梅毒講義牛磊

1、,祝大家工作順利！,性病實驗室檢測診斷與臨床解釋 鄒平縣人民醫(yī)院檢驗科牛磊,,內(nèi)容剛要,問題及背景性病實驗室檢測性病實驗室質(zhì)量管理,歷史上的梅毒患者,歷史上的梅毒患者,貝多芬、舒伯特、瑪麗塔德、波特萊爾、林肯、福樓拜、莫泊桑、凡高、尼采、王爾德、凱倫、布里森、喬伊斯、希特勒、列寧、斯大林、馬丁·路德......,肝炎，肺結(jié)核

2、，梅毒,梅毒發(fā)病報告數(shù)列傳染病第三位 我國出臺防控規(guī)劃,每小時一個梅毒寶寶？,案例聚焦,《性病防治管理辦法》 --衛(wèi)生部/ /衛(wèi)計委,目前我國監(jiān)測五種性病,梅毒概述,梅毒概述,梅毒分期,,,獲得性梅毒（后天梅毒）,胎傳性梅毒（先天梅毒）,,,,,早期梅毒病程<2年,晚期梅毒病程>2年,早期先天梅毒病程<2年,晚期先天梅毒病程>2年,,,,1一期梅毒2二期梅毒3早期潛伏梅毒,1三期皮膚黏膜骨骼

3、梅毒 2心血管，神經(jīng)，晚期潛伏期梅毒,1三期皮膚黏膜骨骼梅毒 2心血管，神經(jīng)，潛伏期梅毒,,一期梅毒,梅毒螺旋體,,皮膚或粘膜局部繁殖,,淋巴管,,附近淋巴結(jié),,梅毒病原學(xué)檢測暗視野顯微鏡核酸檢測,局部無任何癥狀,,潛伏期平均4周入侵局部炎癥反應(yīng),初瘡（硬下疳）,,,,一期梅毒,不治療4-5周自然消失進去一期潛伏期,,14-40天平均4周,,二 期 梅 毒,梅毒螺旋體,,血液,,,人體免疫作用,

4、,,大部分螺旋體被殺死,其余繁殖,6到8周,,低熱，淺表淋巴結(jié)腫大皮膚粘膜疹骨骼，眼睛，神經(jīng)系統(tǒng)炎癥癥狀,不治療,癥狀可自然消失，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài),,,二期潛伏梅毒,,,梅毒血清學(xué)檢測:特異性抗體檢測非特異性抗體檢測,梅毒病原學(xué)檢測暗視野鏡檢核酸檢測,,三期梅毒,二期 復(fù)發(fā)梅毒可反復(fù) 出現(xiàn),2 年后,晚 期梅 毒,侵犯,皮膚粘膜10%,骨骼,心血管系統(tǒng)10%,神經(jīng)系統(tǒng)15%,,（1）梅毒血清學(xué)檢測:特異

5、性抗體檢測非特異性抗體檢測（2）病理檢測,,獲得性梅毒的自然病程,,感染梅毒 螺旋體,2-4 周,一期梅毒,二期梅毒,1-3月,1-3 月,潛伏梅毒,,,,2到50年,終身潛伏 65%,,三期梅毒 35%,,各期梅毒取材部位及檢測方法,,梅毒的免疫性,梅毒疑似病例、確證病例診斷依據(jù),,梅毒實驗室檢測項目及臨床意義,梅毒實驗室檢測項目及臨床意義,病原學(xué)檢測,病原學(xué)檢測的臨床意義,常用梅毒實驗室檢測方法,血清學(xué)檢測,,非特異

6、,非 梅毒螺旋體特異性抗原實驗非 梅毒螺旋體抗體實驗抗 心磷脂抗體 實驗（反應(yīng)素）TRUST 、 RPR 、 VDRL試劑組成：卵磷脂，心磷脂，膽固醇,,現(xiàn)癥患者,,,特異,梅毒 螺旋體特異性抗原實驗梅毒 螺旋體抗體實驗抗 螺旋體抗體 實驗TP- - RT 、 ELISA 、 CLIA 、 TPPA 、 FTA ABS 、 WB 等試劑組成：梅毒螺旋體或其成分,梅毒患者,,,,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,非特異

7、,快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) 黑,甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 紅,性病研究實驗室試驗 (VDRL) 神經(jīng)梅毒,實驗?zāi)M,?窗口期?前帶現(xiàn)象?生物學(xué)假陽性?血清固定,,,,,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點,在卡片的一個圓圈內(nèi)加入50ul血清，同樣加入陽性及陰性對照儀器： 水平旋轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)速？轉(zhuǎn)幅？定性試驗 加 試劑量1 滴= = ？ u

8、l水平 旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)時間？28用小棒將血清和對照均勻涂開鋪散蓋滿整個圓環(huán)的表面，注意不能溢出圈外，試劑室溫預(yù)溫30分鐘，將抗原輕輕搖勻，吸取17ul抗原液加到每一個圓圈。,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點,定性試驗（TRUST為例）,（1）反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀上，轉(zhuǎn)速：100±2 r/min，轉(zhuǎn)幅2cm，旋轉(zhuǎn)8分鐘（2）在亮光下用肉眼觀察結(jié)果滴度相差兩個滴度才有臨床意義切勿使用振蕩器,非梅毒螺旋體抗

9、原血清學(xué)試驗操作要點,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點,1.根據(jù)需要確定稀釋度，1:1（原血）,1:2,1:4順延，在反應(yīng)板的每個圓環(huán)上加上1滴50ul0.9%的生理鹽水，勿將鹽水涂開2在第一個圓環(huán)內(nèi)加入50ul血清，用加樣槍來回吸放5-6次（避免氣泡形成），然后將混合液50ul加入第二個圓環(huán)，重復(fù)操作至需要稀釋度,最后一個圓環(huán)中50ul混合液棄去3.從最高稀釋度開始，將不同稀釋度的標本均勻涂布整個圈內(nèi)，不同患者血樣的混合棒不能混

10、用，4.在每個圓圈內(nèi)加入恢復(fù)至室溫的輕輕混勻的抗原17ul,,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗操作要點,*定量試驗-定量試驗血清稀釋不需要使用試管,定量試驗原倍血清滴度為1:1,,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,隱性梅毒一般滴度>1:8但不排除1 :8,,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,TPPA 陽性TRUST 原倍陰性需稀釋排除前帶反應(yīng),非梅毒螺旋體

11、抗原血清學(xué)試驗特點,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗特點,,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測,,特異,梅毒免疫層析法快速檢測 (RT) TP重組抗原,梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ （ELISA） ） TP重組抗原,發(fā)光免疫分析法（ （CLIA） ） TP重組抗原,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 金標準 TP,熒光螺旋體抗體吸收試驗（ （FTA-ABS） ） TP,梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（ （WB） ） TP,梅毒IgM抗體檢測 抗體檢測（ （IgM）

12、 ） 早期TP先天TP神經(jīng)TP,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗原理,TPPA,★TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性和特異性 ★試劑抗原：nichols株精制菌體成分 ★TPPA是目前WHO公認的梅毒抗原血清學(xué)試驗的“金標準”，常用于新方法、新試劑的參照標準,,FTA-ABS試驗,以完整形態(tài)的Nichol 梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter

13、 株螺旋體制備而成）處理過的患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FITC）標記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結(jié)合。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。梅毒螺旋體表面抗原、類屬抗原與非致病性密螺旋體間有交叉反應(yīng)，吸收劑可排除影響。FTA-ABS試驗是檢測梅毒的經(jīng)典“金標準”試驗。唯一排除了其他螺旋體干擾的實驗操作繁瑣，成本高，不適用于常規(guī)實驗室,TP—ELISA試驗原理,TP—ELISA試驗是用

14、重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗陽性反應(yīng)。本法可用于大樣本血清檢測。試劑抗原： TP基因重組抗原TP17、47、15、42.5分區(qū)抗原 不能區(qū)分IgG與IgM抗體，導(dǎo)致它們檢測敏感性增加。化學(xué)發(fā)光法的臨床應(yīng)用基本同ELISA,TP-RT 試 驗 原 理,以硝酸纖維素膜為載體，將重組的梅毒螺旋體抗原固定在膜上，待檢標本（如血清）與

15、標記的特異性抗原結(jié)合并沿著固相載體遷移，并顯示出有色條帶。本法快速、簡便；可疑結(jié)果可用TPPA或其他方法進行重復(fù)試驗。,梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義,梅毒螺旋體抗原血清試驗的臨床意義,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗特點,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)實驗特點,HIV感染者的梅毒血清學(xué)檢測在HIV感染的早期，機體免疫力尚正常，由于激活了B細胞使反應(yīng)性增強，梅毒非特異性抗體滴度往往增高，甚至出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。在HIV感染的晚期，由于機體免疫力明顯

16、下降，梅毒患者的非特異性抗體可呈陰性（假陰性）。?感染HIV的梅毒患者治療后非梅毒螺旋體試驗滴度下降比較慢。,,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋 （梅毒臨床診斷參考依據(jù)）,,先天（胎傳）梅毒的實驗室診斷依據(jù),梅毒 IgM抗體（ TP- IgM）,梅毒實驗室檢測方法,梅毒實驗室檢測策略,,過去: 必須RPR 初篩試驗 TPPA 確證試驗現(xiàn)在 : 可選 TP- - RT 初篩實驗 RPR 確證實驗,非梅毒螺旋體抗

17、原血清學(xué)試驗,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,,,,,,排除試驗假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染,排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染,,策略1 ：采用非梅毒螺旋體抗原血清實驗初篩,,,,淋球菌的實驗室檢測,淋球菌概述菌株保存,2004年－ 2013年全省梅毒、淋病報告例數(shù),我國的淋病去哪兒了？,淋病實驗室診斷,淋病實驗室診斷策略,,,淋球菌種保存,? 淋球菌培養(yǎng)基每2天傳代? 脫脂牛奶 --25℃ 2月，--70℃ 1