水稻pi-hit-1基因的表達及相互作用蛋白的分析.pdf

1、Pi-hit-1是本實驗室采用差異顯示PCR（DD-PCR）的方法找到的一個新基因。該基因在空間誘變的稻瘟病敏感品系972-4中的表達水平高于其地面對照品系972ck，并且能夠被特定的稻瘟病生理小種誘導(dǎo)表達。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明該基因編碼ATP依賴的Clp蛋白酶。為了揭示該基因功能以及在水稻抗逆性中的作用機制，本文采用GST沉降技術(shù)從水稻組織總蛋白中尋找其相互作用蛋白。
　　利用本實驗室已構(gòu)建好的融合表達載體pGEX-Pi-HI

2、T-1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到GST-Pi-HIT-1融合蛋白。利用親和層析的方法純化得到融合蛋白GST-Pi-HIT-1。用GST沉降技術(shù)的方法以純化好的融合蛋白為誘餌，從水稻組織總蛋白中尋找能夠與其相互作用的蛋白。利用液相色譜-電噴霧-串聯(lián)質(zhì)譜分析，檢測到了七種相互作用蛋白，分別為翻譯延伸因子（Elongationfactor1-α）、非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白2前體（Nonspecificlipid-transferpro

3、tein2precursor）、Zincknuckle家族蛋白、Fip1結(jié)構(gòu)家族蛋白。另外還有三種功能完全未知的蛋白，分別含有鋅指結(jié)構(gòu)、BTB/POZ結(jié)構(gòu)域和TPR樣的結(jié)構(gòu)域。這些蛋白分別在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄及翻譯調(diào)控、細胞凋亡與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞周期調(diào)控、植物抗病反應(yīng)、植物的光合作用及呼吸作用，以及植物體的生長發(fā)育過程中發(fā)揮了作用。推測編碼這些蛋白的基因可能參與Pi-HIT-1相關(guān)的稻瘟病抗性改變過程。同時，pi-hit-1基因在上述生物學(xué)