結(jié)核分枝桿菌tb10.4蛋白單元克隆抗體研制與鑒定

1、分類號—— U DC ——學(xué)號M Q 墨Q 魚絲 密級——學(xué)位論文結(jié)核分枝桿菌T B l 0 ．4 蛋白單克隆抗體研制與鑒定歐珍指導(dǎo)教師姓名： 筮塹圭整撞：揚(yáng)劌盤堂! 鎏菱塹劌! ! ! §Q Q !申請學(xué)位級別：一亟± 學(xué)科專業(yè)名稱： 亟墮?？锾?論文提交日期：—— 論文答辯日期：學(xué)位授予單位： 揚(yáng)劌盤堂 學(xué)位授予日期：答辯委員會主席：論文評閱人：2 0 1 1 年6 月5L ■■r’k■■，歐珍結(jié)核分枝桿菌T B

2、 l 0 ．4 單抗研制鑒定 2進(jìn)行小量誘導(dǎo)表達(dá)；S D S ．P A G E 檢測目的表達(dá)產(chǎn)物，對正確表達(dá)的重組菌蛋白表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化；在蛋白表達(dá)優(yōu)化條件下，大量誘導(dǎo)表達(dá)T B l 0 ．4 融合蛋白，應(yīng)用針對T B l 0 ．4 融合標(biāo)簽的親和層析柱純化獲得帶6 ×H i s 和G S T 標(biāo)簽的T B l 0 ．4 蛋白，純化的H I S ．T B l 0 ．4 和G S T - T B l 0 ．4 可分別作為T B

3、l 0 ．4 單克隆抗體研制的免疫原和檢測原，從而為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展提供了必要的生物材料。二．T B l 0 ．4 單克隆抗體制備及特性鑒定以免疫原H I S ．T B l 0 ．4 免疫小鼠制取多抗血清，G S T - T B l 0 ．4 包被E L I S A 板棋盤滴定試驗(yàn)建立用于T B l 0 ．4 單克隆抗體篩選的間接E L I S A 方法。單抗制備小鼠采用脾內(nèi)免疫法，免疫原與弗氏完全佐劑乳化充分后，經(jīng)皮下途徑免疫B A L

4、 B ／c d x 鼠，每只1 0 0 9 9 ，2 1 天后，進(jìn)行脾內(nèi)免疫，每只2 0 J _ t g ，后三天取脾臟融合，依據(jù)經(jīng)典小鼠源單克隆抗體程序，最終篩選出8 株穩(wěn)定分泌T B l 0 ．4 單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。8 株單抗均識別原核表達(dá)的T B l 0 ．4 蛋白，表現(xiàn)出良好的特異性，其中的4株單抗能識別重組腺病毒表達(dá)的T B l 0 ．4 蛋白。單抗亞型鑒定均為I g G l ，制備的單抗腹水效價(jià)達(dá)到1 ×1