Cox-2L啟動(dòng)子及SSTR-,2-基因重組腺病毒載體的構(gòu)建和鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文研究目的：構(gòu)建環(huán)氧合酶-2L啟動(dòng)子(Cox-2L)及2型生長(zhǎng)抑素受體(SSTR2)基因重組腺病毒載體，以研究SSTR2重新表達(dá)及腺病毒感染對(duì)胰腺癌細(xì)胞的影響。 研究方法：用RT-PCR法從人正常胰腺組織中調(diào)取SSTR2基因，以HL60細(xì)胞基因組DNA為模板，以PCR法調(diào)取Cox-2L基因，以SSTR2及Cox-2L基因片段為模板，以PCR法擴(kuò)增Cox-2L-SSTR2融合基因并連入Takara公司pAxcwit腺病毒載體中，

2、以電穿孔法轉(zhuǎn)化E.Coli后挑選陽性克隆進(jìn)行PCR及酶切鑒定。以pAxcwit-Cox-2L-SSTR2轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞獲得重組腺病毒顆粒，進(jìn)行PCR、酶切鑒定及病毒滴度測(cè)定。 研究結(jié)果：調(diào)取并連接后的基因片段經(jīng)測(cè)序證實(shí)為Cox-2L、SSTR2及Cox-2L-SSTR2融合基因，Cox-2L-SSTR2基因片段及PolyA克隆入T載體，經(jīng)酶切并測(cè)序證實(shí)PMD18-T-Cox-2L-SSTR2-PolyA構(gòu)建成功。pAxcw

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