氧化豆油對草魚(Ctenopharyngodon idellus)腸道粘膜原代細(xì)胞的損傷作用及其保護(hù)的研究.pdf

1、本研究以草魚為試驗(yàn)動(dòng)物，建立規(guī)范的草魚IECs原代培養(yǎng)操作方法及生長效果評價(jià)指標(biāo)，并以氧化豆油水溶物、丙二醛、酵母培養(yǎng)物水溶物為對象，分別試驗(yàn)對應(yīng)111.06～888.48g/L氧化豆油的水溶物、1.23～9.89μmol/L丙二醛、對應(yīng)10～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物、50～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物與4.94～9.89μmol/L丙二醛聯(lián)合使用下對草魚IECs原代細(xì)胞生長的影響。
　　 結(jié)果：表明：采用機(jī)械刮取消

2、化法進(jìn)行腸道粘膜組織的消化，離心轉(zhuǎn)速以400r/min為宜；在使用M199培養(yǎng)液、6％濃度CO2、15%濃度胎牛血清、接種濃度為2000（個(gè)／孔）條件下可批量復(fù)制草魚原代腸道粘膜細(xì)胞。采用熒光倒置顯微鏡觀察法與Giemsa染色法，MTT檢測法及培養(yǎng)液中AKP與LDH/MTTOD能系統(tǒng)、有效的評價(jià)細(xì)胞生長效果。
　　 與對照組相比，培養(yǎng)液中對應(yīng)中添加111.06～888.48g/L氧化豆油的水溶物在作用12h內(nèi)對草魚IECs原代細(xì)

3、胞細(xì)胞生長、細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞分化成熟產(chǎn)生了抑制，其作用程度與添加濃度、作用細(xì)胞時(shí)間具有依賴性，其對細(xì)胞結(jié)構(gòu)及細(xì)胞抗氧化能力造成一定程度的影響，其中添加對應(yīng)888.48g/L氧化豆油的水溶物在12h內(nèi)極顯著降低了細(xì)胞活性及培養(yǎng)液中AKP酶活力（P＜0.01），對細(xì)胞形態(tài)有損傷,3～9h內(nèi)極顯著增高培養(yǎng)液中LDH/MTTOD值(P＜0．01)，顯著降低了培養(yǎng)液中SOD酶活力及T-AOC能力（P＜0.05）。
　　 與對照組相比，添加終

4、濃度為4.94、9.89μmol/L的丙二醛對草魚IECs原代細(xì)胞的細(xì)胞生長有顯著抑制，在3～6h能極顯著抑制細(xì)胞生長（P＜0.01），在12h內(nèi)能極顯著降低細(xì)胞總蛋白含量（P＜0.01）,3h時(shí)極顯著增高培養(yǎng)液中LDH/MTTOD值(P＜0.01)，6h時(shí)極顯著降低培養(yǎng)液中GSH-PX酶活力（P＜0.01）,3、9h時(shí)極顯著降低培養(yǎng)液中T-AOC能力(P＜0.01)，培養(yǎng)液中SOD酶活力變化不顯著。丙二醛與含相同濃度丙二醛的氧化豆油水

5、溶物對草魚IECs原代細(xì)胞的損傷有相似性。
　　 與對照組相比，單獨(dú)添加終濃度為50～200mg/L的酵母培養(yǎng)物水溶物在3～6h對細(xì)胞生長有促進(jìn)作用，其中3h時(shí)細(xì)胞增殖率最高可提高42.83%。聯(lián)合使用酵母培養(yǎng)物水溶物及丙二醛時(shí)，添加對應(yīng)50～200mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物對4.94、9.89μmol/L丙二醛導(dǎo)致的細(xì)胞損傷有一定程度保護(hù)作用，但并未能使細(xì)胞恢復(fù)至對照組水平。與單獨(dú)添加4.94μmol/L濃度丙二醛相比，添加1

6、00mg/L酵母培養(yǎng)物的水溶物對下在6、12h極顯著增高細(xì)胞活性(P＜0.01),3～12h內(nèi)極顯著增高細(xì)胞總蛋白含量(P＜0.01),3、6h極顯著降低了LDH/MTTOD值(P＜0.01)，一定程度提高了培養(yǎng)液中GSH-PX、SOD酶活力及T-AOC能力。
　　 從細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)來看，在培養(yǎng)液中添加對應(yīng)444.24g/L氧化豆油的水溶物與添加終濃度為4.94μmol/L丙二醛在9h內(nèi)均導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)透明呈氣球樣，同時(shí)胞漿空泡變