山東省豬感染BVDV調查及BVDVE2基因的序列分析.pdf

1、牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus BVDV)又稱牛病毒性腹瀉一粘膜病病毒(BVD一MDV)是瘟病毒屬主要成員之一，與豬瘟病毒(CSFV)、羊邊界病病毒(BDV)同屬于黃病毒科，瘟病毒屬。由于國內還沒有商品化試劑盒能夠對豬血清中BVDV抗體進行診斷，所以本實驗以IDEXX公司針對牛的BVDV抗體檢測試劑盒中包被好的ELISA板為病毒抗原包被板，用兔抗豬瘟病毒（CSFV）高免血清阻斷其與CSFV抗原交

2、叉的位點，再以辣根過氧化物酶（HRP）標記的兔抗豬IgG抗體為酶標二抗，確定其最佳反應條件，成功地建立了一種可用于檢測豬源BVDV抗體的復合捕獲阻斷ELISA方法。以該法對采自山東省淄博、臨沂、日照、濟南、泰安、濰坊、德州、七個地區(qū)共26個豬場866份豬血清樣品進行BVDV抗體檢測，結果顯示所檢血清中BVDV抗體陽性率達到48％（416/866）。其中母豬和仔豬血清中BVDV抗體陽性率分別為45.3％（101/224）和32.5％（20

3、9/642），豬場陽性率達88％。同時以豬瘟正向間接血凝試驗對部分血清樣品進行CSFV抗體效價測定，發(fā)現CSFV抗體效價為1∶64～1∶256的血清樣品其BVDV抗體多為陰性，而BVDV抗體呈陽性者其CSFV抗體效價普遍較低（僅在1∶4～1∶16之間），這表明山東省豬群感染BVDV已較普遍，也揭示豬感染BVDV對豬瘟抗體的產生很可能存在抑制作用。
　　 本研究通過套式PCR方法，對臨床上58份豬瘟疑似病例樣品進行BVDV檢測，結

4、果有5份呈BVDV陽性，對BVDV陽性樣品進行其它臨床常見病毒的檢測，發(fā)現4份CSFV呈陽性，1份PRRSV陽性、CSFV、PCV-2、PRV均呈陰性。我們將這1份BVDV（+）CSFV（—）PRRSV（+）的樣品接種到MDBK細胞上，得到一株穩(wěn)定遺傳的1型豬源BVDV，將其命名為JN-1。并通過克隆測序分析比較發(fā)現，這株病毒與王新平等分離到的國內第一株豬源BVDVZM-95同源性達到92.6％，而與牛源BVDV同源性則較低。同時對用于

5、疫苗生產中培養(yǎng)細胞用的國產和進口犢牛、胎牛血清進行BVDV的RT-PCR檢測，發(fā)現陽性率達到82％（14/17），對RT-PCR檢測陽性血清進行病毒分離，得到了1株能穩(wěn)定遺傳的可在MDBK上產生明顯病變的2型牛源BVDV，命名為JN-2。并對其進行克隆純化和蝕斑實驗，為下一步的豬體攻毒試驗奠定基礎。E2囊膜糖蛋白是主要的保護性抗原，在受到病毒的自然感染或疫苗刺激時，宿主能迅速產生針對E2蛋白的中和性抗體，對JN-1和JN-2的 E2進行