歐亞旋覆花總黃酮對衰老骨髓間充質(zhì)干細胞的保護作用.pdf

1、本文闡述了歐亞旋覆花總黃酮對衰老骨髓間充質(zhì)干細胞的保護作用。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：大鼠原代骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)及鑒定。
　　目的：
　　大鼠BMSCs體外分離、培養(yǎng)、純化，觀察細胞形態(tài)、鑒定細胞表面標志物及細胞多向分化能力。
　　方法：
　　在體外通過全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs，并進行形態(tài)學觀察，流式細胞儀檢測細胞表面標記物及細胞周期分布，分別向成脂、成骨方向誘導分化。
　　結果：

2、
　　大鼠BMSCs是呈放射狀排列的梭形細胞集落，可連續(xù)穩(wěn)定傳代3代以上。第3代BMSCs的表面標志物CD29、CD44、CD90均呈陽性表達，而CD11b呈陰性表達。成脂、成骨誘導分化好，油紅O染色和茜素紅染色均呈陽性。細胞周期分析顯示BMSCs符合正常細胞生長特征且生長活躍。
　　結論：
　　全骨髓貼壁法培養(yǎng)大鼠BMSCs較易分離、純化、擴增細胞，所獲細胞對實驗研究具有重大意義。
　　第二部分：探索D-半乳糖

3、誘導骨髓間充質(zhì)干細胞衰老的最佳作用濃度。
　　目的：
　　探索構建D-gal誘導BMSCs衰老的最佳作用濃度。
　　方法：
　　實驗分組如下：正常對照組（Control組）；低濃度組（L組，BMSCs+10g/L D-gal）；中濃度組（M組，BMSCs+20g/LD-gal）；高濃度組（H組，BMSCs+40g/L D-gal）。CCK-8法檢測細胞增殖率，試劑盒檢測 SOD活性及 MDA含量，流式細胞術檢測細

4、胞凋亡，Western blot檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl2、cleaved-caspase-3的表達量。
　　結果：
　　L、M、H組的細胞增殖能力較 Control組顯著降低（P均＜0.01），且隨濃度增高增殖率逐漸降低，M、H組與L組比較差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。3種濃度的D-gal誘導的細胞ROS及MDA含量較Control組顯著升高（P均＜0.01），且隨D-gal濃度增加ROS及MDA含量逐漸升高，

5、M、H組與 L組比較差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。3種濃度的D-gal誘導的細胞SOD活性較Control組顯著降低（P均＜0.01），且隨濃度升高SOD活性逐漸降低，M組與L組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.07），H組與 L組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。3種濃度的D-gal誘導的細胞凋亡較Control組顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.01），但隨著濃度增高，凋亡逐漸降低，M組與L組比較差異無統(tǒng)計學意義（P=0.

6、105），H組與L組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），且M和H組主要引起細胞晚期凋亡和壞死。3種濃度的D-gal誘導的細胞中凋亡相關蛋白cleaved-caspase-3的表達及Bax/Bcl2較Control組顯著增加（P均＜0.01），但各實驗組表達量之間差異無統(tǒng)計學意義（P均＞0.05）。
　　結論：
　　D-gal可誘導 BMSCs發(fā)生衰老，這可能與 D-gal促使BMSCs內(nèi)氧化應激水平升高導致細胞凋亡有關。但