目的基因驗證課件

1、目的基因驗證,,酶切驗證方向,Sense,Anti-sense,Promoter,Promoter,Coding sequence,Coding sequence,NOS,,NOS,雙酶切,單酶切,,酶切位點的選擇,1、載體上有，目的片段內(nèi)部也有，但最好都分別只有一個位點；2、目的片段上的酶切位點不要位于片段中央附近，要選取能夠區(qū)分大小的位點；,1、用連接的兩種酶驗證；2、參照單酶切。,,酶切驗證方向的方法很靈活多變，具體情況具體分析

2、。,pCxsn-PtWRKY60的方向驗證,ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGGCAGAAAGAGAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCT

3、TGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCATCACCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGG

4、TCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACA

5、GAAGGAAAATCCTTCTAAAAGATCCATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGA,PtWRKY60 CDS序列,pCxsn載體,NEBcutter分析片段上的酶切位

6、點,,10ul體系酶切pCxsn-PtWRKY60,Plasmid: 8.75ul; M buffer: 1ul; HindIII: 0.25ul.37℃水浴2-3h,1541bp,1117bp,AS,S,測序,測序的樣本可以為：菌液、質(zhì)粒、PCR產(chǎn)物、其他；,測序要提供測序引物；,一次反應(yīng)大約可測800bp的長度，如果目的片段超過這一長度可以選擇測通、雙向，或者是單向walking等方法。,測序單,測序結(jié)果,波峰信號,序列信息,