應用crisprcas9技術(shù)沉默muc2基因研究及其在鼠李糖乳桿菌gg株抑制大腸桿菌e.colik1株e44侵襲腸上皮細胞中的作用

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 3 級碩士學位論文應用C R I S P R ／C a s 9 技棚M u c 2 基因研究及其在艮翰醐桿菌G G 州大腸桿菌E ．c o ／／K 1 株E 4 4 僦E 皮細胞中的作用K n o c k d o w n o f M u c 2 g e n e i nH t 2 9 b y C R I S P R ／C a s 9 a n d i t se f f e c t so n t h e i n h i

2、 b i t i o n o f E ．c o l iK 1 p e n e t r a t i o n o f t h e● ·● ’l ‘ l l ■ o ‘ i n t e s t m a l D a r r i e r D y D r o D ] o t l c s課題來源：南方醫(yī)科大學公衛(wèi)學院院長基金資助( G W 2 0 1 5 1 8 ) ；2 0 1 5年度廣東省級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目( 2 0 1 5

3、1 2 1 2 1 0 2 6 )專 業(yè) 名學位申請指 導 教稱 病原生物學人 邱嘉文師 曹虹教授答辯委員會主席答辯委員會成員論文評閱人20 1 6 年2 月2 5 日 廣州摘要得到的一種黏蛋白核心肽基因，定位在染色體1 l p l 5 ．3 ～1 5 。5 上，是編譯分泌型黏蛋白M u c i n 2 ( M u c 2 ) 的主要基因。黏蛋白M u c 2 是主要的回結(jié)腸黏蛋白，也是構(gòu)成腸道黏液層的主要成分，兼具組織特異性和細胞特異

4、性。正常時僅在小腸和空腸的杯狀細胞中有表達且表達量較低，可在腸腔的上皮表面形成一層黏液層發(fā)揮潤滑和拮抗致病菌的黏附和侵襲的作用[ 7 】。R ．M a c k 等已證實黏蛋白由上皮細胞分泌，可阻擋腸致病性大腸桿菌( e n t e r o p a t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i ，E P E C ) 接觸腸上皮細胞，避免E P E C 等黏附腸上皮細胞造成感染。C h a n

5、gC Y 等發(fā)現(xiàn)該黏蛋白不僅在腸化生黏膜中出現(xiàn)過表達，在多種上皮來源的腸道疾病和腫瘤中亦出現(xiàn)結(jié)構(gòu)和功能質(zhì)或量的改變。益生菌是～類通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用的活性微生物，對改善腸道菌群結(jié)構(gòu)、抑制病原菌侵襲、提高機體免疫力等方面有重要作用。國內(nèi)外研究證實，益生菌可有效黏附于腸道上皮細胞，通過自身及產(chǎn)生代謝物和抑制物排斥致病菌。益生菌制劑抑制病原微生物黏附腸道上皮細胞多由腸道黏液素M u c 2 、M u c 3 的表達作為媒

6、介，通過加強腸內(nèi)黏液素的分泌來產(chǎn)生空間障礙或是模仿上皮細胞的細菌結(jié)合位點進行競爭抑制。近年來我們對如何激發(fā)高效的腸道黏膜免疫應答進行了研究，發(fā)現(xiàn)在強化腸道屏障功能方面較有成效的長雙歧桿菌( B i f i d o b a c t e r i u m ) 、保加利亞乳桿菌( L a c t o b a c i l l u s b u l g a r i c u s )和嗜熱鏈球菌( S t r e p t o c o c c u st h

7、 e r m o p h i l u s ) 的腸道益生菌組合可顯著抑制E ．c o l iK 1 株黏附與侵襲新生大鼠腸道，從而降低腦膜炎發(fā)生率。與上述三種益生菌相比，鼠李糖乳桿菌G G ( L a c t o b a c i l l u sr h a m n o s u s G G ，L G G ) 株作為首批獲得中國衛(wèi)生部正式批準的新資源食品，能更顯著調(diào)節(jié)胃腸道菌群平衡，存活并穩(wěn)定定殖人體腸道，但在腦膜炎相關(guān)性研究中卻應用極少。因