條斑紫菜藻膽蛋白抗腫瘤及抗氧化活性研究.pdf

1、本文研究了從條斑紫菜中提取純化得到的藻膽蛋白在適當(dāng)波長光源輻照下作為光敏劑治療惡性腫瘤的可行性以及其在避光條件下清除自由基，提高機體免疫力，起到抗氧化活性的作用。全文分四章。 第一章，作者綜述了近年來關(guān)于藻膽蛋白的研究進展，腫瘤光動力學(xué)的研究歷史和進展以及從螺旋藻、多管藻等藻類中提取得到的藻膽蛋白應(yīng)用于腫瘤光動力學(xué)研究的嘗試。 第二章，首先通過應(yīng)用硫酸銨梯度鹽析法從條斑紫菜中分離得到藻膽蛋白粗提液。鹽析后上羥基磷灰石柱，

2、運用不同濃度的PBS梯度洗脫收集得到紅色及藍色沈脫液再經(jīng)超濾膜后得到R-藻紅蛋白和C-藻藍蛋白溶液。對其經(jīng)行吸收光譜測定，蛋白純度均在4.0以上達到光動力學(xué)治療的公認要求。本章之后以藻紅蛋白和藻藍蛋白為主體，1000w碘鎢燈作光源，采用MTT法測定研究了不同濃度(10、25、50和100μg/mL)R-藻紅蛋白和C-藻藍蛋白分別介導(dǎo)的光動力效應(yīng)對人肝癌細胞7721和人喉癌Hep-2細胞的生存率的影響。實驗結(jié)果顯示：兩種藻膽蛋白的光動力作

3、用對7721和Hep-2細胞都具有殺傷作用。在濃度為100μg/mL，照射劑量為50 J/cm2的條件下，C-藻藍蛋白對應(yīng)的7721和Hep-2細胞的存活率分別72％為64％，R-藻紅蛋白對應(yīng)的僅為61％和57％；單用碘鎢燈處理，細胞的存活率都高于82％；而單獨使用這兩種藻膽蛋白處理細胞，24h后并未對其生長造成抑制，但在持續(xù)培養(yǎng)72 h后，高濃度蛋白(50、100μg/mL)對細胞生長具有顯著的抑制效果。本章實驗證明條斑紫菜R-藻紅蛋

4、白和C-藻藍蛋白可在碘鎢燈激激發(fā)下對7721和Hep-2細胞產(chǎn)生光敏殺傷作用。 第三章，作者在之前實驗研究的基礎(chǔ)上，換用氬離子激光器和He-Ne激光器作光源分別對應(yīng)激發(fā)R-藻紅蛋白及c-藻藍蛋白。在提高藻膽蛋白濃度的前提下，研究了包括藻膽蛋白介導(dǎo)的激光光敏對體外培養(yǎng)的人肝癌細胞7721的殺傷作用，光敏輻照后不同時間段7721細胞的凋亡率，同時通過建立小鼠B16腫瘤模型研究了不同濃度藻膽蛋白經(jīng)激光激發(fā)后對實體瘤生長的影響情況。實驗

5、結(jié)果表明，光子能量更強的激光器可進一步提高藻膽蛋白在體外對7721細胞的殺傷作用，如120μg/MLR-藻紅蛋白在1OOJ/cm2累計能量輻照下對應(yīng)的細胞存活率僅為27％。同時，藻膽蛋白在經(jīng)激光輻照后可隨時間誘導(dǎo)細胞凋亡，120μg/mLC-藻藍蛋白在100的累計輻照能處理8h后對應(yīng)得到的7721的細胞凋亡率達32.54％。而通過對小鼠B16腫瘤模型的治療研究，作者發(fā)現(xiàn)1mg/mL及2mg/mL的R-藻紅蛋白在200J/cm2的氬離子激

6、光器的輻照下可于治療7天后抑制實體瘤的生長。第四章主要研究條斑紫菜藻膽蛋白在避光條件下的抗氧化活性。在選用不同濃度藻膽蛋白粗體液對小鼠連續(xù)灌胃30天后，作者記錄了小鼠體重及免疫器官的變化數(shù)據(jù)，利用試劑盒檢測了實驗鼠血清的SOD、GSH-PX活力大小，肝組織MDA含量的高低。實驗結(jié)果表明藻膽蛋白粗提液可增大小鼠的免疫器官；300mg/mL蛋白粗提液組可顯著提高小鼠血清SOD、GSH-PX的活力，顯著降低其肝組織MDA的生成。本文還研究了R