抗cd單抗對免疫系統的影響馬金玲

1、主要內容,抗CD20單抗介紹,1,單抗起源和發(fā)展,1975年,生物學家克勒Kohler與米爾斯坦Milstein發(fā)明了用來制備單克隆抗體的雜交瘤技術，1984年獲得諾貝爾醫(yī)學和生理學獎。從1986 年6 月，由Ortho 研發(fā)的用于治療器官移植排斥反應的首個單克隆藥物Muromonab-CD3 在美國上市；到2002 年，第一個全人源化單克隆抗體Humira 上市，人源化技術成熟后，進入臨床試驗的抗體藥物增長率明顯

2、開始高于小分子藥物。,2,美國FDA批準的單抗藥物,3,2014年全球銷售額最高的單抗藥物,4,抗CD20單抗,CD20是B淋巴細胞的特異性表面標志，該抗原位于前B和成熟B淋巴細胞的表面，而造血干細胞、原始B淋巴細胞、正常漿細胞或其它正常組織不表達CD20。該抗原表達于95%以上的B淋巴細胞型的非霍奇金氏淋巴瘤。,5,抗CD20單抗,在與抗體結合后，CD20不被內化或從細胞膜上脫落，CD20不以游離抗原形式在血漿中循環(huán)，因此

3、，也就不會與抗體競爭性結合。抗CD20單抗與B淋巴細胞上的CD20結合，并引發(fā)B細胞溶解的免疫反應。細胞溶解的可能機制包括補體依賴性細胞毒性（CDC）和抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)。,6,國外上市產品介紹,7,作用機制,8,抗CD20單抗的研究,本中心已經開展過5個抗CD20單抗的臨床前安全性評價，適應癥為B細胞性非霍奇金淋巴瘤。 將3個試驗中的數據進行總結，評價該類單抗對免疫系統的影響。,9,試驗設計,靜

4、脈輸注給藥，給藥速度為0.3-0.4mL/kg/min，每周給藥1次，連續(xù)給藥4周。,10,檢測指標,臨床觀察白細胞及分類T淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）B淋巴細胞亞群（CD20+、CD40+）抗藥抗體（ELISA）細胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5和IL-6,流式）血清免疫球蛋白（IgG、IgM和IgA，ELISA）血清補體（C3、C4,ELISA）急性C反

5、應蛋白（免疫熒光干式定量）循環(huán)免疫復合物（ELISA）骨髓涂片免疫器官脾臟、胸腺及淋巴結病理組織學檢查,11,實驗結果,臨床觀察 試驗期間，供試品10 mg/kg劑量組2只動物在第5次給藥結束后出現死亡，美羅華30mg/kg對照組4只動物死亡，其中3只動物在第5次給藥結束后死亡，1只動物在給藥14天前后肢可見散在點狀紅斑，精神不振，被毛粗糙、俯臥、呼吸困難，在第20天發(fā)現死亡。,12,實驗結果（續(xù)）,13,外周血淋巴

6、細胞變化,實驗結果（續(xù)）,(×109/L),淋巴細胞計數的變化趨勢,14,T淋巴細胞變化,實驗結果（續(xù)）,(%),CD4+細胞的變化趨勢,15,B淋巴細胞變化,實驗結果（續(xù)）,(%),CD20+細胞的變化趨勢,16,實驗結果（續(xù)）,B淋巴細胞變化,(%),CD40+細胞的變化趨勢,17,實驗結果（續(xù)）,B淋巴細胞變化,18,細胞因子 2個試驗中安樂死動物的細胞因子未見到與給藥相關的異常改變。,實驗結果（續(xù)）,(pg/

7、mL),IL-6的變化情況,19,抗藥抗體產生情況,實驗結果（續(xù)）,抗體具有中和藥物活性的作用。,20,病理組織學變化 末次藥后次日，供試品組和美羅華對照組安樂死動物可見脾臟白髓淋巴小結和/或邊緣區(qū)、腸系膜/腹股溝等淋巴結的皮質淋巴小結中淋巴細胞數減少。,實驗結果（續(xù)）,21,指標變化分析藥理學作用： 給藥后表現為外周血WBC、Lymph絕對計數降低； CD20+的B淋巴細胞耗竭，CD3+的淋巴細胞百分比增加脾臟白髓和/或

8、邊緣區(qū)、腸系膜和腹股溝淋巴結的皮質淋巴小結中淋巴細胞數減少。,結果分析,22,結果分析（續(xù)）,動物死亡原因分析死亡時間：5/6動物集中在第5次 藥后即刻或10-20分鐘左右，可見口腔和鼻腔有暗紅色泡沫狀液體，1/6動物D14開始，前后肢可見散在點狀紅斑，在D20發(fā)現死亡。 藥理學作用相關指標的變化：CD3,CD20,Lymph,免疫器官。 細胞因子：IL-6和TNFα可見升高。 病理變化：4只動物可見肺臟出血水腫，1只動物見皮

9、膚感染、脾臟壞死、胸腺萎縮、胃粘膜出血，1只動物未見致死性病變。,23,細胞因子變化,結果分析（續(xù)）,24,美羅華說明書顯示，在臨床試驗中有超過50%的患者報道了輸注相關反應的體征和癥狀，在輸注24小時內發(fā)生。最常見的輸注相關反應包括細胞因子釋放綜合征、顏面潮紅、咽喉刺激和震顫等，其他輸注相關綜合征還包括低血壓、發(fā)熱、呼吸困難、肺水腫、支氣管痙攣、心肌梗死等等。在上市后的使用中，曾有報道致命的嚴重輸注反應。利妥昔單抗引起

10、的輸注反應可能與細胞因子和/或其他化學介質的釋放有關。,結果分析（續(xù)）,25,死亡原因分析 嚴重的輸液反應，肺出血、水腫，與細胞因子釋放有關。 嚴重的皮膚粘膜反應，皮膚破潰、感染，導致多臟器衰竭。 綜合分析，動物死亡原因主要是與免疫反應有關。,結果分析（續(xù)）,26,結果分析（續(xù)）,供試品和市售對照美羅華的比較 各免疫指標變化如白細胞，淋巴細胞，CD3+，CD20 +，CD40+變化基本一致，且變化幅度基本一致