?；蛆Z去氧膽酸對(duì)抗地塞米松誘導(dǎo)小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1凋亡的研究.pdf

1、膽汁酸在傳統(tǒng)上被認(rèn)為在脂質(zhì)吸收和膽固醇代謝中發(fā)揮重要作用，近年來，研究發(fā)現(xiàn)膽汁酸的作用較為復(fù)雜，不僅對(duì)脂質(zhì)代謝，而且可以通過作用于膽汁酸受體FXRα和TGR5在能量代謝、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、抗炎和抗細(xì)胞凋亡等多方面發(fā)揮藥理或生理作用。?；蛆Z去氧膽酸(Taurochenodeoxycholic Acid，TCDCA)作為膽汁酸的一類重要的結(jié)合型成分，以往研究發(fā)現(xiàn)其具有對(duì)抗糖皮質(zhì)激素不良反應(yīng)的作用，設(shè)計(jì)本課題就是為了進(jìn)一步揭示其對(duì)抗糖皮質(zhì)激素不良反

2、應(yīng)的機(jī)制。本課題以腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1作為研究對(duì)象，進(jìn)行了腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系的TGR5受體的干擾，就TCDCA對(duì)Y1細(xì)胞作用進(jìn)行系列研究。
　　對(duì)腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1的研究如下:采用二苯胺法檢測地塞米松誘導(dǎo)Y1細(xì)胞凋亡的DNA片段化百分率，結(jié)果表明DEX能夠增加Y1細(xì)胞的DNA片段化百分率。二苯胺法和TUNEL法檢測TCDCA對(duì)抗DEX誘導(dǎo)Y1細(xì)胞凋亡，與模型組相比較每個(gè)劑量TCDCA均可以極顯著的降低DNA片段化百分率，TUNEL

3、染色結(jié)果顯示與模型組相比較給藥后凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著降低，凋亡指數(shù)顯著減小。實(shí)時(shí)熒光定量檢測DEX對(duì)凋亡抑制基因影響結(jié)果顯示:不同劑量的DEX均能不同程度的上調(diào)CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達(dá)量，表明DEX啟動(dòng)了Y1細(xì)胞的凋亡程序，但凋亡抑制基因的上調(diào)并不是隨DEX劑量的增加而持續(xù)增加。給予不同劑量的TCDCA后，CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達(dá)量與模型組相比較均有不同程度下調(diào)，但與空白對(duì)照相比較CIAP-1、CIA

4、P-2、XIAP基因表達(dá)量仍然上調(diào)。利用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖的變化，DEX對(duì)Y1細(xì)胞的增殖有抑制作用，TCDCA可以極顯著的促進(jìn)Y1細(xì)胞的增殖，但DEX和TCDCA聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，TCDCA不表現(xiàn)出促細(xì)胞增殖作用。
　　對(duì)干擾后的腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系Y1的研究如下:使用RNA干擾技術(shù)對(duì)細(xì)胞系Y1TGR5受體進(jìn)行基因干擾，熒光定量檢測TGR5受體干擾效率，獲得干擾效率為47％可穩(wěn)定傳代的細(xì)胞系進(jìn)行以下系列試驗(yàn)。二苯胺法檢測DEX對(duì)干

5、擾后細(xì)胞的DNA片段化百分率，與干擾前相比較DNA片段化百分率無顯著變化，二苯胺法檢測TCDCA對(duì)抗DEX誘導(dǎo)干擾后Y1細(xì)胞的DNA片段化百分率，與模型組相比較TCDCA劑量為1μg/mL時(shí)，可極顯著的降低DNA片段化百分率。實(shí)時(shí)熒光定量檢測DEX對(duì)干擾后細(xì)胞凋亡抑制基因表達(dá)量的變化，不同劑量DEX仍可以上調(diào)CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表達(dá)，給予不同劑量TCDCA后， CIAP-2、XIAP基因表達(dá)量與模型組相比較可顯著下調(diào)

6、，CIAP-1的表達(dá)量無顯著變化，與空白對(duì)照相比較CIAP-2、XIAP表達(dá)量顯著上調(diào)，CIAP-1的表達(dá)量無顯著變化。使用CCK-8試劑盒檢測干擾后細(xì)胞增殖的變化，多個(gè)劑量的DEX均可極顯著的抑制干擾后細(xì)胞的增殖，TCDCA對(duì)干擾后的細(xì)胞無促增殖作用。
　　從以上結(jié)果可以得出如下結(jié)論:TCDCA可以對(duì)抗DEX誘導(dǎo)的Y1細(xì)胞的凋亡，TCDCA可以使凋亡抑制基因CIAP-1、CIAP-2、XIAP的表達(dá)下調(diào)，TCDCA可以促進(jìn)Y1細(xì)