桑樹中三個氧化酶相關(guān)基因的克隆、序列分析及表達.pdf

1、外界逆境脅迫會使得植物體內(nèi)會產(chǎn)生大量活性氧而植物本身的代謝也會產(chǎn)生大量的活性氧，如果植物體內(nèi)的活性氧不能及時清除，將會嚴重毒害植物的生長和發(fā)育。我國是桑樹的起源中心，其中不少資源都具有果用價值、藥用價值、經(jīng)濟價值等。因而，開展桑樹氧化酶基因和過氧化物酶基因克隆、功能驗證及分析，不僅可以使桑樹氧化酶基因和過氧化物酶基因在分子水平被我們認識到其在桑樹不同條件下的表達調(diào)控情況，認識到桑樹貝殼杉烯氧化酶、桑樹過氧化物酶12以及桑樹伯胺氧化酶在桑

2、樹中的作用和功能；而且為以后能夠獲得抵抗外界不良環(huán)境的桑樹品種以及獲得高產(chǎn)量高優(yōu)質(zhì)的桑樹資源打下基礎(chǔ)。
　　1、桑樹貝殼杉烯氧化酶基因克隆研究和對它們的表達分析及序列分析
　　通過桑樹cDNA文庫以及軟件的應(yīng)用和各種實驗技術(shù)，本文首次獲得了1838 bp的片段的桑樹貝殼杉烯氧化酶基因并命名為 MmKO，含有開放讀碼框長為1551 bp，編碼516個氨基酸的蛋白，預測桑樹貝殼杉烯氧化酶的蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為58.563kD，等電點

3、為7.917。屬于p450超級家族。并與其他物種編碼貝殼杉烯氧化酶的氨基酸進行同源性比對和其他物種的貝殼杉烯氧化酶的基因序列進行進化樹分析。定量PCR結(jié)果表明，與正常生長環(huán)境相比，MmKO基因在干旱、鹽、ABA、SA四種非生物環(huán)境脅迫條件下，其表達調(diào)控水平都在不同時間點上會有上調(diào)的變動趨勢。
　　2、桑樹過氧化物酶12基因的克隆、序列分析及誘導表達分析
　　通過桑樹 cDNA文庫以及軟件的應(yīng)用和各種實驗技術(shù)，得到一段編碼桑樹

4、過氧化物酶12（MmPOD12）基因的一段序列，獲得含有完整開放閱讀框的cDNA長1482 bp，1個完整的開放閱讀框序列長度為789 bp，編碼對應(yīng)的氨基酸殘基個數(shù)為350個。預測其桑樹過氧化物酶12蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為37.004 kD，等電點為7.044。屬于過氧化物酶家族基因。在氨基酸的同源性比對中，MmPOD12基因在各物種間具有一定的保守性，也有差異性，和川桑保持比較接近的親緣關(guān)系。熒光定量PCR：MmPOD12基因的表達水平在

5、干旱、鹽、ABA、SA脅迫條件下都會產(chǎn)生不同成都的調(diào)控變化。
　　3、桑樹伯胺氧化酶2基因的克隆、序列分析及誘導表達分析
　　通過已構(gòu)建的桑樹幼葉 cDNA文庫以及軟件的應(yīng)用和各種實驗技術(shù)，獲得的桑樹伯胺氧化酶2含有完整開放閱讀框的cDNA長2597bp，含有的開放閱讀框序列比較完整并且長度為2364bp，編碼氨基酸蛋白數(shù)量是787個。預測其桑樹伯胺氧化酶2蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為87.53 kD，等電點為6.545。屬于銅胺氧化酶