茶多酚對高糖作用下內(nèi)皮細胞自噬流的影響.pdf

1、目的：慢性高糖血癥是內(nèi)皮功能紊亂的重要原因。本研究觀察高糖對內(nèi)皮細胞自噬的影響，并探索茶多酚通過自噬對高糖狀態(tài)下的內(nèi)皮細胞發(fā)揮保護作用。
　　方法：體外培養(yǎng)的牛主動脈內(nèi)皮細胞培養(yǎng)在0.4和4mg/L的茶多酚、33mM的高糖和4mg/L的茶多酚與33mM的高糖相混合的培養(yǎng)基。用Western Blot方法測量干預(yù)后內(nèi)皮細胞中LC3-II、SQSTM1/p62和Beclin-1蛋白的含量；信號蛋白mTOR及其磷酸化蛋白p-mTOR(2

2、448)的水平。
　　結(jié)果：(1)茶多酚劑量依賴(P<0.05)和時間依賴(P<0.05)地上調(diào)LC3-II的蛋白水平，4mg/L的茶多酚具有最強的自噬誘導(dǎo)效應(yīng)(P<0.05)，并能升高Beclin-1蛋白的水平(P<0.05)和降低SQSTM1/p62蛋白的水平(P<0.05)。在溶酶體抑制劑BAF的作用下，茶多酚誘導(dǎo)的LC3-II蛋白水平更進一步地升高(P<0.05)。
　　(2)在6-24h，高糖時間依賴地升高LC3-

3、II的蛋白水平(P<0.05)。同時升高了SQSTM1/p62蛋白的水平(P<0.05)，降低了Beclin-1蛋白的表達水平(P<0.05)。在溶酶體抑制劑 BAF干預(yù)后，24h高糖作用下LC3-II蛋白水平并未進一步升高(P>0.05)。
　　(3)在高糖干預(yù)延長至72h后，LC3-II的蛋白水平顯著下降(P<0.05)。同時,72h高糖作用降低了Beclin-1蛋白的表達水平(P<0.05)，但未見SQSTM1/p62蛋白的

4、蛋白水平的改變(P>0.05)。在溶酶體抑制劑BAF干預(yù)后，72h高糖作用下的LC3-II蛋白水平輕微地升高(P<0.05)，并顯著地低于正常對照組(P<0.05)。
　　(4)茶多酚與高糖共處理24h，顯著地降低了高糖單獨作用引起的LC3-II蛋白水平升高(P<0.05)。同時，顯著地降低了高糖單獨作用引起的SQSTM1/p62蛋白的蛋白水平升高(P<0.05)，顯著地升高了高糖單獨作用引起的Beclin-1蛋白水平下降(P<0

5、.05)。在BAF干預(yù)下，與單獨24h高糖處理相比較，茶多酚顯著地升高了高糖狀態(tài)下LC3-II的蛋白水平(P<0.05)。
　　(5)茶多酚對72h高糖的干預(yù)，顯著地升高了高糖作用引起的LC3-II蛋白水平下降(P<0.05)。同時，顯著地降低了 SQSTM1/p62蛋白的蛋白水平(P<0.05)，顯著地升高了高糖單獨作用引起的Beclin-1蛋白水平下降(P<0.05)。在BAF干預(yù)下，與單獨72h高糖處理相比較，茶多酚顯著地升

6、高了高糖狀態(tài)下LC3-II的蛋白水平(P<0.05)。
　　(6)在24h高糖、72h高糖和茶多酚對高糖干預(yù)下，自噬通路蛋白mTOR、磷酸化蛋白p-mTOR(2448)蛋白表達水平在各個組間未見改變(P>0.05)，p-mTOR(2448)/mTOR比例數(shù)值在各個組間未見改變(P>0.05)。
　　結(jié)論：4mg/L茶多酚能增強內(nèi)皮細胞自噬流水平，而33mM高糖抑制了內(nèi)皮細胞的自噬流，4mg/L茶多酚可以緩解33mM高糖引起的