基于IBV重組表達(dá)蛋白的抗體檢測(cè)技術(shù)及基因免疫研究.pdf

1、以近年從浙江、四川等地分離到的雞傳染性支氣管炎病毒腎致病型毒株以及傳統(tǒng)的IBV經(jīng)典毒株為材料，設(shè)計(jì)特異性引物，分別克隆了IBV的S1基因和N基因并測(cè)定序列，用DNAstar等軟件進(jìn)行分析。S1基因和N基因的序列比較顯示，國(guó)內(nèi)分離到的部分毒株間同源性最高(82.9％到98.6％)，但它們與傳統(tǒng)的毒株相比同源性較低。在分離株的S1基因和N基因序列中均發(fā)現(xiàn)了大量散在的點(diǎn)突變，而且在SC021202株和J株的S1基因中發(fā)現(xiàn)一段長(zhǎng)21nt的插入片

2、段，在以前的毒株中不存在。這些特征顯示國(guó)內(nèi)近年流行的一些IBV毒株是新的變異株，有著相對(duì)獨(dú)立的起源和進(jìn)化方向?！　≡诖竽c桿菌pBAD/his系統(tǒng)中表達(dá)了IBV的N蛋白，表達(dá)量約占菌體總蛋白的20％。同時(shí)在大腸桿菌pGEX表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)了IBVS蛋白的S1F表位片段和S1D表位片段。大腸桿菌中表達(dá)的N蛋白和S1蛋白均可與IBV多抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)，并通過(guò)Ni+柱純化出了表達(dá)的外源蛋白。此外，還將IBVS1基因構(gòu)建到酵母表達(dá)載體pP

3、ICZαB中，電轉(zhuǎn)化酵母X33菌株，得到四個(gè)陽(yáng)性克隆，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)可分泌型其中三株可表達(dá)IBV的S1糖蛋白，表達(dá)的蛋白可與多抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)?！　∫约兓降腘蛋白作為包被抗原建立了間接ELISA方法(N-ELISA)，可以檢測(cè)出雞血清中的抗IBVN蛋白的特異性抗體?！　∫约兓腘蛋白、S1D蛋白、S1F蛋白分別免疫BALB/c小鼠，通過(guò)雜交瘤技術(shù)制備除了8株抗N蛋白的單克隆抗體、3株抗S1D蛋白的單克隆抗體、6株抗S1F的單克隆抗