基于DNA折紙界面上IgG抗體結(jié)構(gòu)生物學(xué)的研究.pdf

1、本文利用 DNA折紙作為反應(yīng)平臺(tái)，解決抗體在液相中界面吸附困難的問(wèn)題，利用 AFM高分辨的單分子檢測(cè)手段探究抗體 IgG的結(jié)構(gòu)生物學(xué)。DNA折紙是由一條單鏈 M13mp18 viral DNA鏈為主鏈，200多條―訂書(shū)釘‖鏈分別與其配對(duì)形成的DNA納米結(jié)構(gòu)。根據(jù) DNA序列及位置，我們可以進(jìn)行納米搜索與定位，將地高辛修飾在選定訂書(shū)釘鏈的位置，通過(guò)抗原抗體特異性分子識(shí)別反應(yīng)，獲得由 DNA折紙和抗原-抗體組成的一種“超級(jí)納米結(jié)構(gòu)”。在含有

2、一定濃度的Mg2+緩沖液體系中，攜帶較多負(fù)電荷的DNA納米結(jié)構(gòu)，通過(guò)正負(fù)電荷的作用，與云母襯底表面產(chǎn)生較強(qiáng)的吸附效果。由于抗體與 DNA折紙是連接在一起的，借助 DNA折紙良好的的界面吸附能力，抗體也固定于云母表面，為獲取抗體的高分辨圖像和研究抗原-抗體分子識(shí)別提供了可能。
　　本文工作主要包含以下兩個(gè)方面：
　　1）為了研究近生理環(huán)境下抗體的精細(xì)結(jié)構(gòu)，克服了抗體構(gòu)象因界面吸附取向帶來(lái)的成像難題。利用 DNA折紙精確的納米定

3、位方法，將抗體 IgG“捆綁”在DNA折紙上：在折紙的邊緣設(shè)計(jì)位點(diǎn)并修飾多個(gè)地高辛分子，每?jī)蓚€(gè)鄰近分子為一組，讓抗體與之充分反應(yīng)。在室溫、液體環(huán)境下獲得具有典型 Y形特征的單個(gè)抗體分子的高分辨圖像，并得到抗體亞分子結(jié)構(gòu)的高度，長(zhǎng)度等信息。
　　2）為了研究抗原-抗體相互作用機(jī)理，抗體臂展與抗原排布之間的規(guī)律，在DNA折紙外緣設(shè)計(jì)位點(diǎn)修飾多個(gè)地高辛分子，相鄰兩個(gè)分子為一組，讓抗體與之充分反應(yīng)，研究抗體分子單價(jià)結(jié)合和雙價(jià)結(jié)合時(shí)的形態(tài)表