條斑紫菜藻膽蛋白抗腫瘤及抗氧化活性研究.pdf

1、本文研究了從條斑紫菜中提取純化得到的藻膽蛋白在適當(dāng)波長(zhǎng)光源輻照下作為光敏劑治療惡性腫瘤的可行性以及其在避光條件下清除自由基，提高機(jī)體免疫力，起到抗氧化活性的作用。全文分四章。 第一章，作者綜述了近年來(lái)關(guān)于藻膽蛋白的研究進(jìn)展，腫瘤光動(dòng)力學(xué)的研究歷史和進(jìn)展以及從螺旋藻、多管藻等藻類(lèi)中提取得到的藻膽蛋白應(yīng)用于腫瘤光動(dòng)力學(xué)研究的嘗試。 第二章，首先通過(guò)應(yīng)用硫酸銨梯度鹽析法從條斑紫菜中分離得到藻膽蛋白粗提液。鹽析后上羥基磷灰石柱，

2、運(yùn)用不同濃度的PBS梯度洗脫收集得到紅色及藍(lán)色沈脫液再經(jīng)超濾膜后得到R-藻紅蛋白和C-藻藍(lán)蛋白溶液。對(duì)其經(jīng)行吸收光譜測(cè)定，蛋白純度均在4.0以上達(dá)到光動(dòng)力學(xué)治療的公認(rèn)要求。本章之后以藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白為主體，1000w碘鎢燈作光源，采用MTT法測(cè)定研究了不同濃度(10、25、50和100μg/mL)R-藻紅蛋白和C-藻藍(lán)蛋白分別介導(dǎo)的光動(dòng)力效應(yīng)對(duì)人肝癌細(xì)胞7721和人喉癌Hep-2細(xì)胞的生存率的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：兩種藻膽蛋白的光動(dòng)力作

3、用對(duì)7721和Hep-2細(xì)胞都具有殺傷作用。在濃度為100μg/mL，照射劑量為50 J/cm2的條件下，C-藻藍(lán)蛋白對(duì)應(yīng)的7721和Hep-2細(xì)胞的存活率分別72％為64％，R-藻紅蛋白對(duì)應(yīng)的僅為61％和57％；單用碘鎢燈處理，細(xì)胞的存活率都高于82％；而單獨(dú)使用這兩種藻膽蛋白處理細(xì)胞，24h后并未對(duì)其生長(zhǎng)造成抑制，但在持續(xù)培養(yǎng)72 h后，高濃度蛋白(50、100μg/mL)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)具有顯著的抑制效果。本章實(shí)驗(yàn)證明條斑紫菜R-藻紅蛋

4、白和C-藻藍(lán)蛋白可在碘鎢燈激激發(fā)下對(duì)7721和Hep-2細(xì)胞產(chǎn)生光敏殺傷作用。 第三章，作者在之前實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，換用氬離子激光器和He-Ne激光器作光源分別對(duì)應(yīng)激發(fā)R-藻紅蛋白及c-藻藍(lán)蛋白。在提高藻膽蛋白濃度的前提下，研究了包括藻膽蛋白介導(dǎo)的激光光敏對(duì)體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞7721的殺傷作用，光敏輻照后不同時(shí)間段7721細(xì)胞的凋亡率，同時(shí)通過(guò)建立小鼠B16腫瘤模型研究了不同濃度藻膽蛋白經(jīng)激光激發(fā)后對(duì)實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響情況。實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果表明，光子能量更強(qiáng)的激光器可進(jìn)一步提高藻膽蛋白在體外對(duì)7721細(xì)胞的殺傷作用，如120μg/MLR-藻紅蛋白在1OOJ/cm2累計(jì)能量輻照下對(duì)應(yīng)的細(xì)胞存活率僅為27％。同時(shí)，藻膽蛋白在經(jīng)激光輻照后可隨時(shí)間誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，120μg/mLC-藻藍(lán)蛋白在100的累計(jì)輻照能處理8h后對(duì)應(yīng)得到的7721的細(xì)胞凋亡率達(dá)32.54％。而通過(guò)對(duì)小鼠B16腫瘤模型的治療研究，作者發(fā)現(xiàn)1mg/mL及2mg/mL的R-藻紅蛋白在200J/cm2的氬離子激

6、光器的輻照下可于治療7天后抑制實(shí)體瘤的生長(zhǎng)。第四章主要研究條斑紫菜藻膽蛋白在避光條件下的抗氧化活性。在選用不同濃度藻膽蛋白粗體液對(duì)小鼠連續(xù)灌胃30天后，作者記錄了小鼠體重及免疫器官的變化數(shù)據(jù)，利用試劑盒檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)鼠血清的SOD、GSH-PX活力大小，肝組織MDA含量的高低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藻膽蛋白粗提液可增大小鼠的免疫器官；300mg/mL蛋白粗提液組可顯著提高小鼠血清SOD、GSH-PX的活力，顯著降低其肝組織MDA的生成。本文還研究了R