雞痘病毒整合禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒基因的檢測分析.pdf

1、雞痘病毒(FPV)野毒和疫苗毒整合禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒(REV)全基因或基因片段的現(xiàn)象普遍存在，由此引起的生物風(fēng)險(xiǎn)分析已成為許多研究學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)。
　　 為進(jìn)一步研究FPV野毒和疫苗毒基因組中REV前病毒序列的整合情況，對山東泰安及周邊地區(qū)的14個(gè)FPV野毒分離株和國內(nèi)外不同廠家的5個(gè)FPV疫苗株進(jìn)行了REV前病毒整合區(qū)基因PCR擴(kuò)增、核苷酸序列測定及基因分析。結(jié)果表明：14個(gè)FPV野毒株均整合了幾乎全長的REV前病毒序列

2、，這些序列之間高度同源，與美國分離的FPV毒株AF246698整合的REV序列同源性最高，與REV標(biāo)準(zhǔn)株同源性較低；但是，疫苗株僅整合部分或完整的REV-LTR序列，國產(chǎn)與進(jìn)口疫苗株的整合序列長度不同，進(jìn)口疫苗整合了486bp的幾乎完整的REV-LTR序列，而國產(chǎn)疫苗整合的LTR片段普遍相對較小，僅為193bp。另外，與已報(bào)道的REV毒株相比，F(xiàn)PV野毒株整合的REV序列的env、gag和pol基因變異不大，但是LTR序列發(fā)生了明顯變異

3、，5'LTR長度為517bp，3’LTR長度為222bp，與國內(nèi)外已知的REV毒株相比，這些整合株的3’LTR變異較大，其長度明顯縮短。表明REV前病毒序列整合進(jìn)FPV野毒株過程中經(jīng)過了修飾，主要表現(xiàn)在兩端的LTR序列發(fā)生明顯變異、缺失，尤其是3’LTR的明顯缺失。然而，疫苗株整合的REV-LTR序列雖然高度同源，且整合模式極其相似，均表現(xiàn)為U5區(qū)和R區(qū)全部丟失及U3區(qū)的部分丟失，未丟失部分在殘余的5'LTR和3'LTR之間發(fā)生重排、缺

4、失、突變、替換等變異現(xiàn)象，而且比野毒株整合的REV-LTR序列長度明顯縮短。
　　 綜上，所分離的山東部分地區(qū)的FPV野毒株均整合全長REV序列，整合毒株已成為FPV流行的優(yōu)勢毒株；疫苗株僅整合REV-LTR序列，且疫苗株的整合序列長度不同，進(jìn)口疫苗整合了幾乎完整的REV-LTR序列，而國產(chǎn)疫苗整合片斷則相對較小。發(fā)生整合的FPV毒株的致病性變化，整合疫苗的安全性及對整合FPV野毒的免疫保護(hù)作用有待于進(jìn)一步研究。而關(guān)于疫苗整合R

5、EV-LTR序列長度不同，在疫苗效力、安全性等方面的差異有待進(jìn)一步研究。
　　 本課題的研究過程中，將收集的國內(nèi)外5個(gè)廠家的FPV疫苗通過PCR和IFA方法，進(jìn)行了傳染性REV病毒粒子的檢測，結(jié)果表明：5個(gè)廠家的雞痘疫苗中有一株存在REV病毒序列，并且可以在感染細(xì)胞上檢測到傳染性病毒粒子。該REV的env基因序列與近期分離的REV毒株同源性很高，在99.9％～100％之間；與本試驗(yàn)分離的FPV野毒株整合的PFV-REV-env序