Fat-1轉(zhuǎn)基因牛的基礎(chǔ)性研究.pdf

1、ω-3 PUFAs對人類及其他哺乳動物的健康極其重要，富含ω-3 PUFAs可以調(diào)節(jié)許多基因的表達進而影響細胞的增值、生長、凋亡以及細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，上述這些作用對動脈粥硬化、高血壓、冠心病、精神疾病與各種癌癥有重要影響。但是人類與哺乳動物不能在體內(nèi)合成ω-3 PUFAs，需由食物中攝取來滿足需要。Fat-1基因編碼ω-3 PUFAs脫氫酶，它是ω-3 PUFAs合成的關(guān)鍵基因，可以將ω-6 PUFAs轉(zhuǎn)化為ω-3 PUFAs，從而提高機體

2、內(nèi)ω-3 PUFAs的含量。本實驗通過動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)將fat-1基因轉(zhuǎn)入牛的基因組中，利用動物克隆技術(shù)產(chǎn)生ω-3 PUFAs的轉(zhuǎn)基因牛。對轉(zhuǎn)基因牛中外源基因拷貝數(shù)的檢測和對牛基因組表達影響的研究對認識 fat-1轉(zhuǎn)基因牛有重要意義。本實驗主要利用Real-time PCR技術(shù)與芯片技術(shù)分別檢測了外源基因的拷貝數(shù)和對?；蚪M的影響。本試驗得到的結(jié)果如下：
　　1.轉(zhuǎn)基因陽性牛的檢測
　　本實驗首先用PCR法對兩頭轉(zhuǎn)基因牛進行初

3、步檢測，然后再采用Southern雜交技術(shù)做進一步的鑒定，結(jié)果顯示兩種方法得到了一致的結(jié)果，證明兩頭轉(zhuǎn)基因牛是陽性牛，可以進行后續(xù)試驗。
　　2.轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測
　　本實驗采用絕對定量 PCR法檢測外源基因拷貝數(shù)。標準曲線為：Log2N=-3.16Ct+40.76（R2=0.9942），兩頭轉(zhuǎn)基因牛中外源基因拷貝數(shù)分別為4.62±1.03，5.46±1.26。
　　3.外源基因?qū)θ蚪M表達的影響
　　本實驗