離體條件下銅對(duì)草魚(yú)和黃顙魚(yú)肝細(xì)胞脂代謝影響的研究.pdf

1、銅作為一種常見(jiàn)的重金屬，同時(shí)又是魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)的必需元素，它對(duì)魚(yú)類(lèi)的影響已經(jīng)引起了廣泛的關(guān)注。以往的研究主要集中在氧化應(yīng)激、蓄積作用和組織學(xué)變化等方面，而關(guān)于銅對(duì)脂代謝的影響，尤其是采用離體細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷难芯窟€未見(jiàn)報(bào)道。本文以草魚(yú)肝細(xì)胞系為研究對(duì)象，研究了銅對(duì)草魚(yú)肝細(xì)胞脂代謝的影響以及硒的保護(hù)作用，同時(shí)以黃顙魚(yú)為研究對(duì)象，建立了黃顙魚(yú)離體肝細(xì)胞模型，研究了銅對(duì)黃顙魚(yú)離體肝細(xì)胞脂代謝的影響以及可能存在的通路。主要研究結(jié)果如下:
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2、.以草魚(yú)肝細(xì)胞系為模型，選取3個(gè)銅濃度(0、10μM、100μM)和3個(gè)孵育時(shí)間(24h、48h、96h)來(lái)研究離體條件下銅對(duì)草魚(yú)肝細(xì)胞脂代謝的影響。研究結(jié)果表明，離體條件下銅對(duì)草魚(yú)肝細(xì)胞脂代謝的影響呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系:孵育24h時(shí)，銅降低了幾種脂肪合成和脂肪分解相關(guān)的基因表達(dá)水平;孵育48h時(shí)，銅抑制了脂肪合成的過(guò)程，但上調(diào)了脂肪分解;孵育96h時(shí)，與對(duì)照組相比，銅繼續(xù)上調(diào)脂肪分解作用，對(duì)脂肪合成作用沒(méi)有顯著影響，但引起脂肪消耗。

3、盡管孵育96h脂肪合成作用有可能被上調(diào)，但這不足以補(bǔ)償脂肪的消耗。本文首次研究了離體條件下銅對(duì)魚(yú)類(lèi)肝細(xì)胞脂代謝的劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，為研究銅對(duì)魚(yú)類(lèi)酶學(xué)和分子水平的毒性提供了新的思路。
　　2.以草魚(yú)肝細(xì)胞系為模型，評(píng)價(jià)了離體條件下，兩種濃度硒（5μM和10μM）的添加是否具有阻止銅誘導(dǎo)的草魚(yú)肝細(xì)胞脂代謝改變的能力。結(jié)果顯示:在3個(gè)銅添加組(100μM)中，孵育24h時(shí)隨著硒濃度的增加，脂肪合成相關(guān)酶活性升高，而分解相關(guān)酶活性下降。

4、與對(duì)照組相比，單獨(dú)的銅或者是與硒的聯(lián)合作用在24h會(huì)下調(diào)所有測(cè)定的基因的表達(dá)，在48h會(huì)下調(diào)脂肪合成相關(guān)基因的表達(dá)，但會(huì)上調(diào)脂肪分解相關(guān)基因的表達(dá)，從而在48h會(huì)降低甘油三酯含量。因此，本研究表明，硒的添加對(duì)銅引起的脂代謝改變具有雙重作用，低濃度有保護(hù)作用，高濃度表現(xiàn)出一定的毒性，而且存在一定的時(shí)間效應(yīng)。
　　3.建立了黃顙魚(yú)原代肝細(xì)胞的培養(yǎng)方法，為研究脂代謝提供了理想的體外模型。肝細(xì)胞采用含有EDTA的0.25％的胰酶進(jìn)行消化，

5、每克肝重可獲得4.03×107個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞成活率達(dá)95％。以此為模型，選取4個(gè)不同的銅濃度(0、5μM、10μM、50μM)和3個(gè)孵育時(shí)間(0、24h、48h)來(lái)研究離體條件下銅對(duì)黃顙魚(yú)離體肝細(xì)胞脂代謝的影響。結(jié)果表明，銅對(duì)黃顙魚(yú)離體肝細(xì)胞脂代謝的影響呈現(xiàn)濃度特異性:10μMCu引起脂肪消耗，可能源于脂肪分解過(guò)程的上調(diào)。而50μM銅引起脂肪消耗，可能源于脂肪合成過(guò)程的下調(diào)。而且，10μMCu誘導(dǎo)的脂肪分解可受PPARα阻斷劑GW6471