門冬酰胺酶對(duì)不同白血病細(xì)胞增殖抑制及兒童ALL融合基因動(dòng)態(tài)檢測(cè)的研究.pdf

1、第一部分門冬酰胺酶對(duì)不同白血病細(xì)胞體外增殖及細(xì)胞周期的影響
　　目的：探討門冬酰胺酶（L-asp）對(duì)Jurkat、K562、K562/ADM三種白血病細(xì)胞的體外增殖抑制作用及細(xì)胞周期的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)Jurkat、K562、K562/ADM三種細(xì)胞，取對(duì)數(shù)期且生長良好的細(xì)胞用L-asp進(jìn)行干預(yù)。Jurkat細(xì)胞用不同濃度L-asp（0.02U/ml、0.1 U/ml、0.5 U/ml、2.5 U/ml、12.5 U

2、/ml），K562和K562/ADM細(xì)胞用不同濃度L-asp（0.1 U/ml、1 U/ml、10 U/ml、100 U/ml、1000 U/ml）分別處理24h、48h、72h，細(xì)胞增殖抑制率采用CCK-8法檢測(cè)，細(xì)胞周期采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
　　結(jié)果：1．（1）相同時(shí)間下不同濃度L-asp作用于Jurkat、K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞，隨著濃度的增加細(xì)胞增殖抑制率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；相同濃度L-as

3、p作用于Jurkat細(xì)胞、K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞不同時(shí)間，隨著時(shí)間的延長細(xì)胞增殖抑制率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（2）相同濃度L-asp作用相同時(shí)間時(shí)，K562細(xì)胞與K562/ADM細(xì)胞抑制率相比，除0.1U/mlL-asp作用24h、48h抑制率無明顯差別（P＞0.05），在其他濃度時(shí)間作用下，L-asp對(duì)K562/ADM細(xì)胞的抑制率大于K562細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（3）相同時(shí)間下L-as

4、p對(duì)不同白血病細(xì)胞增值抑制率的作用，Jurkat>K562/ADM>K562。
　　2.24h時(shí)Jurkat、K562、K562/ADM細(xì)胞的IC50分別為0.62ug/ml，766.34ug/ml，16.10ug/ml；48h時(shí) Jurkat、K562、K562/ADM細(xì)胞的 IC50分別為0.11ug/ml，399.55ug/ml，6.17ug/ml；72h時(shí) Jurkat、K562、K562/ADM細(xì)胞的 IC50分別為0.

5、03ug/ml，308.19ug/ml，1.50ug/ml。
　　3.（1）與對(duì)照組比較，不同濃度的L-asp作用Jurkat、K562、K562/ADM的G0/G1期均明顯升高，差異具有顯著性（P＜0.05）。（2）相同時(shí)間下不同濃度L-asp作用于Jurkat細(xì)胞、K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞，隨著濃度的增加G0/G1期細(xì)胞所占比例增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；相同濃度L-asp作用于Jurkat細(xì)胞、K562

6、細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞不同時(shí)間，隨著時(shí)間的延長G0/G1期細(xì)胞所占比例增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（3）相同濃度L-asp作用相同時(shí)間時(shí)，K562細(xì)胞與K562/ADM細(xì)胞G0/G1期所占比例均有不同，K562/ADM細(xì)胞G0/G1期所占比例大于K562細(xì)胞，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（4）相同時(shí)間下L-asp對(duì)不同細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞所占比例的影響，Jurkat>K562/ADM>K562。
　　結(jié)論：

7、L-asp對(duì)Jurkat、K562、K562/ADM細(xì)胞的增殖均有抑制作用，但不同白血病細(xì)胞對(duì)L-asp敏感性不同；L-asp可以將細(xì)胞阻滯在G0/G1期，對(duì)不同白血病細(xì)胞的阻滯作用也不同。
　　第二部分兒童急性淋巴細(xì)胞性白血病融合基因動(dòng)態(tài)檢測(cè)及其意義
　　目的：探討在兒童急性淋巴細(xì)胞白血病治療過程中融合基因動(dòng)態(tài)檢測(cè)的臨床意義，為臨床治療提供幫助。
　　方法： ALL患兒168例，融合基因陰性84例，融合基因陽性84例

8、，其中包括TEL-AML1、EVI1、其他融合基因（BCR-ABL、E2A-PBX1、SIL-TAL1、MLL重排）、雙融合基因陽性（EVI1，E2A-PBX1雙表達(dá)；EVI1，TEL-AML1雙表達(dá)；EVI1，SIL-TAL1雙表達(dá)；TEL-AML1，MLL重排雙表達(dá)），在發(fā)病初期及治療過程中通過基因擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)融合基因的變化和臨床多因素來分析臨床療效，根據(jù)卡方檢驗(yàn)、Kaplan-Meier及COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行分析。
　

9、　結(jié)果：1.融合基因陽性ALL患兒對(duì)OS無顯著影響（χ2=3.36，P＞0.05），對(duì)EFS有顯著影響（χ2=14.61，P＜0.05）；TEL-AML1患兒比基因陰性患兒、其他融合基因患兒EFS率顯著升高（χ2=6.88、3.93，P＜0.05）。
　　2.TEL-AML1、其他組融合基因持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒比融合基因未持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒3年EFS率顯著升高（χ2=8.93、6.09，P＜0.05），EVI1、雙融合基因陽性患兒兩者之間無明顯

10、差異（χ2=1.53、0.67，P＞0.05）。
　　3.融合基因1年內(nèi)是否轉(zhuǎn)陰對(duì)患兒3年EFS率無明顯意義（χ2=0.82,2.75,＜0.01,0.67，P＞0.05）。
　　4.初發(fā)ALL融合基因陽性且基因未持續(xù)轉(zhuǎn)陰患兒年齡>10歲，免疫分型為T型，臨床危險(xiǎn)度為高危，誘導(dǎo)緩解治療第15天、第33天MRD≥10-2患兒3年EFS率顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.54～7.97，P＜0.05）。
　　5.初發(fā)A