一株雞源性腸炎沙門氏菌MLST分型及三型分泌系統基因分析.pdf

1、腸炎沙門氏菌是一種致病菌，該菌主要引起畜禽的胃腸炎以及人類腸炎和食物中毒。近年來，腸炎沙門氏菌已成為引起胃腸炎和食物中毒的主要病原菌之一，隨著由腸炎沙門氏菌引起的病例不斷上升，該菌不僅嚴重阻礙了養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，而且還威脅著人畜健康，已經成為公共衛(wèi)生所關注的問題。因此，深入了解該菌有利于更好地對該菌所引起的感染進行防治。腸炎沙門氏菌的侵入動物機體以及致病性與三型分泌系統密切相關，研究腸炎沙門氏菌的三型分泌系統有利于深入分析腸炎沙門氏菌的致病

2、性。
　　 本次試驗對臨床分離的一株疑似腸炎沙門氏菌的臨床分離菌進行鑒定，通過鑒定以確定其是否為一株腸炎沙門氏菌并確定其血清型。運用多位點序列分型技術對該株腸炎沙門氏菌進行分型，了解該株腸炎沙門氏菌的基因序列型。通過藥物敏感性試驗分析腸炎沙門氏菌的耐藥性，從分子生物學角度分析其耐藥機理。分析腸炎沙門氏菌的三型分泌系統基因來了解其基因特點，并分析不同細菌三型分泌系統的基因序列差異。
　　 本次試驗運用培養(yǎng)特性、生化試驗、血

3、清學試驗、分子生物學試驗對于該株細菌進行鑒定，應用多位點序列分型(MLST)對該株細菌進行分型。MLST試驗方法規(guī)定的7個管家基因分別為thrA、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA、aroC，根據PubMLST(http://pubmlst.org)試驗要求設計了7個管家基因的引物，分別擴增測序。運用K-B紙片法檢測該株細菌的耐藥性，根據耐藥性試驗結果設計13對引物擴增細菌基因組內耐藥基因。血清學方法調查該株細菌在山東省蛋

4、雞群中流行情況。測序分析三型分泌系統的基因序列，從分子生物學角度進行分析。
　　 該株臨床分離細菌培養(yǎng)特性方面符合沙門氏菌的培養(yǎng)特性，生化試驗結果顯示該株沙門氏菌根據《伯杰氏手冊》關于腸炎沙門氏菌生化反應特征的標準，該株細菌符合腸炎沙門氏菌的生化特征。16srRNA基因測序結果顯示該株細菌與雞腸炎沙門氏菌P125109同源性達100％。動物回歸性試驗結果顯示該株細菌致病性與腸炎沙門氏菌相同并且分離鑒定結果與腸炎沙門氏菌相符。血清

5、學試驗結果確定其血清型為O3，19(+)；O9(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，多位點序列分型結果顯示該株細菌基因型為ST11。用自制的凝集抗原對采集自山東省泰安市、萊蕪市、濟寧市、濱州市、日照市、濰坊市、臨沂市的690份血樣進行的檢測，檢測結果顯示陽性率2.2％，陰性率97.8％。藥敏結果顯示腸炎沙門氏菌耐受多種藥物。腸炎沙門氏菌耐藥基因擴增中擴增出ant(6)-iv基因、OXA-10基因、OXA-1基因、CTX-M-9

6、基因、TEM基因與預期目的片段大小一致。三型分泌系統試驗結果顯示該株腸炎沙門氏菌的sipa基因、sipd基因沒有出現變異，但是三型分泌系統的sipa基因與sipd基因在比對過程中發(fā)現沙門氏菌親緣關系相近的這兩個基因同源性高。
　　 通過試驗結果顯示該株細菌為腸炎沙門氏菌血清型為O3，19(+)；O9(+)；Hg，p(+)；Hg(+)；Hm(+)，基因型為ST11，該株細菌在全世界范圍內皆有流行。該株型號為ST11的腸炎沙門氏菌在