用于毛細(xì)管電泳分離DNA及蛋白質(zhì)的準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)的合成與表征.pdf

1、毛細(xì)管電泳和微芯片毛細(xì)管電泳取代傳統(tǒng)凝膠電泳，使用無交聯(lián)的高分子溶液作為無膠篩分介質(zhì)，成為一種高效、微量、高靈敏度及自動化的分離分析方法，已在醫(yī)學(xué)、法醫(yī)鑒定、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注，是分離帶電生物大分子最有效、最廣泛的技術(shù)之一。 目前，聚丙烯酰胺是無膠毛細(xì)管電泳分離DNA最好的篩分介質(zhì)，據(jù)報道在55分鐘內(nèi)可以對1000個堿基DNA進(jìn)行分離，讀寫準(zhǔn)確率高達(dá)98％。但是聚丙烯酰胺有兩個主要的缺點：①為了得到更高的DNA讀寫長度，聚丙

2、烯酰胺的分子量一般特別高，因而聚合物溶液的粘度也特別大；②聚丙烯酰胺對毛細(xì)管內(nèi)壁的涂敷能力非常弱，導(dǎo)致毛細(xì)管內(nèi)存在很強(qiáng)的電滲流。在對生物大分子分離時若單獨使用聚丙烯酰胺溶液必須事先對毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行涂敷。合成同時具有自涂敷能力，適宜的粘度，優(yōu)良篩分性能的聚合物是目前用于毛細(xì)管電泳分離生物大分子的介質(zhì)研究中的熱點。但目前合成的均聚物很少同時滿足上述條件，因此，由具有不同性質(zhì)的單體合成的無規(guī)共聚物、嵌段共聚物、接枝共聚物、共混聚合物、微交聯(lián)納

3、米凝膠聚合物和準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)被合成、設(shè)計用于分離生物大分子。準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)是由兩種或兩種以上聚合物相互貫穿而形成的聚合物網(wǎng)絡(luò)，制備過程一般是首先合成出一種聚合物A，再在聚合物溶液中引發(fā)聚合溶解在溶液中的另一單體B，就地聚合形成準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)。聚合物形成的網(wǎng)絡(luò)能夠減少宏觀相分離，形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)比聚合物共混方法形成的網(wǎng)絡(luò)更為穩(wěn)定，是目前由不同種類單體合成共聚物的較好的方法。 在這篇論文中，我們合成了一種新的由聚丙烯酰胺與聚N-羥甲基丙

4、烯酰胺構(gòu)成的準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)，這種聚合物網(wǎng)絡(luò)同時具有線形聚丙烯酰胺對DNA優(yōu)良的篩分性能和聚N-羥甲基丙烯酰胺對毛細(xì)管內(nèi)壁動態(tài)涂敷的能力。并討論了DNA測序溫度、毛細(xì)管內(nèi)測序電壓和準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)中聚N-羥甲基丙烯酰胺的含量對DNA測序的影響。用2.5％(w/v)的這種介質(zhì)在沒有對軟件系統(tǒng)優(yōu)化的情況下75分鐘內(nèi)對標(biāo)準(zhǔn)DNA的讀寫長度高達(dá)1012個堿基對。另外我們還嘗試?yán)糜删€性聚丙烯酰胺與聚N,N'-二甲基丙烯酰胺構(gòu)成的準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)對毛細(xì)管進(jìn)行