抗菌肽Enbocin1基因在家蠶抵御白僵菌感染過程中表達特征及其抗真菌活性.pdf

1、白僵菌是家蠶重要的病原真菌，其感染家蠶引起的白僵病，往往對蠶桑業(yè)的生產(chǎn)造成巨大損失。目前，包括白僵菌在內(nèi)的真菌對家蠶的作用機理尚不明確。因此開展家蠶抗菌肽 enbocin1在抵御白僵菌感染過程中的功能研究，可解析家蠶對白僵菌感染免疫應答反應的分子機理，為從分子水平上闡明家蠶對白僵菌感染的防御機制和白僵菌對家蠶的致病機理提供新的實驗依據(jù)。
　　用白僵菌分生孢子體表接觸感染家蠶P50五齡起蠶，隨機收集感染組和對照組幼蟲在感染后10個不

2、同時間點的血淋巴、體壁、馬氏管、脂肪體。用real-time PCR檢測了 enbocin1基因在血淋巴、體壁、馬氏管、脂肪體組織的時空表達模式，結(jié)果顯示 enbocin1基因主要在脂肪體中上調(diào)表達明顯，而且上調(diào)表達持續(xù)至誘導后30h，而在馬氏管、體壁中差異表達不顯著，在血淋巴中幾乎檢測不到enbocin1的表達，表明enbocin1對家蠶抵御白僵菌感染可能具有重要作用。
　　構(gòu)建了重組表達載體 PET-30a(+)-Enboci

3、n1，轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌 BL21（DE3），成功地誘導表達并用 Ni-NTA親和層析純化獲得了高純度的重組蛋白enbocin1，經(jīng)SDS-PAGE檢測蛋白大小與預期的一致，約10.8kDa。測得重組蛋白濃度為10mg/mL。經(jīng)抑菌試驗表明其對白僵菌的生長具有較強抑制作用。成功制備了抗enbocin1的多克隆抗體，可用于檢測enbocin1的表達，為進一步深入研究enbocin1的功能及其機制奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究可為闡明其他類