值有待進(jìn)一步研究。Dowlanthshahi指出淋巴結(jié)微小轉(zhuǎn)移灶對(duì)生存的影響需大樣本和經(jīng)10年以上的隨訪才能顯現(xiàn)出來。 PTEN基因是繼p53基因之后，另一改變較為廣泛的、與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的抑癌基因。PTEN抑制腫瘤發(fā)生的功能主要是依靠脂質(zhì)磷酸酶的活性，后者是磷酸肌醇通路的脂質(zhì)脫磷酸，干擾PKB/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 基質(zhì)金屬

4、蛋白酶(Matrixmetalloproteinascs，MMPs)是鋅離子依賴的內(nèi)分泌蛋白酶。MMPs主要由體內(nèi)單核細(xì)胞、組織中的巨噬細(xì)胞和相關(guān)的組織細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，它可以降解基底膜中的許多蛋白成分，而這些物質(zhì)正是腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的屏障，如膠原、層粘連蛋白和纖維連接蛋白等，所以MMPs是一類與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系十分密切的蛋白水解酶。MMP-9是其中重要的一員，它以酶原的形式分泌，被激活之后，形成IV型膠原酶，降解、破壞靠近腫瘤表

5、面細(xì)胞外基質(zhì)的IV、V型膠原和明膠，然后腫瘤細(xì)胞沿著缺失的基底膜向周圍組織浸潤(rùn)，最終導(dǎo)致腫瘤的侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。 CD4+細(xì)胞(T輔助細(xì)胞、Th細(xì)胞)主要通過分泌細(xì)胞因子及表面分子調(diào)節(jié)其他細(xì)胞的活性，對(duì)免疫反應(yīng)的啟動(dòng)、最終表現(xiàn)形式和強(qiáng)弱起關(guān)鍵作用。除此之外，CD4+淋巴細(xì)胞還引起T淋巴細(xì)胞自身的無反應(yīng)性以及激活B淋巴細(xì)胞，促進(jìn)體液免疫的發(fā)生。CD8+T細(xì)胞為Tc細(xì)胞，即CD8+殺傷性T細(xì)胞，又稱細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)。Tc細(xì)胞是

6、腫瘤細(xì)胞的殺傷作用的重要效應(yīng)細(xì)胞?？商禺愋詺屑?xì)胞.其殺傷方式是使靶細(xì)胞裂解和凋亡。在殺傷靶細(xì)胞的過程中，Tc細(xì)胞自身不受損傷，可反復(fù)殺傷多個(gè)靶細(xì)胞。CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞比值可反映出機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀態(tài)。 本研究擬通過觀察乳腺癌腋窩淋巴結(jié)中單個(gè)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞團(tuán)、微轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞和明顯腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)PTEN基因蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)變化以及轉(zhuǎn)移腫瘤周圍CD4+T細(xì)胞/CD8+T細(xì)胞數(shù)量和比值

7、變化，探討其在乳腺癌腋窩淋巴結(jié)中從單個(gè)腫瘤細(xì)胞或者腫瘤細(xì)胞團(tuán)到微腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和明顯腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移發(fā)展過程中的意義。 研究對(duì)象和方法： 收集2005年6月～2006年3月在西南醫(yī)院乳腺中心住院手術(shù)的女性乳腺癌病人92例，年齡23歲～72歲，平均46.08±9.96歲。共收集淋巴結(jié)293枚。首先對(duì)常規(guī)HE染色陰性的乳腺癌患者腋窩淋巴結(jié)，運(yùn)用免疫組化的方法（S-P法)行細(xì)胞角蛋白19(CK19)以及肌動(dòng)蛋白染色，篩選出含有微轉(zhuǎn)移

8、、孤立腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)。對(duì)篩選出的淋巴結(jié)行PTEN、MMP-9、CD4及CD8染色，觀察不同轉(zhuǎn)移情況下PTEN、MMP-9、CD4及CD8的表達(dá)情況，并在40X顯微鏡下對(duì)CD4+T淋巴和CD8+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)，以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕褐色或棕黃色為陽(yáng)性，記數(shù)200個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。 主要結(jié)果： 1.通過CK19免疫組化染色觀察，所有293枚淋巴結(jié)中，無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)為145枚(49.49％)，有明顯轉(zhuǎn)移的為84枚(28.67

9、％)，有微轉(zhuǎn)移的為42枚(14.33％)，孤立腫瘤細(xì)胞為22枚(7.51％)；通過平滑肌肌動(dòng)蛋白的免疫組化染色，結(jié)果顯示所有明顯轉(zhuǎn)移灶周圍均有肌動(dòng)蛋白表達(dá)，34枚(80.95％)含有微轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中微轉(zhuǎn)移灶周圍有肌動(dòng)蛋白表達(dá)； 2.PTEN在84枚含有明顯轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中均呈低表達(dá)，在38枚含有微轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中呈低表達(dá)，其余4枚未見PTEN表達(dá)；在所有84枚有明顯轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中，MMP-9均呈陽(yáng)性表達(dá)，其中66枚(78.57％)淋

10、巴結(jié)高表達(dá)(+++)，18枚(21.43％)為中度表達(dá)(++)；42枚含有微轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中，1枚(2.38％)呈高表達(dá)(+++)，24枚(57.14％)淋巴結(jié)呈中度表達(dá)(++)，15枚(35.72％)淋巴結(jié)呈低表達(dá)(+)，2枚(4.76％)淋巴結(jié)無表達(dá)。22枚孤立腫瘤細(xì)胞中，3枚(13.64％)呈低表達(dá)，其余19枚(86.36％)淋巴結(jié)無表達(dá)。 3.CD4+細(xì)胞在有明顯轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)之間有明顯差異(P＜0.05)，明顯轉(zhuǎn)移

11、與微轉(zhuǎn)移之間有明顯差異(P＜0.05)；CD8+細(xì)胞在有明顯轉(zhuǎn)移、微轉(zhuǎn)移及無轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)之間沒有明顯差異(P＞0.05)；CD4+T/CD8+T在無轉(zhuǎn)移和含有微轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)之間無明顯差異(P＞0.05)，無轉(zhuǎn)移和有明顯轉(zhuǎn)移之間有明顯差異(P＜0.05)。 主要結(jié)論： 1.淋巴結(jié)內(nèi)間質(zhì)反應(yīng)中肌動(dòng)蛋白表達(dá)變化在乳腺癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴結(jié)發(fā)展為微轉(zhuǎn)移灶及進(jìn)一步發(fā)展為明顯轉(zhuǎn)移形成的過程中可能發(fā)揮重要的作用。 2.MMP-9的高表達(dá)