可重新自組裝肝素納米粒聯(lián)合抗增殖和抗血管生成治療膠質(zhì)瘤的研究.pdf

1、目的:開發(fā)可跨越血腦屏障(BBB)發(fā)揮抗膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、腫瘤內(nèi)皮依賴性血管(EDV)和血管生成擬態(tài)(VM)的可重新自組裝肝素納米粒，考察其體內(nèi)外生物活性和作用機(jī)制，為膠質(zhì)瘤的藥物研發(fā)提供更好的思路，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:通過(guò)核磁共振氫譜(1H NMR)、紫外分光光度計(jì)(UV)、BCA蛋白定量和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MOLDI-TOF)驗(yàn)證可重新自組裝肝素納米粒(H-S-R NPs1)是否制備成功;透射電子顯微

2、鏡(TEM)和動(dòng)態(tài)光散射(DLS)研究其在水溶液和BBB環(huán)境中的表征;在體外血腦屏障模型中研究其在不同條件下的BBB穿透能力;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、共聚焦顯微鏡、CCK-8、三維培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)考察其在體外對(duì)EphA2和αvβ3的膠質(zhì)瘤細(xì)胞和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶向能力、增殖和微管形成抑制能力;建立皮下/原位膠質(zhì)瘤模型，通過(guò)活體成像考察其體內(nèi)生物分布，并考察其體內(nèi)抑瘤效果;通過(guò)免疫組化Ki67、CD34/PAS雙重染色研究其作用機(jī)制;HE染色評(píng)價(jià)其體內(nèi)

3、安全性。
　　結(jié)果:1H NMR、UV、BCA蛋白定量和MOLDI-TOF結(jié)果證實(shí)成功制備H-S-RNPs1，其SWL和cRGD肽含量分別是12.57％和7.61％(w/w);TEM和DLS結(jié)果顯示H-S-R NPs約為均勻單分散的球形粒子，在水中的粒徑為164±16nm，在血液模擬環(huán)境中粒徑變小為63±11nm;體外血腦屏障模型結(jié)果顯示這種更小的粒徑有利于其跨越BBB;流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦顯微鏡EphA2和αvβ3高表達(dá)的U87、

4、U251、HUVEC細(xì)胞對(duì)單靶向的H-S1、H-R1和雙靶向的H-S-R NPs1都有良好的攝取，而EphA2和αvβ3低表達(dá)的HEB細(xì)胞攝取較低;CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示H-S-R NPs1具有相對(duì)H-S1、H-R1和H-S-R NPs2更好的EphA2和αvβ3過(guò)表達(dá)細(xì)胞殺傷效果，而所有聚合物對(duì)HEB細(xì)胞都沒有明顯的殺傷效果;微管形成實(shí)驗(yàn)表明H-S-R NPs1在U87、U251和HUVEC上展現(xiàn)了比H-S1和H-R1更好的抑制微管形

5、成的效果;體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，H-S-R NPs1在U251皮下膠質(zhì)瘤荷瘤鼠和U87原位膠質(zhì)瘤荷瘤鼠中都可以快速蓄積到腫瘤部位（0.5小時(shí)），12小時(shí)達(dá)到峰值，然后逐漸衰減;離體器官成像和組織切片共聚焦顯微鏡結(jié)果證實(shí)H-S-R NPs1可跨越血/腫瘤屏障到達(dá)膠質(zhì)瘤組織;體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，H-S-R NPs1在皮下/原位膠質(zhì)瘤荷瘤鼠中均有良好的抑制膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)和延長(zhǎng)荷瘤鼠生存期的效果;免疫組化結(jié)果顯示H-S-R NPs1治療組的腫瘤中

6、Ki67的表達(dá)率(20.39±2.57％)明顯低于對(duì)照組(89.69±3.74％)和H-S1治療組(58.78±4.19％)，而H-S-R NPs1治療組(11.33±0.58)的腫瘤中包含EDV(CD34+)和VM(CD34-/PAS+)的管道結(jié)構(gòu)也明顯少于對(duì)照組(62.33±9.5)和H-S1治療組(30.67±2.89);HE染色結(jié)果顯示未發(fā)現(xiàn)H-S-R NPs1具有明顯的器官毒性。
　　結(jié)論:本研究制備的可重新自組裝肝素納