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1、DissertationSubmittedtoZhejiangGongshangUniversityforMaster’SDegreeofEngineeringBREEDINGMUljANTSWITHHIGHPRODUCTIONNUCLEASEP1BYGENOM匝SHUFFLINGANDPUR【FICATIONAuthor:YingyingHuangMajor:BiochemicalEngineeringSu[XinleLiang:Su
2、Dervlsor:ulangNov20lOCollegeofFoodScienceandBiotechnologyEngineering,ZhejiangGongshangUniversityHangzhou,310012,ERChina一嬲㈣㈣67mali浙江工商大學(xué)碩士學(xué)位論文世緲!!ff|必刪川jj『|ffIIjjⅧ|jII|_____l___l______Il________I___。I___I_。_。___。___‘_____
3、‘_。__________o__Jr一■■●’●●’●Genomeshuffling選育高產(chǎn)核酸酶P1的桔青霉菌株及其分離純化摘要桔青霉發(fā)酵產(chǎn)生的核酸酶P1(NucleaseP1)是一種具有重要應(yīng)用價(jià)值的酶制劑。大規(guī)模生產(chǎn)5’核苷酸是核酸酶P1的主要用途,而5’核苷酸在分子生物學(xué)中的用途頗廣,并且可廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)和生化制藥工業(yè)。所以,篩選高產(chǎn)核酸酶P1的菌種顯得尤為重要。而Genomeshuffling技術(shù)不僅避開了對復(fù)雜代謝網(wǎng)絡(luò)的
4、認(rèn)識和所希望表型決定基因的確定,還大大地提高了多基因控制表型菌種改良的可操作性。因此本論文采用Genomeshuffling選育核酸酶P1高產(chǎn)菌株,通過小室培養(yǎng)和RAPD圖譜觀察分析了融合子與出發(fā)菌株的形態(tài)差異以及高產(chǎn)菌株間的遺傳相似性,最后分離純化得到單一核酸酶P1。以實(shí)驗(yàn)室誘變篩選的6株桔青霉作為出發(fā)菌株,經(jīng)過6輪原生質(zhì)體融合,從362株融合子中篩選得到3株高產(chǎn)菌株。其中第6輪融合菌株G16的酶活達(dá)到176249U/mL,其活力比出
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