復(fù)方黑面神軟膏制備工藝研究

1、<p>　　復(fù)方黑面神軟膏制備工藝研究</p><p>　　摘要：目的 建立復(fù)方黑面神軟膏處方黑面神中表兒茶素和苦參中苦參堿含量的測(cè)定方法，優(yōu)化提取工藝條件，并優(yōu)選以聚乙二醇4000、聚乙二醇400、聚山梨酯80、丙三醇和羥苯乙酯制備復(fù)方黑面神軟膏的最佳基質(zhì)配比。 方法 采用HPLC法測(cè)定表兒茶素和苦參堿的含量，分別運(yùn)用正交試驗(yàn)考察浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)表兒茶素和苦參堿含量的影響。采用L

2、9（34）正交試驗(yàn)法，以軟膏的外觀性狀、延展性、穩(wěn)定性、稠度和PH等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選基質(zhì)比例。結(jié)果 表兒茶素在0.0084~0.0336g·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程y=13346x+11.632，r=1.0000，最佳水提工藝：藥材加20倍量水浸泡45 min，80℃溫浸提取2次，每次1 h?？鄥A在0.0294~0.588g·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程y=1714.9x-3.8355，r=0.9999。最

3、佳提取工藝：藥材加20倍水浸泡45min，提取兩次，每次1h。篩選出來(lái)的復(fù)方黑面神軟膏基質(zhì)的最佳配比為聚乙二醇4000:聚乙二醇400:聚山梨酯80:丙三醇=（6:1:0.1:0.5）。結(jié)論 HPLC法測(cè)定復(fù)方黑面神軟膏處方的含量操作</p><p>　　關(guān)鍵詞：復(fù)方黑面神軟膏；高效液相色譜法；基質(zhì)；正交試驗(yàn)</p><p>　　The Preparation Process Resear

4、ch Of Compound Breynia Fruticosa Ointment</p><p>　　Abstract: Objective To establish a method for determining epicatechin and matrine in Compound Breynia fruticosa ointment and optimize the extraction condir

5、ions． And optimize the optimum proportion of matrix for the preparation process of Compound Breynia fruticosa Ointnent by PEG4000 ，PEG400，Tween-80，glycerin and ethylparaben. Methods The content of epicatechin in le

6、aves of Breynia fruticosa and matrine of Separation Flavescens was detemined by using HPLC. Pereating time,ratio of solid t</p><p>　　Keywords: Compound Breynia fruticosa Ointnent，HPLC，Matrix，Orthogonal test

7、</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要Ⅰ</b></p><p>　　AbstractⅡ</p><p><b>　　1 前言1</b></p><p><b>　　2 材料與儀器2<

8、/b></p><p><b>　　2.1 儀器2</b></p><p><b>　　2.2 對(duì)照品2</b></p><p><b>　　2.3 試劑2</b></p><p><b>　　2.4 樣品3</b></p>&

9、lt;p><b>　　3 方法與結(jié)果3</b></p><p>　　3.1 指標(biāo)成分含量測(cè)定4</p><p>　　3.2 正交試驗(yàn)7</p><p>　　3.3 基質(zhì)配比優(yōu)選工藝13</p><p><b>　　4 討論14</b></p><p>　　4.

10、1 指標(biāo)成分含量測(cè)定分析14</p><p>　　4.2 基質(zhì)配比優(yōu)選工藝分析15</p><p><b>　　5 結(jié)論15</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)17</b></p><p><b>　　綜述18</b></p><p>

11、;<b>　　致謝25</b></p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　黑面神為大戟科植物黑面神Breynia fruticosa(L.)Hook.f.的干燥全株，2010 版《中國(guó)藥典》附錄25 以鬼畫(huà)符收載[1]。分布在我國(guó)南部及云南、貴州、浙江和福建等省，生長(zhǎng)于灌木林中，散生山坡、平地曠野灌木叢中，全年可采[2]

12、。具有“清濕熱、化瘀滯”的功效。在臨床應(yīng)用上用于治療各類皮膚病、治療慢性支氣管炎、治療各類咬殺等。復(fù)方二藤洗劑[3]（由南蛇藤、忍冬藤、三椏苦、大飛揚(yáng)、黑面神和虎杖等制成）對(duì)掌跖膿皰病有清熱解毒，祛斑消皰的功效?！陡＝ㄋ幬镏尽份d曰: “黑面神葉、百部各60 g。水煎沖明礬適量，洗患處治漆過(guò)敏，濕疹?！鄙竦\散在現(xiàn)代臨床應(yīng)用中，對(duì)于接觸性皮炎、皮膚瘙癢證、腳氣病、凍瘡、濕熱隱疹等癥有效，尤其對(duì)于接觸漆或紅花油引起的皮膚過(guò)敏有特效[4]。林挺

13、等人[5]通過(guò)醋酸去炎松霜與中藥三七洗劑（由黑面神、苦參、七大姑、蛇床子、野菊花、三亞苦、荊芥，白鮮皮和布渣葉等制成）治療嬰兒急性濕疹療效進(jìn)行了對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)二者的總有效率分別達(dá)到87.5%和93.5%，證實(shí)中藥三七洗劑對(duì)嬰兒急性濕疹有顯著療效。</p><p>　　苦參為豆科槐屬植物苦參(SophoraflavescensAit.)的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。其味苦、性寒,具有清熱燥濕、祛風(fēng)、殺蟲(chóng)、利尿等功

14、效。用于熱痢,便血, 黃疸尿閉, 赤白帶下, 陰腫陰癢, 濕疹, 濕瘡, 皮膚瘙癢, 疥癬麻風(fēng)等病癥。外用亦治滴蟲(chóng)性陰道炎[ 6] 。大量研究發(fā)現(xiàn),苦參在醫(yī)療方面具有抗腫瘤活性、抗肝損傷、抗?jié)儭⒖股⒖寡滓志⒖剐穆适С！⒖共《疽约爸委熉愿窝椎茸饔肹7]。 苦參還具有抗原蟲(chóng)活性,能抑制致病性皮膚真菌,與百部合用可治甲魚(yú)疥癩、毛霉病等[8]。張耀龍[9]報(bào)道,苦參堿能抑制角朊細(xì)胞增殖,并有抗炎和調(diào)節(jié)免疫的作用,臨床上曾治療銀屑病32

15、例,。由大黃［10］、連翹、苦參、蛇床子、白屈菜、冰片和赤芍組成的舒膚軟膏，功能清熱解毒，燥濕止痛，主治皰疹、膿皰瘡和濕疹等。</p><p>　　另有文獻(xiàn)報(bào)道[11]，蛇膚外洗方(主要由三椏苦、地膽頭、地膚子、蛇床子、黑面神、漆大姑、金銀花葉組成)是廣州市名老中醫(yī)潘仲明的經(jīng)驗(yàn)方，功效為清熱除濕，祛風(fēng)止癢，與小兒濕疹治則相合，有良好的治療效果。方中地膚子、蛇床子祛風(fēng)止癢，黑面神解毒除瘡，諸藥合用，共奏清熱利濕、祛

16、風(fēng)止癢、解毒除瘡之效。根據(jù)黑面神和苦參在皮膚病上的顯著療效，本實(shí)驗(yàn)擬研制出以黑面神為君藥，苦參為臣藥，白鮮皮、蛇床子和地膚子為佐藥的具有消炎止癢功效的外用制劑復(fù)方黑面神軟膏?；|(zhì)主要為水溶性基質(zhì)聚乙二醇4000，聚乙二醇400和吐溫-80等。</p><p>　　本課題前期實(shí)驗(yàn)者王英晶等人[12]對(duì)黑面神枝葉中表兒茶素含量測(cè)定及水提工藝優(yōu)化進(jìn)行了研究，采用高效液相色譜法測(cè)定黑面神枝葉中表兒茶素含量，運(yùn)用正交試驗(yàn)考

17、察浸泡時(shí)問(wèn)、加水量、提取時(shí)間及提取次數(shù)對(duì)表兒茶素含量的影響。得出黑面神枝葉水提最佳工藝條件為：藥材加20倍量水浸泡45分鐘，80℃溫浸提取2次，每次1 小時(shí)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)王英晶運(yùn)用HPLC測(cè)定表兒茶素含量的方法進(jìn)行了驗(yàn)證，并在此基礎(chǔ)上采用相似的工藝條件對(duì)苦參中苦參堿的含量進(jìn)行優(yōu)化，最終配合使用基質(zhì)制得復(fù)方黑面神軟膏。</p><p><b>　　2 材料與儀器</b></p>&l

18、t;p><b>　　2.1 儀器</b></p><p><b>　　2.2 對(duì)照品</b></p><p>　　表兒茶素對(duì)照品 中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)110878-200102）</p><p>　　苦參堿對(duì)照品 中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)110805-200508）<

19、/p><p><b>　　2.3 試劑</b></p><p>　　水為屈臣氏蒸餾水；甲醇為色譜純；聚乙二醇4000，聚乙二醇400，聚山梨酯80，丙三醇，羥苯乙酯為化學(xué)純；其余試劑為分析純。</p><p><b>　　2.4 樣品</b></p><p>　　黑面神枝葉購(gòu)自廣州至信藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣

20、州中醫(yī)藥大學(xué)生藥鑒定教研室黃海波教授鑒定是大戟科黑面神屬植物Breynia fruticosa（L.）Hook.f.的干燥嫩枝葉；苦參（廣州至信藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140601）；蛇床子（廣州至信藥業(yè)有限公司，批號(hào)：150101）；地膚子（亳州市毫廣中藥飲片有限公司，批號(hào)：20120722）；白鮮皮（廣州至信藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140601）。</p><p><b>　　3 方法與結(jié)果</b&g

21、t;</p><p><b>　　技術(shù)流程：</b></p><p>　　3.1 指標(biāo)成分含量測(cè)定</p><p>　　3.1.1 色譜條件</p><p>　　Boston Green ODS C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5µm)，流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸溶液，梯度洗脫(程序見(jiàn)表1)，

22、流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：表兒茶素280nm，苦參堿220 nm。柱溫30℃，進(jìn)樣量20µL。在此條件下,表兒茶素和苦參堿與相鄰峰能達(dá)到基線分離，其保留時(shí)間分別為48.333min和10.026min。理論塔板數(shù)按表兒茶素計(jì)算不低于3600，按苦參堿計(jì)算不低于4000。</p><p><b>　　表1 梯度洗脫程序</b></p><p

23、>　　圖1 表兒茶素對(duì)照品溶液液相色譜圖</p><p>　　圖2 表兒茶素供試品溶液液相色譜圖</p><p>　　圖3 苦參堿對(duì)照品溶液液相色譜圖</p><p>　　圖4 苦參堿供試品溶液液相色譜圖</p><p>　　3.1.2 對(duì)照品溶液的制備</p><p>　　精密稱取表兒茶素對(duì)照品8.4mg，加5

24、0%甲醇制成每1ml含0.84mg的溶液，搖勻，得表兒茶素對(duì)照品溶液；精密稱取苦參堿對(duì)照品14.7mg，加甲醇制成每1ml含1.47mg的溶液，搖勻，得苦參堿對(duì)照品溶液。</p><p>　　3.1.3 供試品溶液的制備</p><p>　　取黑面神藥材30g加20倍量水浸泡45 min，80℃溫浸提取2次，每次1 h，過(guò)濾得藥渣，濾液70℃減壓濃縮到一定量，用50%甲醇定容至50mL，得

25、表兒茶素供試品溶液。藥渣和剩余的4味藥（苦參15g，白鮮皮10g，蛇床子8g，地膚子5g）加20倍水浸泡45min提取2次，每次1h，提取液過(guò)濾，濃縮至一定濃度，加95%乙醇沉淀至70%濃度，4℃放置一夜，抽濾，濾液回收乙醇，用甲醇定容至50mL，得苦參堿供試品溶液。</p><p>　　3.1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備</p><p>　　分別精密吸取3.1.2中表兒茶素和苦參堿對(duì)照品溶液0.

26、1，0.2，0.5，1，2，4ml置5ml量瓶中，表兒茶素用50%甲醇稀釋至刻度，苦參堿用甲醇稀釋至刻度，在3.1.1條件下進(jìn)樣分析。以進(jìn)樣濃度（g·L-1）為橫坐標(biāo)（x），以峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，表兒茶素回歸方程為:y=13346x+11.632（r=1.0000），線性范圍：0.0084~0.0336g·L-1?？鄥A回歸方程為：y=1714.9x-3.8355（r=0.9999）。線性范圍：0.02

27、94~0.588g·L-1。</p><p>　　3.1.5 精密度試驗(yàn)</p><p>　　分別精密吸取同一濃度的表兒茶素對(duì)照品溶液和苦參堿對(duì)照品溶液，在3.1.1條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得表兒茶素含量和苦參堿含量，結(jié)果顯示表兒茶素含量RSD = 1.85%，苦參堿含量RSD = 1.17%。表明儀器精密度良好。</p><p>　　3.1.6 重復(fù)性試驗(yàn)

28、</p><p>　　取6份30g黑面神，按表兒茶素供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理。黑面神藥渣，苦參15g，白鮮皮10g，蛇床子8g和地膚子5g，6份，按苦參堿供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，在3.1.1條件下進(jìn)樣分析，分別測(cè)得表兒茶素含量和苦參堿含量，結(jié)果顯示表兒茶素含量RSD = 0.95%，苦參堿RSD = 1.39%。</p><p>　　3.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)</p>

29、<p>　　取黑面神按表兒茶素供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，另取黑面神藥渣，苦參，白鮮皮，蛇床子和地膚子，按苦參堿供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，分別于0、2、4、8、16、24 h在3.1.1條件下進(jìn)樣分析，分別測(cè)得表兒茶素含量和苦參堿含量，結(jié)果顯示兒茶素含量RSD = 1.43%，苦參堿含量RSD = 0.96%，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。</p><p>　　3.1.8 回收率試驗(yàn)</p>

30、;<p>　　分別按表兒茶素供試品溶液和苦參堿供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理后的樣品平均各分為6份，平行分2組，分別精密加入表兒茶素對(duì)照品0.350 mg和0.715 mg，苦參堿對(duì)照品0.350 mg和0.715 mg，按各自供試品溶液的制備方法進(jìn)行處理，在3.1.1條件下進(jìn)樣分析，結(jié)果顯示表兒茶素平均回收率達(dá)98.2%，RSD = 0.75%。苦參堿平均回收率達(dá)97.5%，RSD = 0.67%，表明表兒茶素和苦參堿加樣

31、回收率試驗(yàn)良好，符合定量分析要求。</p><p>　　表2 表兒茶素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　表3 苦參堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果</p><p><b>　　3.2 正交試驗(yàn)</b></p><p>　　3.2.1 表兒茶素提取正交試驗(yàn)</p><p>　　3.2.1.1 水提工

32、藝條件 </p><p><b>　　表4 因素和水平</b></p><p>　　3.2.1.2 表兒茶素正交樣品溶液的制備</p><p>　　取黑面神30g置1000mL燒杯中，按L9( 34) 正交試驗(yàn)表進(jìn)行提取，具體工藝流程如下：黑面神→加水浸泡→80℃浸泡→過(guò)濾→水提液→減壓濃縮→定容至50mL→得9份樣品溶液。在3.1.1條件

33、下進(jìn)樣分析，測(cè)定表兒茶素含量，結(jié)果見(jiàn)表2，表3。</p><p>　　表5 正交試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　表6 表兒茶素方差分析結(jié)果</p><p>　　注:F0.05 (2,2) =19.00, f=2</p><p>　　3.2.1.3 試驗(yàn)結(jié)果分析 </p><p>　　從直觀分析結(jié)果看出各考察因素對(duì)

34、表兒茶素含量的影響次序?yàn)镈>A>C>B，以極差最小的B因素加水量作為誤差項(xiàng)，浸泡時(shí)間、加水量和提取時(shí)間對(duì)表兒茶素含量的影響無(wú)顯著性差異，提取次數(shù)對(duì)表兒茶素含量的影響有顯著性差異。確定優(yōu)選的提取工藝路線為A2B1C2D2，即30g黑面神加20倍量水浸泡45 min，80℃溫浸提取2次，每次1h。</p><p>　　3.2.2 苦參堿提取正交試驗(yàn)</p><p>　　3.2

35、.2.1 水提工藝條件 </p><p>　　為提高苦參中苦參堿的水提得率，以苦參堿的含量和干膏率為參考指標(biāo)，設(shè)計(jì)L9(34)正交試驗(yàn)，對(duì)浸泡時(shí)間、加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)行考察，因素和水平見(jiàn)表3。</p><p><b>　　表7 因素和水平</b></p><p>　　3.2.2.2 苦參堿正交樣品溶液的制備</p>

36、<p>　　取黑面神藥渣、15g苦參、10g白鮮皮、8g蛇床子和5g地膚子置1000mL燒杯中，按L9( 34) 正交試驗(yàn)表進(jìn)行提取，具體工藝流程如下：</p><p>　　原處方藥材→加水浸泡→煎煮→過(guò)濾→水提液→濃縮至一定體積→醇沉 →靜置一夜→抽濾→濾液回收乙醇→濃縮→定容至50mL→得9份樣品溶液。在3.1.1條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定苦參堿含量，結(jié)果見(jiàn)表4，表5。</p><

37、p>　　3.2.2.3 干膏得率的測(cè)定</p><p>　　參照《中國(guó)藥典》2010年版一部（附錄XA）浸出物測(cè)定法[13]，將正交試驗(yàn)所得的藥液濃縮至10mL，分別置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿（設(shè)重量為W1）中，水浴揮干，殘?jiān)?05℃干燥3h，取出，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量（設(shè)重量為W2），通過(guò)以下公式計(jì)算干膏得率。</p><p>　　表8 正交試驗(yàn)結(jié)果表<

38、/p><p>　　評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：綜合評(píng)分=干膏得率×30%+苦參堿含量×70%</p><p>　　表9 干膏得率方差分析結(jié)果</p><p>　　注:F0.05 (2,2) =19.00, f=2</p><p>　　表10 苦參堿含量方差分析結(jié)果</p><p>　　注:F0.05 (2,2) =1

39、9.00, f=2</p><p>　　表11 綜合評(píng)分方差分析結(jié)果</p><p>　　注:F0.05 (2,2) =19.00, f=2</p><p>　　3.2.2.4 試驗(yàn)結(jié)果分析 </p><p>　　從直觀分析結(jié)果看出各考察因素對(duì)干膏得率的影響次序?yàn)锽>D>C>A，對(duì)苦參堿含量的影響次序?yàn)镃>B&g

40、t;D>A，綜合評(píng)分影響提取效率的因素為D>B>C>A。以極差最小的A因素浸泡時(shí)間作為誤差項(xiàng)，加水量和提取次數(shù)對(duì)苦參堿含量的影響有顯著性差異，浸泡時(shí)間和提取時(shí)間對(duì)苦參堿含量的影響無(wú)顯著性差異。確定優(yōu)選的提取工藝路線為A2B3C2D2，即黑面神藥渣、苦參、白鮮皮、蛇床子和地膚子加20倍量水浸泡45 min，煎煮提取2次，每次1h。</p><p>　　3.1.3 基質(zhì)配比正交試驗(yàn)</p

41、><p>　　3.1.3.1 正交試驗(yàn)條件設(shè)計(jì) </p><p>　　將四種對(duì)基質(zhì)理化性狀影響較大的輔料聚乙二醇4000（A），聚乙二醇400（B），吐溫-80（C）和甘油（D）定為因素，根據(jù)初選數(shù)據(jù)定下以下三個(gè)水平： </p><p>　　表12 因素和水平</p><p>　　表13 正交試驗(yàn)結(jié)果</p>&

42、lt;p>　　表14 方差分析結(jié)果</p><p>　　3.1.3.2 試驗(yàn)結(jié)果分析 </p><p>　　由正交試驗(yàn)結(jié)果可知，4個(gè)因素對(duì)軟膏綜合得分的影響順序?yàn)锳>B>D>C，最佳處方為A3B3C1D2。以極差最小的D因素為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，A,B,C,D因素水平變化對(duì)結(jié)果變化影響不顯著。最終確定復(fù)方黑面神軟膏基質(zhì)的最佳配比為聚乙二醇4000:聚乙二醇400

43、:吐溫-80:甘油=（6:1:0.1:0.5）。</p><p>　　3.1.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn) </p><p>　　按正交試驗(yàn)優(yōu)選出的的最佳基質(zhì)配比制備3 批軟膏，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3批軟膏的外觀性狀、穩(wěn)定性、延展性、稠度、pH均無(wú)差別。外觀性狀、延展性、稠度適宜，穩(wěn)定性良好，pH符合要求。</p><p>　　3.3 基質(zhì)配比優(yōu)選工藝</p><p&

44、gt;　　3.3.1 復(fù)方黑面神軟膏的制備 </p><p>　　取黑面神藥材30g加20倍量水浸泡45 min，80℃溫浸提取2次，每次1 h，過(guò)濾得藥渣，濾液70℃減壓濃縮到一定濃度。藥渣和剩余的4味藥（苦參15g，白鮮皮10g，蛇床子8g，地膚子5g）加20倍水浸泡45min提取2次，每次1h，提取液過(guò)濾，濃縮至1.0g生藥/ml，加95%乙醇沉淀至70%濃度，4℃放置12h，抽濾，濾液回收乙醇后與黑面

45、神濾液合并，80℃回流濃縮至相對(duì)密度為1.07~1.09g/ml。</p><p>　　取上述混合液4.8g與一倍輔料（聚乙二醇4000：聚乙二醇400：吐溫-80：甘油=6：1：0.1：0.5）。藥液先和丙三醇、羥苯乙酯混合，加熱至70℃，攪拌15分鐘至均勻，加入軟膏基質(zhì)（基質(zhì)制備：取聚乙二醇4000 、聚乙二醇400 70℃加熱熔融，保持70℃攪拌15分鐘至均勻制成基質(zhì)）中，快速攪拌（600r/min，15分

46、鐘）至混合均勻后，停止加熱，待溫度降至約40℃加入吐溫-80，繼續(xù)攪拌（600r/min，15分鐘）均勻至冷凝，即得。</p><p>　　3.3.2 基質(zhì)優(yōu)選指標(biāo)及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) </p><p>　　外觀性狀 滿分為20 分。從色澤均勻、質(zhì)地細(xì)膩、稠度適宜、涂抹分散性及有無(wú)顆粒感等方面進(jìn)行考察，每項(xiàng)各占4 分。</p><p>　　離心穩(wěn)定性[14] 滿分為2

47、0分。 將各組軟膏分別置于離心管中，2500 r·min － 1離心30 min，觀察有無(wú)分層或起泡現(xiàn)象。觀察有無(wú)分層、結(jié)塊、起泡或出水等異?，F(xiàn)象。</p><p>　　耐寒試驗(yàn) 滿分為10分。將各組軟膏用塑料樣品杯裝一定量置于4 ℃冰箱中1個(gè)月，觀察有無(wú)分層、結(jié)塊、出水等異?，F(xiàn)象。</p><p>　　耐熱試驗(yàn) 滿分為10分。將各組軟膏用塑料樣品杯裝一定量置于40 ℃恒溫烘

48、箱中1個(gè)月，觀察有無(wú)分層、變色、霉變等異常現(xiàn)象。</p><p>　　延展性[15] 滿分為20分。取10 cm ×10 cm 大小的兩塊干凈玻璃板，上面一塊重125 g(不足質(zhì)量加砝碼補(bǔ)足)。稱取室溫放置24 h 的各組軟膏1 g置兩玻璃板之間，1分鐘后用直尺測(cè)定延展后的軟膏直徑，取最大直徑與最小直徑之比的平均值。</p><p>　　pH[16] 滿分為20分。分別取各組

49、軟膏5g置于小燒杯中，加等量蒸餾水充分溶解，攪拌均勻，用pH 計(jì)測(cè)定每組pH，pH 6~8 為滿分，其余為零分。</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　4.1 指標(biāo)成分含量測(cè)定分析 </p><p>　　4.1.1 提取方法的選擇</p><p>　　本課題的前期實(shí)驗(yàn)證明溫浸提取法測(cè)定的表兒茶

50、素含量較高且在本實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證。根據(jù)查閱文獻(xiàn)，苦參堿的提取方法一般包括水提醇沉和醇提水沉，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中比較了溫浸提取法，醇提水沉法和水提醇沉法對(duì)苦參中苦參堿含量的影響。結(jié)果顯示，水提醇沉法苦參堿得率較溫浸法高。故選擇水提醇沉法提取作為苦參堿的提取方法。為體現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)復(fù)方的性質(zhì)，每次提取時(shí)加入溫浸后的黑面神藥渣。</p><p>　　4.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇</p><p>　　《中國(guó)藥典》2

51、010版記載，對(duì)兒茶中兒茶素和表兒茶素進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，測(cè)定苦參堿含量時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)苦參堿、表兒茶素進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)亦多數(shù)分別采用這兩個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)。然王英晶在用高效液相色譜法測(cè)定表兒茶素含量時(shí)選用230nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，本實(shí)驗(yàn)與其使用相同的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別比較了220nm、230nm和280nm下表兒茶素和苦參堿供試品溶液的HPLC色譜圖，發(fā)現(xiàn)波長(zhǎng)分別為280 nm和220nm時(shí)表兒茶素

52、和苦參堿峰面積最大，且峰型較好，故表兒茶素選用280 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，苦參堿選用220 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。</p><p>　　4.1.3 流動(dòng)相的選擇</p><p>　　《中國(guó)藥典》2010版記載，測(cè)定苦參堿含量時(shí)，以氨基鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)為流動(dòng)相。本次實(shí)驗(yàn)使用C18色譜柱，按此流動(dòng)相測(cè)定苦參堿時(shí)，2min左右出峰，出峰時(shí)間太快導(dǎo)致基線漂

53、移，且分離度不好?？紤]到最后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察要運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行復(fù)方處方的含量測(cè)定。選用王英晶測(cè)定表兒茶素含量時(shí)采用的流動(dòng)相甲醇-0.1%磷酸溶液進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，出峰時(shí)間為10.02min，分離度明顯改善，且峰型較好。故將測(cè)定黑面神中表兒茶素的流動(dòng)相運(yùn)到測(cè)定苦參中苦參堿的含量。因用甲醇定容制得的表兒茶素供試品所測(cè)得的峰面積過(guò)小，而用50%甲醇定容制得的表兒茶素供試品測(cè)得的峰面積較大且分離度較好，故制備表兒茶素對(duì)照品溶液和供試品溶液時(shí)用

54、50%甲醇定容。</p><p>　　4.2 基質(zhì)配比工藝分析 </p><p>　　由于基質(zhì)配比正交試驗(yàn)選取的四個(gè)因素聚乙二醇4000，聚乙二醇400，吐溫-80和甘油之間差異性太小，且僅僅選擇綜合評(píng)分作為考察因素，導(dǎo)致正交試驗(yàn)結(jié)果四個(gè)因素水平變化沒(méi)有顯著性差異，在今后的生產(chǎn)工藝中需要改進(jìn)。</p><p>　　軟膏主藥的相對(duì)密度，主藥和輔料的比例對(duì)軟膏的成型均

55、有一定影響，藥液相對(duì)密度大小對(duì)軟膏成型，軟膏顏色影響很大。本次實(shí)驗(yàn)在基質(zhì)配比正交試驗(yàn)前考察了軟膏主藥的相對(duì)密度，主藥和輔料的比例。結(jié)果顯示，當(dāng)藥液的相對(duì)密度為1.07~1.09時(shí)，藥液和輔料的比例為1:1時(shí)，所制得軟膏外觀細(xì)膩均勻，稠度適宜。</p><p><b>　　5 結(jié)論</b></p><p>　　本次實(shí)驗(yàn)在已有研究的基礎(chǔ)上用高效液相色譜法測(cè)定黑面神中表兒茶

56、素的含量時(shí)使用C18色譜柱，以280nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫取得較理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。測(cè)定苦參中苦參堿含量時(shí)，以220nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，相同的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，苦參堿峰型和分離度皆較好，表明實(shí)驗(yàn)切實(shí)可行。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中兩次運(yùn)用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)化處方提取工藝以及軟膏基質(zhì)配比工藝，最終制得的復(fù)方黑面神軟膏外觀細(xì)膩均勻，延展性、稠度適宜，性狀穩(wěn)定。</p><p>　　查閱相關(guān)文獻(xiàn)，關(guān)

57、于制備復(fù)方黑面神軟膏的報(bào)道幾乎沒(méi)有。軟膏基質(zhì)包括油脂性基質(zhì)、乳劑型基質(zhì)和水溶性基質(zhì)，本次實(shí)驗(yàn)制備復(fù)方黑面神軟膏選用水溶性基質(zhì)，選用其他基質(zhì)制備復(fù)方黑面神軟膏還需進(jìn)一步研究。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S]一部.北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,</p><p><

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66、p><b>　　1 概述</b></p><p>　　黑面神屬（Breynia）又名山漆莖屬，屬于大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠亞科。本屬植物共26種，主要分布在亞洲東南部。我國(guó)5種，分布于廣東、海南、廣西、云南、福建、浙江、貴州等地。分別是小葉黑面神（Breynia vitisidae）、鈍葉黑面神（Breynia retusa）、喙果黑面神（Breynia rostra

67、ta Merr.）、廣西黑面神（Breynia hyposauropa Croiz）和黑面神（Breynia fruticosa （L.）H.）。</p><p>　　黑面神Breynia fruticosa （L.）Hook.f.又名青凡木，膝大治，蚊驚樹(shù)，鐘馗草，四眼葉，狗腳刺[1]。為廣東常用地產(chǎn)藥材，其根和枝葉均可入藥，味微苦，性寒，有毒。具有清熱祛濕、活血解毒的功效。主要用于腹痛吐瀉，濕疹，纏腰火丹，皮

68、炎，漆瘡，風(fēng)濕痹痛，產(chǎn)后乳汁不通，陰癢等癥的治療［2］，還作為湛江蛇藥的一種重要成分。</p><p>　　《中華本草》[3]記載，黑面神嫩枝清熱祛濕，活血解毒。主治腹痛吐瀉，濕疹，纏腰火丹，皮炎，漆瘡，風(fēng)濕痹痛，產(chǎn)后乳汁不通，陰癢。黑面神根祛風(fēng)，解毒，散瘀，消腫。主治乳蛾，咽痛，熱瀉，漆瘡，鶴膝風(fēng)，楊梅瘡，產(chǎn)后腹痛，崩漏。</p><p>　　2 黑面神化學(xué)成分研究進(jìn)展</p>

69、;<p>　　《中華本草》中記載[3]，黑面神枝、葉和莖皮中均含有鞣質(zhì)成分，莖皮中含量為12.02%。葉含酚類與三萜。種子含脂肪油。</p><p>　　M.Ilyas[4]首次在Breynia rhamnoides中檢測(cè)到含有植物甾醇，包括膽甾醇、萊子甾醇和豆甾醇等化合物。</p><p>　　浮光苗等人[5]從黑面神地上部分提取得到鞣質(zhì)、酚類和三萜類等16個(gè)化合物。此外還

70、分離鑒定了新化合物aviculin。</p><p>　　毛麗華[6]對(duì)采自云南西雙版納的黑面神干燥全株進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從其甲醇提取物的乙酸乙酯部分和正丁醇部分中分離鑒定了15個(gè)化合物，包括熊果酸、豆甾醇、咖啡酸、Vomifoliol、4-羥基-3,5,5-三甲基-2-環(huán)己烯-1-酮、8-羥基木犀草素-8-鼠李糖苷、3,5,5-三甲基-2-環(huán)己烯-1-酮（異佛爾酮）、3,4-二羥基苯甲醛（原兒茶醛）、香

71、草醛、9-octadencenoic acid,2,3-dihydroxypropyl ester、（4S,9R）4-羥基-1-酮-α-紫羅蘭醇-9-0-β-D-吡喃葡萄糖、（4R,9R）-1-酮-α-紫羅蘭醇-9-0-β-D-吡喃葡萄糖、3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲醛。</p><p>　　徐荔等人[7]建立傣藥黑面神藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，結(jié)果顯示含有還原糖、多糖類、酚類、鞣質(zhì)、內(nèi)酯類、香豆素、強(qiáng)心苷、有機(jī)酸、

72、蒽醌類等成分。</p><p>　　周紅嬌[8]等對(duì)云南西雙版納大戟科植物喙果黑面神（Breynia rostrata）的化學(xué)成分進(jìn)行研究，分離鑒定了包括木栓酮，算盤子酮醇，isomultiflorenone，芹菜素，β－谷甾醇和胡蘿卜苷等6個(gè)化合物。李艷平[9]等對(duì)云南西雙版納的黑面神全株進(jìn)行化學(xué)成分的研究，分離鑒定出20個(gè)化合物。包括5個(gè)木脂素類化學(xué)物，其中2個(gè)新的二氫苯并呋喃類木脂素類化合物。10個(gè)酚性成

73、分，2個(gè)萜類和1個(gè)黃酮。</p><p>　　林理根[10]通過(guò)研究山漆莖屬植物黑面神Breynia fruticosa 根的化學(xué)成分，從黑面神根95%乙醇冷浸液的醋酸乙酯部位分離鑒定了4 個(gè)三萜類化合物：無(wú)羈萜、木栓醇、羽扇烯酮和算盤子二醇；3 個(gè)甾醇類化合物：β-谷甾醇、豆甾烷-3β, 6β-二醇和β-sitosterylglucoside-6′-octadecanoate；2 個(gè)腦苷類化合物：1-O-β-D

74、-glucopyranosyl-(2S,3R, 4E,8Z)-2-[(2R)-2-hydroxypentacosanoylamino]-8-octadecene-1, 3, 4-triol；4 個(gè)其他類化合物：(?)-表兒茶素、ε-己內(nèi)酯、aviculin和香草醛等13個(gè)化合物。</p><p>　　Morikawa H等[11]從黑面神屬Breynia officinalis葉子中提取到6種萜烯酯苷類，6種酚類

75、糖綴化合物。</p><p>　　3 黑面神藥理作用研究</p><p>　　3.1 抑制酪氨酸酶作用 </p><p>　　盧武林等[12]研究了黑面神提取物對(duì)酪氨酸酶活性的影響，通過(guò)酪氨酸酶催化氧化左旋多巴速率法體外測(cè)定酪氨酸酶活力。用Lineweaver-Burk曲線推導(dǎo)出黑面神提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制效應(yīng)及動(dòng)力學(xué)。結(jié)果表明，黑面神提取物正丁醇部分對(duì)酪氨酸酶抑

76、制機(jī)制為可逆的混合型抑制。黑面神提取物的正丁醇部位顯示出比較顯著的抑制作用。推斷黑面神對(duì)酪氨酸酶的抑制成分主要集中于正丁醇部分因其極性較大，還需進(jìn)一步對(duì)黑面神成分進(jìn)行分離鑒定并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)加以確認(rèn)。</p><p>　　3.2 抗炎抑菌作用 </p><p>　　彭偉文等[13]采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)以及腹腔注射冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高試驗(yàn)，研究黑面神水提液對(duì)炎癥反應(yīng)的作用。

77、結(jié)果表明，黑面神水提液高、中、低劑量組均有顯著地抑制二甲苯引起小鼠耳廓腫脹及由冰醋酸引起組織毛細(xì)血管通透性增高的作用。表明黑面神水提液能顯著抑制急性炎癥反應(yīng)。文獻(xiàn)[14]報(bào)道黑面神有抑菌作用，1:1200黑面神流浸膏稀釋液在試管內(nèi)對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、福氏痢疾桿菌、甲型鏈球菌均有很強(qiáng)的抑菌作用。另有文獻(xiàn)報(bào)道[15]，黑面神合劑（由黑面神葉、東風(fēng)桔根、鴨跖草、尖尾芋根莖和補(bǔ)骨脂制成）和主藥黑面神100%煎液，對(duì)金黃色葡萄球

78、菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、弗氏痢疾桿菌和甲型鏈球菌等五種細(xì)菌體外抑菌作用較強(qiáng)。</p><p>　　3.3 抗病毒作用 </p><p>　　黑面神全草提取物（100~500μg/ml）對(duì)鼠RNA病毒逆轉(zhuǎn)錄酶和人DNA聚合酶有抑制作用，其IC50分別為2.0μg/ml和5.0μg/ml[16]。孟正木等[17]研究了包括青凡木在內(nèi)的8種中草藥提取物，對(duì)水皰性口炎病毒、腺病毒Ⅲ型、單純皰疹病

79、毒Ⅰ型、流感病毒A型及艾滋病毒逆轉(zhuǎn)錄酶活性的影響。結(jié)果顯示青凡木（黑面神）對(duì)水皰性口炎病毒和腺病毒顯示出較低的CPIE，表明青凡木具有較強(qiáng)的抗病毒活性。</p><p>　　3.4 免疫抑制作用 </p><p>　　為探討黑面神水提物對(duì)小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用，彭偉文等[18]連續(xù)給小鼠灌胃黑面神水提物5天，觀察黑面神水提物對(duì)正常小鼠免疫器官指數(shù)的影響，并采用炭廓清實(shí)驗(yàn)法測(cè)定小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)

80、中巨噬細(xì)胞的吞噬功能。結(jié)果顯示，黑面神水提物各劑量組與空白對(duì)照組相比，均能明顯降低正常小鼠的脾臟及胸腺指數(shù)，降低小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞吞噬碳粒的能力。</p><p>　　3.5 抗皮膚I型超敏反應(yīng)作用 </p><p>　　彭偉文等[19]采用尾靜脈注射0.025%低分子右旋糖酐誘發(fā)小鼠陣發(fā)性皮膚瘙癢模型，通過(guò)比較黑面神水提物高、中和低劑量（18、9和4.5g/kg）組，撲爾敏（4

81、mg/kg）與空白對(duì)照組（內(nèi)源性組胺和外源性組胺實(shí)驗(yàn)，等容蒸餾水）實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黑面神水提物組小鼠30min內(nèi)瘙癢發(fā)作次數(shù)顯著減少，持續(xù)時(shí)間顯著縮短，毛細(xì)血管通透性顯著降低。得到黑面神水提物可通過(guò)抑制組胺的釋放發(fā)揮抗皮膚I型超敏反應(yīng)作用的結(jié)論。</p><p><b>　　3.6 其他作用 </b></p><p>　　大戟科134種藥物有80種以上的品種有清熱解毒、

82、消炎止痛的作用，治療癰瘡腫毒、腸炎痢疾及蟲(chóng)蛇咬殺。Morikawa H等[11]從黑面神屬（Breynia officinalis）葉子中提取到6種萜烯酯苷類和酚類糖綴化合物，具有一定的清熱解毒、消腫的作用。浮光苗等[5]從黑面神屬（Breyenia fruticosa（L.）Hook.f.）干燥的地上部分提取到鞣質(zhì)、酚類和三萜類等化合物，具有清濕熱，化瘀滯、治療毒蛇咬傷、療毒、瘡癤和濕疹的功效。 Oluyemi A等[20]從黑面神屬

83、樹(shù)皮中的提取物具有抗失眠作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明其具有抗腫瘤、抗病毒的活性，以及調(diào)血脂的作用[21]?！度珖?guó)中草藥匯編》記載：“黑面神葉30g，東風(fēng)橘、芒果葉各15g，紅糖9g。水煎服，每日1劑治療慢性支氣管炎。”《嶺南草藥志》載曰: “黑面神葉、蛇總管、黑骨走馬，搗爛取汁，再用洗米水將藥煎湯1 小碗，加入藥汁和服，藥渣外敷傷口周圍治蛇咬傷”。以黑面神為主藥的制劑在嶺南地區(qū)使用廣泛，如復(fù)方黑面神糖衣片、復(fù)方東桃片、黑面神合劑（II），具

84、有清熱解毒，止咳平喘，扶正培本的功效，均可用于治療慢性氣管炎。而黑面神合</p><p><b>　　3.7 毒性 </b></p><p>　　黑面神味苦性寒，有毒，枝葉是其毒性部位，歷代本草均有記載。《生草藥性備要》記載，黑面神味甘，性寒?！吨腥A本草》中記載，黑面神根味苦，性寒，有毒。內(nèi)服不宜過(guò)量，不宜久服。孕婦禁服?！墩憬幱弥参镏尽罚骸霸袐D忌服。黑面神根有毒

85、。內(nèi)服過(guò)量可引起中毒性肝炎?！敝袊?guó)植物圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)收錄黑面神為有毒植物。曾有報(bào)道稱[23]，4例患者服30~100g鮮品（煎劑）后引起中毒性肝炎，表現(xiàn)為頭暈、頭痛、上腹不適、頻繁嘔吐、胃納減退、黃疸、甚至深度昏迷，肝腫大、壓痛，肝功能檢查明顯損傷；1例小孩因肝昏迷而死亡[24]。《中藥大辭典》中記載[25]，小鼠腹腔注射5%去鞣質(zhì)的黑面神注射液兩星期無(wú)死亡。家兔靜脈注射鞣質(zhì)的黑面神注射液10天未見(jiàn)異常，解剖檢查各臟器無(wú)任何改變。表明除去鞣

86、質(zhì)的黑面神注射液毒性較低。</p><p><b>　　4 黑面神研究展望</b></p><p>　　黑面神是我國(guó)民間傳統(tǒng)用藥，具有清濕熱，化瘀滯功效。查閱文獻(xiàn)可知，黑面神的主要化學(xué)成分包括鞣質(zhì)、植物甾醇、酚類、三萜和木脂素類等；藥理作用包括抑制酪氨酸酶作用、 抗炎抑菌作用、抗皮膚I型超敏反應(yīng)作用、抗病毒作用和免疫抑制作用等；臨床應(yīng)用包括治療各類皮膚病、治療慢性支氣

87、管炎和治療各種咬傷等。</p><p>　　雖然近年來(lái)對(duì)黑面神藥理作用及臨床應(yīng)用的研究報(bào)道日益增多，但通過(guò)對(duì)黑面神的化學(xué)成分研究、藥理學(xué)研究、臨床應(yīng)用等方面的總結(jié)發(fā)現(xiàn)黑面神在化學(xué)成分和藥理研究方面，進(jìn)展緩慢，尤其是在國(guó)內(nèi)，有關(guān)黑面神各個(gè)方面研究的文獻(xiàn)都很少，且這些文獻(xiàn)多數(shù)只是對(duì)黑面神單味藥的考察研究，復(fù)方少之又少。黑面神作為廣東的地產(chǎn)藥材，資源豐富，具有廣泛的生物活性，在皮膚病方面更有顯著作用。廣東的濕熱天氣適合

88、各類病菌的生存繁衍，常是濕疹、帶狀皰疹、麻疹、皮炎等多類皮膚病的高發(fā)區(qū)。然而，價(jià)格便宜、含中藥有效成分的皮膚外用藥種類仍較少。開(kāi)發(fā)出安全有效、使用方便、價(jià)格便宜的中藥制劑有著迫切的市場(chǎng)需求。因此對(duì)黑面神進(jìn)行研究，既可以為黑面神屬植物化學(xué)成分的分類奠定基礎(chǔ)也可以為進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)黑面神奠定基礎(chǔ)。若在已有基礎(chǔ)上對(duì)黑面神進(jìn)一步深入研究，有望開(kāi)發(fā)出一種治療皮膚病的外用新藥。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果為黑面神及其復(fù)方制劑的應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。</p&

89、gt;<p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 朱曉光.嶺南本草古籍三種[M.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1999: 36,138.</p><p>　　[2] 《廣東中藥志》編輯委員會(huì).廣東中藥志(第一卷)[M].廣州：廣東科技出</p><p>　　版社,1990：362.</p><

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