染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)過(guò)敏性腹瀉小鼠腸道微生物區(qū)系的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、近年來(lái),食物過(guò)敏呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。食物過(guò)敏與腸道微生物的紊亂有關(guān),但是食物過(guò)敏導(dǎo)致哪些微生物變化?微生物在食物過(guò)敏中起到什么作用?目前相關(guān)報(bào)道并不多見。由于斷絕食物過(guò)敏原比較困難,益生元以作為一種新型療法引入到食物過(guò)敏的預(yù)防和治療。染料木素作為一種植物雌激素對(duì)人類有多種益處。為闡明食物過(guò)敏性腹瀉與微生物之間的關(guān)系,染料木素是否能改善食物過(guò)敏性腹瀉,以及染料木素改善食物過(guò)敏腹瀉的微生物學(xué)機(jī)制。本研究采用PCR/DGGE和real-time P

2、CR分子技術(shù),從糞樣、結(jié)腸內(nèi)容物和結(jié)腸粘膜三部分研究染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)腹瀉小鼠微生物區(qū)系的影響。
   一染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)雌性BALB/c小鼠過(guò)敏性腹瀉的影響
   試驗(yàn)采用32只清潔級(jí)雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組(N)、陽(yáng)性對(duì)照組(P)、低劑量染料木素組(L)和高劑量染料木素組(H)四組,每組8只小鼠,N組和P組飼喂無(wú)豆日糧,L紐和H組飼喂在無(wú)豆日糧基礎(chǔ)上分別添加10mg/kg和100mg/kg染料

3、木素的日糧,經(jīng)過(guò)腹腔注射致敏和OVA灌胃攻毒,成功建立了過(guò)敏性腹瀉模型。小鼠在2、15和33天平均采食量明顯下降,經(jīng)過(guò)校正,低劑量染料木素組實(shí)際攝入量(mg/kg BW)為1.22,高劑量染料木素組實(shí)際攝入量為12.19。小鼠在32天開始出現(xiàn)腹瀉,從32天到38天各組腹瀉小鼠數(shù)量開始增加,并且小鼠平均體重有下降趨勢(shì)。小鼠38天腹瀉情況為:N組沒(méi)有出現(xiàn)腹瀉,P組和H組腹瀉嚴(yán)重,L組腹瀉減輕。
   二染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)過(guò)敏性腹

4、瀉小鼠糞樣微生物區(qū)系的影響
   本實(shí)驗(yàn)選取不同天數(shù)小鼠糞樣,利用PCR/DGGE技術(shù)研究了染料木素對(duì)OVA誘導(dǎo)腹瀉小鼠糞樣微生物區(qū)系的影響。DGGE分析顯示:28天小鼠糞樣微生物各個(gè)組別沒(méi)有差異;38天低染料木素組出現(xiàn)一條特異性條帶;稀糞樣微生物區(qū)系多樣性明顯降低,H組特異條帶與梭菌屬相似性高,可能和H組腹瀉有關(guān);全程DGGE圖譜顯示:同組中不同天數(shù)小鼠糞樣微生物區(qū)系相似,稀糞樣微生物區(qū)系多樣性明顯降低,高染料木素組條帶6出現(xiàn)

5、,條帶7消失。結(jié)果顯示:致敏對(duì)小鼠糞樣微生物區(qū)系沒(méi)有影響;稀糞樣微生物多樣性顯著降低;染料木素可以誘導(dǎo)某些菌群的富集,可能與腹瀉相關(guān)。
   三染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)過(guò)敏性腹瀉小鼠結(jié)腸內(nèi)容物微生物菌群的影響
   本實(shí)驗(yàn)研究染料木素對(duì)第38天OVA誘導(dǎo)腹瀉小鼠結(jié)腸微生物菌群的影響,DGGE和Real-time PCR分析結(jié)腸內(nèi)容物細(xì)菌菌群。DGGE分析顯示:與N組相比,P組多樣性顯著降低,同組(P組和L組)內(nèi),正常和腹瀉

6、小鼠樣品間稍有差異,但是其相似性高于組間相似性。定量結(jié)果表明:相比于N組,P組、L組和H組總菌的拷貝數(shù)增加,雙歧桿菌的拷貝數(shù)顯著降低,梭菌Ⅳ群和大腸桿菌的拷貝數(shù)沒(méi)有發(fā)生顯著變化;相比于N組和L組,P組乳酸桿菌拷貝數(shù)顯著下降,H組下降但不顯著;相比于L組,H組擬桿菌拷貝數(shù)顯著增加。結(jié)論:腹瀉小鼠結(jié)腸菌群多樣性降低,乳酸桿菌和雙歧桿菌拷貝數(shù)降低;OVA致敏誘導(dǎo)使小鼠總菌拷貝數(shù)增加,雙歧桿菌減少;低染料木素組可減輕腹瀉,相比于腹瀉組別小鼠(P

7、組和H組),乳酸桿菌拷貝數(shù)增加,染料木素緩解腹瀉的作用可能與其增加乳酸桿菌的拷貝數(shù)有關(guān)。
   四染料木素對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)過(guò)敏性腹瀉小鼠結(jié)腸粘膜微生物菌群的影響
   本實(shí)驗(yàn)研究染料木素對(duì)第38天OVA誘導(dǎo)腹瀉小鼠結(jié)腸粘膜微生物菌群的影響,以DGGE和Real-time PCR技術(shù)分析結(jié)腸粘膜細(xì)菌菌群。DGGE分析顯示:組別之間出現(xiàn)條帶差異,相似性分析不同組別分布在不同的簇。定量結(jié)果表明:各組別間總菌的拷貝數(shù)和擬桿菌的拷貝

8、數(shù)差異不顯著,但是相對(duì)于N組,P組、L組和H紐擬桿菌占總菌比例都增加,P組有增高趨勢(shì),H組增加極顯著;相對(duì)于N組,L組的乳酸桿菌拷貝數(shù)顯著增高,P組拷貝數(shù)有升高趨勢(shì);相對(duì)于N組和L組,P組和H組大腸桿菌的拷貝數(shù)降低,P組和L組差異顯著。結(jié)論:相比于N組和L組,腹瀉小鼠(P組和H組)擬桿菌占總菌的比例增加,大腸桿菌拷貝數(shù)減少;OVA致敏誘導(dǎo)使小鼠結(jié)腸粘膜乳酸桿菌的拷貝數(shù)增加。低染料木素組可減輕腹瀉,相比于N組,低染料木素組(L)粘膜乳酸桿

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