基于多聚螯合物酶催化放大效應(yīng)的電化學(xué)免疫分析方法研究.pdf

1、本論文采用EnVision試劑為基礎(chǔ)，制備信號(hào)探針，進(jìn)行信號(hào)放大。本論文主要從納米金屬標(biāo)記信號(hào)探針的制備、免疫傳感器的構(gòu)建和信號(hào)放大等方面開展了以下三個(gè)方面的研究工作：
　　1.基于 EnVision信號(hào)探針測(cè)定甲胎蛋白的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器
　　EnVision試劑(EV)是葡聚糖-酶-抗抗體復(fù)合物，含有大量的辣根過氧化物酶(HRP)和抗抗體。本文采用EV結(jié)合甲胎蛋白第二抗體作為信號(hào)探針測(cè)定甲胎蛋白。首先，在金電極表面電

2、沉積一層納米金，由于納米金優(yōu)良的特性，可以較好的保持抗體等生物分子的活性。再將硫醇化 G蛋白固定至修飾電極表面，用于定向固定甲胎蛋白抗體，通過抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)在電極界面形成夾心型免疫復(fù)合物，制備成一種靈敏的電化學(xué)免疫傳感器，并詳細(xì)的研究了該電化學(xué)免疫傳感器的性能。EV試劑的使用，使得電流響應(yīng)大大增強(qiáng)，從而提高電化學(xué)免疫傳感器的靈敏度和降低它的檢測(cè)下限。該免疫傳感器的線性范圍為5~200pg mL-1，線性相關(guān)系數(shù)為0.998，

3、檢出下限達(dá)到2 pg mL-1(信噪比為3)。將該免疫傳感器用于病人的血清樣品分析，所得結(jié)果與ELISA法相對(duì)照，兩種方法所測(cè)結(jié)果相差不大，表明研發(fā)的免疫傳感器在臨床檢測(cè)分析具有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值。
　　2.基于納米金標(biāo)記 EnVision信號(hào)探針檢測(cè)牛奶中己烯雌酚的免溫育電化學(xué)免疫傳感器信號(hào)放大研究
　　本文研究了一種富酶型檢測(cè)己烯雌酚(DES)的電化學(xué)免疫傳感器。首先，在電極表面修飾一層聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)

4、，PDDA帶正電，能夠很好的與電沉積至電極表面帶負(fù)電的納米金通過靜電結(jié)合，由此構(gòu)建免疫傳感器界面。其次，信號(hào)探針制備時(shí)使用伴刀豆球蛋白A(Con A)，可以在納米金上定向固定 EV，增加信號(hào)探針酶的密度，從而進(jìn)一步放大信號(hào)。由于己烯雌酚的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，采用夾心免疫反應(yīng)模式，將納米金標(biāo)記 EV固定至修飾電極表面，形成夾心免疫復(fù)合物，測(cè)定夾心免疫復(fù)合物中 HRP催化過氧化氫(H2O2)對(duì)氯化血紅素的氧化還原反應(yīng)所產(chǎn)生的電流。通過電流的變化量來定

5、量己烯雌酚。由于納米金標(biāo)記 EV的信號(hào)探針上負(fù)載有大量的HRP和抗體，大大增強(qiáng)了免疫傳感器的響應(yīng)信號(hào)。該免疫傳感器實(shí)現(xiàn)了濃度在5~500 pg mL-1范圍內(nèi)的高靈敏檢測(cè)，分別在低濃度和高濃度呈線性增長(zhǎng)，線性相關(guān)系數(shù)為0.999，檢測(cè)下限達(dá)2 pg mL-1(信噪比為3)。該免疫感器用于牛奶樣品分析，檢測(cè)結(jié)果與ELISA方法相比，具有有很好的相關(guān)性，有望應(yīng)用于牛奶中其它有機(jī)污染殘留物的檢測(cè)分析。
　　3.基于β-環(huán)糊精修飾電極和納

6、米鉑標(biāo)記 EnVision信號(hào)探針的三重信號(hào)放大電化學(xué)免疫分析方法研究
　　本文研究了基于β-環(huán)糊精修飾電極的超靈敏電化學(xué)免疫傳感器。將納米鉑(PtNPs)和己烯雌酚抗體(DES Ab)共同固定在EV上，制得EV/PtNPs-DES Ab信號(hào)探針。β-環(huán)糊精修飾電極用于捕獲 DES，通過夾心免疫反應(yīng)，將信號(hào)探針固定至電極表面。免疫復(fù)合物中 PtNPs和 HRP共同催化 H2O2產(chǎn)生氧化還原電流，通過電流變化值來定量 DES。因此，

7、在前一部分實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步構(gòu)建了一種基于 PtNPs標(biāo)記 EV信號(hào)探針的三重信號(hào)放大的電化學(xué)免疫傳感器。同樣采用Con A定向固定EV。與前一部分不同的是，PtNPs也具有催化分解H2O2的作用。隨著DES的濃度增加，峰電流增加，線性范圍為1~100pg mL-1，檢出限低至0.3pg mL-1(信噪比為3)。由于PtNPs標(biāo)記EV信號(hào)探針具有信號(hào)放大作用，因此，有效提高了免疫傳感器的靈敏度。并且，該免疫傳感器無需溫育，大大縮短了免