食品常見有害物質(zhì)測定概述食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量

1、食品常見有害物質(zhì)的測定1 概述2食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定3食品中黃曲霉毒素的測定,食品中常見有害物質(zhì)的測定,有害物質(zhì)成分： 農(nóng)藥、黃曲霉毒素、苯并比、亞硝胺類化合物、苯酚、多氯聯(lián)苯、動植物毒素、氰化物、重金屬元素、非金屬元素、添加劑、激素、抗生素、獸藥,食品中農(nóng)藥殘留量的測定農(nóng)藥：農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用的各類農(nóng)藥。常用的有有機(jī)氯農(nóng)藥和有機(jī)磷農(nóng)藥2大類。農(nóng)藥殘留：指未分解而留存于土壤作物及環(huán)境進(jìn)而留存與食品的農(nóng)藥。測定方

2、法：2003年新制定的《食品衛(wèi)生檢驗方法》增加了42種測定農(nóng)藥的方法。用得較多的是氣相色譜法，其次是高效液相色譜法、分光光度法。,一、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的測定（GB/T5009·19—2003） 方法： 第一法 氣相色譜法 第二法 薄層色譜法有機(jī)氯農(nóng)藥的提取步驟：有機(jī)溶劑（丙酮、石油醚）提取凈化濃縮,,,食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定測定方法多，最有代表的：GB/T500

3、9·20—2003： 第一法： 水果、蔬菜、谷類中有機(jī)磷農(nóng)藥的多殘留的測定該法采用的是氣相色譜法，可檢測20種有機(jī)磷農(nóng)藥。 第二法： 糧、菜、油中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的測定。該法采用的也是氣相色譜法，可檢測9種有機(jī)磷農(nóng)藥。兩者區(qū)別：用不同的色譜分離柱。GB/T5009·199—2003（蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測）： 速測卡片（紙片法） 酶抑制率法（分光光度法）本

4、法為定性檢驗方法，因為速度快，廣泛使用中。,⑴原理膽堿酯酶底物（碘化硫代乙酰膽堿）+顯色劑（二硫代二硝基苯甲酸）→有色物質(zhì) PH8.0無農(nóng)藥，膽堿酯酶催化能力強(qiáng)，顯色深。有農(nóng)藥，膽堿酯酶催化能力弱，顯色淺。吸光度變化小，與對照溶液的吸光度差值大，抑制率大，農(nóng)藥含量高。⑵試劑⑶儀器,⑷測定步驟樣品處理對照溶液的吸光度變化值測定⊿A0 = A3min

5、－A開始樣品液的吸光度變化值測定⊿At = A3min－A開始⑸結(jié)果計算與判斷 ⊿A0－⊿At抑制率（%）= ——————×100 ⊿A0若抑制率≥50%為陽性結(jié)果，抑制率越大，農(nóng)藥殘留量越高。,第二節(jié) 食品中黃曲霉毒素的測定一、有關(guān)知識黃曲霉毒素：AFT分類：AFTB、AFTG特征：（1）性

6、質(zhì)特征污染糧油及其制品對光、熱、酸穩(wěn)定，對堿和氧化劑不穩(wěn)定,（2）結(jié)構(gòu)特征： 含二呋喃環(huán)、香豆素（3）測定方法：薄層色譜法牛清抗體反應(yīng)顯色法微粒篩選法二、黃曲霉毒素B1（AFT B1）測定（GB/T5009·22—2003） 第一法 薄層色譜法 第二法 牛清蛋白抗體反應(yīng)顯色法,薄層色譜法測定黃曲霉毒素B1測定1、原理 樣品中AFT B1經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化、濃縮并

7、經(jīng)薄層色譜分離后，在波長365nm紫外光下產(chǎn)生熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示熒光的強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)品AFT B1最低檢出量產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度比較來測定樣品中AFT B1的含量。,2、試劑三氯甲烷（AR） 正己烷（AR 沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）甲醇（AR）苯（AR）乙腈 （AR）無水乙醚 （AR）丙酮 （AR）(以上試劑應(yīng)重蒸，并應(yīng)經(jīng)檢驗對薄層色譜測定無干擾）,苯-乙腈(98:2)混合溶液甲醇-水（55:45

8、）混合溶液三氟乙酸（AR）氯化鈉 （AR）無水硫酸鈉（AR）硅膠G （薄層色譜用） 5%次氯酸鈉：稱取100g漂白精，加入500mL水，攪勻。另將80g工業(yè)用碳酸鈉（Na2CO3.10H2O）溶于500mL溫水中，倒入上述溶液中，攪勻，澄清過濾后貯存于帶橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒劑。,黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)貯備液： 用百萬分之一的微量分析天平精密稱取1-1.2mgAFT B1標(biāo)準(zhǔn)品，先加入2mL乙腈溶解后，

9、再用苯稀釋至100mL，避光置于4℃冰箱中保存。使用前用紫外分光光度計測定其濃度，再用苯-乙腈混合溶液調(diào)整其濃度為10ug/mL。（在350nm測定AFT B1的苯-乙腈溶液的吸光度，其摩爾消光系數(shù)為19800，可根據(jù)朗伯-比爾定律求出其濃度）。,黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I（1ug/mL）：吸取1.0mL10ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II（0.2ug/mL）

10、：吸取1.0mL 1ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合溶液定容。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液III(0.04ug/mL)：吸取1.0mL 0.2ug/mL的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液定容。,3、主要儀器玻璃板：5×20cm涂布器色譜展開槽（25×6×4cm）紫外光燈：100-125W，帶有波長365nm濾光片微量注射器：20uL

11、,10uL各一支,4、操作步驟⑴、樣品預(yù)處理 稱取4g混勻的花生油樣品于小燒杯中，用20mL石油醚或正己烷，將其轉(zhuǎn)移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分?jǐn)?shù)次洗燒杯，洗液并入分液漏斗中，振搖2分鐘，靜止分層后，將下層甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重復(fù)提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入20mL三氯甲烷，振搖2分鐘，靜止分層后，放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約10g先用三

12、氯甲烷濕潤的無水硫酸鈉的慢速濾紙過濾于50mL蒸發(fā)皿中，分液漏斗中再加5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷層一并濾入蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗過濾器，洗液并入蒸發(fā)皿中。在通風(fēng)柜中，將蒸發(fā)皿于65℃水浴上揮干，然后放入冰盒上泠卻2-3分鐘，準(zhǔn)確加入1mL苯-乙腈混合液，用帶橡皮頭滴管的管尖將殘渣充分混合，若有結(jié)晶析出，將蒸發(fā)皿取下，繼續(xù)溶解、混勻，晶體消失后用滴管吸取上清液轉(zhuǎn)移于2mL具塞試管中。,⑵、樣品測定1>薄層板的制備

13、 稱取約3g硅膠G，加相當(dāng)于硅膠量的2-3倍左右的水，用力研磨1-2分鐘，至成糊狀后立即倒入涂布器內(nèi)，推鋪成5×20cm、厚度為0.25 mm的薄層板三塊。于空氣中干燥約15分鐘后，在100℃下活化2小時，取出放入干燥器中保存。,2>點(diǎn)樣 將薄層板邊緣附著的吸附劑刮凈，在距薄層板底端3cm的基線上用微量注射器滴加樣液和標(biāo)準(zhǔn)液：第一點(diǎn)：10uL 0.04ug/mL AFT B1 標(biāo)液

14、第二點(diǎn)：20uL樣液第三點(diǎn)：20uL 樣液 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1 標(biāo)液第四點(diǎn)：20uL 樣液 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1 標(biāo)液 要求點(diǎn)距邊緣和點(diǎn)間距約為1cm,樣點(diǎn)直徑約3cm,大小相同，點(diǎn)樣時可用電吹風(fēng)冷風(fēng)邊吹邊點(diǎn)。,3>展開 在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，將點(diǎn)好樣的薄層板預(yù)展12cm，取出揮干。再于另一展開槽內(nèi)加10mL 丙酮+三氯

15、甲烷（8+92）混合溶劑，展開10-12cm，取出揮干。,4>結(jié)果觀察 將展開好的薄板放在365nm的紫外燈光下觀察：a.若第一點(diǎn)無熒光或都無熒光。說明薄板或展開劑未制備好，需重新制備。b.第一點(diǎn)有熒光，而其余三點(diǎn)無熒光。說明樣液中有熒光猝滅劑，樣液需重新制備。c.第一點(diǎn)有熒光，第二點(diǎn)無熒光，三、四點(diǎn)有熒光。說明樣液不含AFT B1或含量小于最低檢出量。d.四個點(diǎn)都有熒光。需做確證實驗后再進(jìn)行定量。,5&g

16、t;確證實驗 于另一薄板上左邊依次點(diǎn)二個樣：第一點(diǎn)：10uL0.04ug/mL AFT B1標(biāo)液第二點(diǎn)：20uL樣液 在以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸（TFA），待反應(yīng)5分鐘后，用電吹風(fēng)熱風(fēng)2分鐘，使溫度不高于40℃。 再于薄層板的右邊點(diǎn)以下二個點(diǎn)：第三點(diǎn)：10uL 0.04ug/L AFT B1 標(biāo)液第四點(diǎn)：20uL樣液 同第3>步展開后，于紫外光下觀察樣液是否產(chǎn)生與AFT B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)

17、相同的衍生物AFT B2a ,未加TFA的第三、四點(diǎn)作空白對照。,6>稀釋定量若第二點(diǎn)的熒光強(qiáng)度比第一點(diǎn)強(qiáng)，則根據(jù)其強(qiáng)度估計減少點(diǎn)樣體積，于另一薄板上點(diǎn)四個點(diǎn)：第一點(diǎn)：10uL 0.04ug/mL AFT B1標(biāo)液第二點(diǎn)：10uL 樣液第三點(diǎn)：15uL 樣液第四點(diǎn)：20uL 樣液展開后取熒光強(qiáng)度與第一點(diǎn)相同的樣點(diǎn)進(jìn)行計算。,5、計算 V1