角蠅體內(nèi)斯氏副柔線蟲(chóng)的觀察及COI基因特異性序列分析.pdf

1、斯氏副柔線蟲(chóng)（Parabronema skrjabini）是一種寄生于駱駝皺胃的寄生性線蟲(chóng)，其中間宿主是西方角蠅(Haematobia irritans）和截脈角蠅(Haematobia titillans）。為了明確我國(guó)雙峰駝養(yǎng)殖地區(qū)斯氏副柔線蟲(chóng)對(duì)角蠅的感染情況、寄生部位，斯氏副柔線蟲(chóng)所在副柔屬的歸科問(wèn)題，以及尋找一種適合于該病生前診斷方法的遺傳標(biāo)記。本文統(tǒng)計(jì)了雙峰駝生活環(huán)境中角蠅體內(nèi)斯氏副柔線蟲(chóng)的感染率和感染強(qiáng)度，明確了其寄生部位；

2、并利用PCR技術(shù)擴(kuò)增分析了斯氏副柔線蟲(chóng)線粒體 DNA的COI基因序列，在此基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)出了特異性引物并加以驗(yàn)證。結(jié)果如下：
　　采用生物解剖法對(duì)采集于內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特后旗的176只角蠅（西方角蠅64只，截脈角蠅112只）進(jìn)行了剖解，共有38只為陽(yáng)性，感染率為21.59％。其中西方角蠅中13只為陽(yáng)性，感染率為20.31%，最大感染強(qiáng)度為32條/只，平均感染強(qiáng)度是8條/只；截脈角蠅中25只為陽(yáng)性，感染率為22.32%，最大感染強(qiáng)度

3、為23條/只，平均感染強(qiáng)度是9條/只。斯氏副柔線蟲(chóng)幼蟲(chóng)主要寄生在角蠅的消化道內(nèi)。
　　利用PCR方法，以線蟲(chóng)COI基因通用引物NTF、NTR擴(kuò)增內(nèi)蒙古不同地區(qū)的斯氏副柔線蟲(chóng)線粒體 DNA COI基因。將擴(kuò)增產(chǎn)物純化后克隆并測(cè)序。經(jīng) DNAStar5.0和MEGA4.0分析，結(jié)果表明：擴(kuò)增出的COI基因序列均為689bp，不同地區(qū)樣本間的COI基因無(wú)差異；斯氏副柔線蟲(chóng) COI基因與旋尾目（Spirurata）中旋尾科（Spiruri

4、dae）、柔線科（Habronematidae）和吸吮科（Thelaziidae），絲蟲(chóng)目（Filariata）盤(pán)尾科（Onchocercidae）某些線蟲(chóng)的同源性為79.8%～87.4%，遺傳距離為0.137～0.232?；贑OI基因構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)表明，副柔屬歸于柔線科更符合生物進(jìn)化的規(guī)律。
　　以COI基因設(shè)計(jì)并合成特異性引物STF、STR，利用PCR方法對(duì)斯氏副柔線蟲(chóng)基因組進(jìn)行特異性擴(kuò)增后可得到約600bp的條帶。敏感性