PFKFB3在高糖環(huán)境下對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用及機制研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩68頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:作為糖尿病性視網(wǎng)膜病變分級的重要標(biāo)志性特征,新生血管是整個DR發(fā)展中的關(guān)鍵性事件,大量研究發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞依靠無氧糖酵解產(chǎn)生能量來維持細(xì)胞功能,即形成“分支”,產(chǎn)生新生血管。但高血糖環(huán)境下內(nèi)皮細(xì)胞糖酵解對新生血管的作用機制仍不清楚,本研究將探討磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phospofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase3,PFKFB3)在高糖環(huán)境下對血管新生的可能作用

2、及其機制。
  方法:研究主要分為五個部分:第一部分采用正常糖(5mmol/L glucose,NG)和高糖(30mmol/L glucose,HG)分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)24h后,采用免疫印跡實驗(Western Blot,WB)和實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR

3、)檢測正常糖和高糖環(huán)境下PFKFB3的表達(dá);第二部分采用正常糖(5mmol/L glucose,NG)、正常糖加SiRNA-1(NG+SiRNA-1)、正常糖加SiRNA-2(NG+SiRNA-2)和正常糖加SiRNA-3(NG+SiRNA-3)轉(zhuǎn)染HUVECs后,繼續(xù)培養(yǎng)24h,采用WB方法檢測每組中PFKFB3的表達(dá)。第三部分采用正常糖(NG)、正常糖加SiRNA(NG+SiRNA)、高糖(HG)和高糖加SiRNA(HG+SiRNA

4、)培養(yǎng)HUVECs后,分別將每組中的HUVECs加入對應(yīng)的基質(zhì)膠中繼續(xù)培養(yǎng),對每個孔進(jìn)行照相,最后采用ImageJangiogenesis軟件對每組進(jìn)行管腔形成能力檢測。第四部分采用正常糖(NG)和正常糖加SiRNA(NG+SiRNA)培養(yǎng)HUVECs,采用WB方法檢測磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylation Protein kinase B,pAkt)及蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB or Akt)的表達(dá)

5、。第五部分采用正常糖(NG)、高糖(HG)和高糖加SiRNA(HG+SiRNA)培養(yǎng)HUVECs,采用WB方法檢測pAkt及Akt的表達(dá)。
  結(jié)果:第一部分高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的HUVECs相較于正常糖環(huán)境下的PFKFB3蛋白表達(dá)明顯升高(t=5.457,P=0.000,P<0.01),且高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的HUVECs相較于正常糖環(huán)境下的PFKFB3mRNA表達(dá)也明顯升高(t=4.466,P=0.000,P<0.01);第二部分SiRN

6、A-1對于PFKFB3的抑制效果最為明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000,P<0.01);第三部分高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)的HUVECs的管腔形成能力是明顯低于正常對照組的(P=0.005,P<0.01),正常糖加入SiRNA的管腔形成能力相較于對照組來說也是明顯升高的(P=0.031,P<0.05),高糖培養(yǎng)基中加入SiRNA的管腔形成能力相較于單純高糖培養(yǎng)基的管腔形成能力是明顯增加的(P=0.041,P<0.05),正常對照組與高糖培養(yǎng)基

7、中加入SiRNA相比較則沒有明顯差異(P=0.173,P>0.05);第四部分正常糖培養(yǎng)基中加入SiRNA抑制PFKFB3后,HUVECs的pAkt的表達(dá)量相較于單純正常糖培養(yǎng)基中明顯減少(t=16.91,P=0.00,P<0.01);第五部分正常糖培養(yǎng)基組中的pAkt表達(dá)明顯高于高糖培養(yǎng)基組(P=0.004,P<0.01),高糖培養(yǎng)基加入SiRNA組中pAkt表達(dá)明顯高于高糖培養(yǎng)基組(P=0.000,P<0.01),當(dāng)高糖培養(yǎng)基中加入

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論