黑大豆種皮花色苷物質(zhì)組成及其抗氧化活性與抗血管平滑肌細(xì)胞增生作用.pdf

1、隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，人們逐漸認(rèn)識(shí)到氧化應(yīng)激是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化等慢性疾病的發(fā)生發(fā)展的重要因素。探尋和研究具有抗氧化活性的天然植物化合物用于這些疾病的防治，成為醫(yī)藥、植物化學(xué)等多個(gè)學(xué)術(shù)領(lǐng)域共同關(guān)注的課題。黑大豆是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兼用的作物資源，其種皮含有大量多酚類化合物，是開(kāi)發(fā)天然抗氧化劑的重要來(lái)源。本文通過(guò)比較60個(gè)黑大豆種質(zhì)抗氧化活性和總酚、原花青素和花色苷含量差異，篩選出抗氧化活性最強(qiáng)、酚類物質(zhì)含量最高的種質(zhì)，并對(duì)其抗氧化活性與

2、酚類物質(zhì)進(jìn)行相關(guān)性分析，從中確定黑大豆種皮中對(duì)抗氧化活性起主要作用的物質(zhì)，再通過(guò)HPLC對(duì)主要活性物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，最后在細(xì)胞水平評(píng)價(jià)其抗氧化活性，并從抑制ox-LDL誘導(dǎo)VAMC增殖的角度探討黑大豆種皮抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)分析了60個(gè)黑大豆種皮的總抗氧化能力(TAC)、氧自由基清除能力(ORAC)、DPPH·清除能力及其與總酚、原花青素和花色苷含量的差異和相關(guān)性。結(jié)果表明60份黑大豆種皮的

3、TAC、ORAC、DPPH、總酚、原花青素和花色苷含量變幅和變異系數(shù)較大，表現(xiàn)出顯著的基因型差異。云南地區(qū)的黑豆17501和大黑秧是抗氧化能力和酚類物質(zhì)含量最高的黑大豆種質(zhì)。相關(guān)性分析結(jié)果表明，原花青素和花色苷是黑大豆種質(zhì)種皮抗氧化活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。采用快速聚類法可以把60份黑大豆種質(zhì)聚成4類，Ⅰ類為高脂肪黑大豆種質(zhì)，Ⅱ類為高蛋白高花色苷黑大豆種質(zhì)，Ⅲ類為高脂肪高活性黑大豆種質(zhì)，Ⅳ類為低脂肪低蛋白低活性黑大豆種質(zhì)。
　　 (2

4、)參照Baj等人文獻(xiàn)報(bào)道的色譜條件并對(duì)其進(jìn)行優(yōu)化，建立了一種準(zhǔn)確高效的黑大豆種皮花色苷檢測(cè)方法，并用該方法對(duì)60個(gè)黑大豆種質(zhì)種皮花色苷的組成及含量進(jìn)行了測(cè)定。黑大豆花色苷HPLC分析優(yōu)化的色譜條件為：色譜柱XBridgeC185.0μm4.6mm×250mm，預(yù)柱4.6mm×20mm,檢測(cè)波長(zhǎng)520nm，進(jìn)樣體積20μL，柱溫25℃，流動(dòng)相：A：10％甲酸的水溶液B：25％乙腈，25％甲醇，10％甲酸，40％水：梯度洗脫：0～8min,

5、16％～20％B；8～11min,20％～38％B；11～20min,38％～46％B。結(jié)果從60個(gè)黑大豆種質(zhì)種皮中檢測(cè)到飛燕草素-3-葡萄糖苷(Dp-3-glu)，矢車菊素-3-蕓香糖苷(Cy-3-gal)，矢車菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-glu)，牽?；ㄋ?3-葡萄糖苷(Pt-3-glu)，芍藥定-3-葡萄糖苷（Pn-3-glu），錦葵素-3-葡萄糖苷(Mv-3-glu)共6種花色苷。其中有44個(gè)品種中檢測(cè)到上述全部6種花色苷，而

6、其余16個(gè)品種只含有其中的4-5種。其中Cy-3-glu在各品種中均為含量最高的花色苷組分，含量變幅為61.82-1617.44mg/100g，占總含量的48.81％-94.13％，大黑秧是總花色苷和Cy-3-glu含量最高的黑大豆種質(zhì)(2129.6mg/100g和1617.6mg/100g)。
　　 (3)通過(guò)化學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)花色苷單體的抗氧化活性進(jìn)行追蹤研究，并考察了其對(duì)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞

7、(VSMC)增殖的抑制作用。結(jié)果表明Dp-3-glu、Cy-3-glu、Pt-3-glu、Mv-3-glu和Pn-3-glu5種花色苷單體清除DPPH·自由基能力表現(xiàn)為：Dp-3-glu＞Cy-3-glu＞Pt-3-glu＞Mv-3-glu＞Pn-3-glu。與天然抗氧化劑Vc比較，Dp-3-glu和Cy-3-glu清除DPPH·能力遠(yuǎn)大于Vc。Vc清除DPPH·的EC50值為7.62μg/mL，分別是Dp-3-glu，Cy-3-glu

8、清除DPPH·EC50值的3.13、2.06倍。這5種花色苷單體均可不同程度的拮抗ox-LDL誘導(dǎo)VSMC增殖，Cy-3-glu抑制效果最高，且呈顯著量效關(guān)系（P＜0.05）。Cy-3-glu可明顯提高細(xì)胞超氧化物歧化酶(SOD)活力，抑制生物體的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少終產(chǎn)物丙二醛(MDA)的生成，同時(shí)還可抑制一氧化氮(NO)產(chǎn)生，且呈顯著的量效關(guān)系(P＜0.05)。Cy-3-glu和Pn-3-glu可以抑制細(xì)胞由G0/G1期進(jìn)入DNA合