萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因及其啟動子的特征和在卵巢周年發(fā)育中的研究.pdf

1、萍鄉(xiāng)紅鯽(pingxiangred-transparentcruciancarp,carassiusauratusvar.Pingxiangnesis),通體透明,體呈肉紅色,是江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)分布的一種天然三倍體野生鯽魚的突變種。在2008年被國家水產(chǎn)原、良種委員會審定為一個新的養(yǎng)殖品種。經(jīng)過連續(xù)多代人工選育,得到生長速度快、適應(yīng)性強、營養(yǎng)價值高、易養(yǎng)易繁、抗病力強等優(yōu)良經(jīng)濟性狀,且遺傳性狀基本穩(wěn)定的后代?，F(xiàn)已證實萍鄉(xiāng)紅鯽具有兩性生殖和

2、雌核發(fā)育兩種生殖方式。在對銀鯽、果蠅等一些生物的研究中,Hira基因在雌核發(fā)育中與精核解凝有關(guān)。實驗從三個方面對萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因做了相關(guān)工作,以探討其在萍鄉(xiāng)紅鯽生殖調(diào)控中的作用。一、實驗采用RACE-PCR技術(shù)克隆得到萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因cDNA全長,序列全長為3851bp,開放閱讀框3033bp,編碼1010個氨基酸。通過氨基酸序列比對,同源分析發(fā)現(xiàn)Hira基因存在較大的種屬特異性和穩(wěn)定性。萍鄉(xiāng)紅鯽HIRA蛋白與銀鯽、普通鯽魚及斑

3、馬魚的HIRA蛋白同源性較高,與兩棲類、爬行類、鳥類以及哺乳類動物的HIRA蛋白同源關(guān)系較遠。信號肽分析表明Hira基因無信號肽,推測HIRA蛋白可能為可溶性蛋白于細胞質(zhì)基質(zhì)或進入細胞核發(fā)揮功能,符合其作為組蛋白伴侶而行使調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的特性。二、利用GenomeWalker法進行Hira基因啟動子的步移,經(jīng)過2次步移,測序后MEGA軟件拼接得到啟動子序列3.6kb。Proscan軟件分析表明在Hira基因翻譯起始位點ATG上游-1278

4、bp～-1035bp段可能為基因的強啟動區(qū),含有1個TATA-BOX,1個CAATBOX,1個EBOX和一個POU1F1a,這些結(jié)構(gòu)域序列可能對于Hira基因的表達,起到了重要的調(diào)控作用。三、利用熒光定量PCR方法檢測了Hira基因在萍鄉(xiāng)紅鯽自出苗后至性腺成熟的成體魚的卵巢組織中的表達變化情況。結(jié)果顯示,Hira基因在卵巢組織巾表達的周年內(nèi)總體表現(xiàn)為上升趨勢,出苗后1～5月齡表達量較小,在第6月齡突然增加,相對量達到3月齡時的1947倍