線粒體能量依賴的蛋白酶LON下調(diào)對腫瘤細胞特性影響的研究.pdf

1、線粒體中的絲氨酸蛋白酶LON/PIM1執(zhí)行管家功能和調(diào)節(jié)功能；在高溫、缺氧、損傷等應(yīng)激情況下，LON蛋白酶對細胞的凋亡調(diào)控起著重要的作用。 本研究嘗試使用RNAi的方法來減少腫瘤細胞線粒體中絲氨酸蛋白酶LON的表達。應(yīng)用RT-PCR方法篩選了乳腺癌MCF-7細胞等8種具有代表性的腫瘤細胞系，結(jié)果顯示乳腺癌MCF-7細胞中LON基因的表達量較高，因此被選為研究LON基因RNA干涉的靶細胞。設(shè)計針對LON基因的siRNA并連入pSi

2、lencer2.1載體構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pSilencer-LON，經(jīng)瞬時與穩(wěn)定兩種轉(zhuǎn)染方式轉(zhuǎn)染MCF-7細胞。陽性克隆經(jīng)RT-PCR法評估LON基因表達量，同時設(shè)管家基因β-actin作為標(biāo)準(zhǔn)對照。 結(jié)果顯示LON基因的表達量在未轉(zhuǎn)染的細胞和轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒的細胞之間無明顯差別，但在轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pSilencer-LON的細胞中明顯降低。用MTT法檢測轉(zhuǎn)染細胞的生長活性，顯示轉(zhuǎn)染對照質(zhì)粒對細胞的生長活性無明顯影響(P＞0.05)，而轉(zhuǎn)染