簡介：目錄一、摘要中文摘要胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義及分子調(diào)控機(jī)制（1）英文摘要BIOLOGICALSIGNIFICANCEMOLECULARREGULATYMECHANISMOFFILAGGRINGENEMUTATIONINGASTRICCANCERCELLLINES（3）二、論文胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義及分子調(diào)控機(jī)制前言（5）第一部分胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的生物學(xué)意義材料和方法（7）結(jié)果（13）討論（20）結(jié)論（23）第二部分胃癌細(xì)胞系中FILAGGRIN基因突變的分子調(diào)控機(jī)制材料和方法（25）結(jié)果（26）討論（28）結(jié)論（28）本研究的創(chuàng)新性與自我評價(jià)（29）三、參考文獻(xiàn)（30）四、附錄附錄英文縮略詞表（36）五、綜述FILAGGRIN基因及聚角蛋白微絲蛋白的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展（37）六、攻讀碩士期間發(fā)表文章情況（47）七、個(gè)人簡歷（49）八、致謝（50）基金資助內(nèi)蒙古自治區(qū)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目資助KJT2013北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院腫瘤防治研究所分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室

簡介：天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)用組織芯片技術(shù)研究肺癌中ETS1MRNA表達(dá)的生物學(xué)意義和相關(guān)分子機(jī)制姓名孫翠云申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師王新允20060518

簡介：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文梅毒的快速診斷、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)的研究姓名王林娜申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床皮膚性病學(xué)指導(dǎo)教師鄭和義20070501LR日協(xié)和‘T土季博士唧竟T論文EDTASDSTRIS乙二胺四乙酸SODIUMDODECYLSULF砒C十二烷基磺酸鈉三羥甲基氨基甲烷

簡介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ARF缺失與腫瘤細(xì)胞MDMX異常調(diào)控的分子生物學(xué)機(jī)制姓名李小龍申請學(xué)位級別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)；腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師郝希山201205天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ABSTRACTMDMXISAHETERODIMERICPARTNEROFMDM2ANDACRITICALREGULATOROFP53THEMDMXLEVELISGENERALLYELEVATEDINTUMORSWITHWILDTYPEP53ANDCONTRIBUTESTOP53INACTIVATIONMDMDDEGRADATIONISCONTROLLEDINPARTBVMDM2MEDIATEDUBIQUITINATIONHEREWESHOWTHATⅣIDⅣⅨTURNOVERISHIGHLYRESPONSIVETOCHANGESINMDM2LEVELINNONTRANSFORMEDCELLSBUTNOTINTMNORCELLSWEFOUNDTHAT10SSOFALTEMATEREADINGFRAMEARFEXPRESSION，WHICHOCCURSINMOSTTUMORS謝THWILDTYPEP53SIGNIFICANTLYREDUCESMDMXSENSITIVITYTOMDM2RESTORATIONOFAI江EXPRESSIONINTUMORCELLSENABLESMDM2TODEGRADEMDMXINADOSEDEPENDENTMANNERARFBINDSTOMDⅣ【2ANDSTIMULATESASECONDSITEINTERACTIONBETWEENTHECENTRALREGIONOFMDM2ANDMDMXANDTHUSINCREASESMDMX_】ⅥDM2BINDINGANDMDMXUBIQUITINATIONTHESERESULTSREVEALANIMPORTANTABNORMALITYINTHEP53REGULATORYPATHWAYASACONSEQUENCEOFAI邛DEFICIENCYLOSSOFARFDURINGTUMORDEVELOPMENTNOTONLYPREVENTSP53STABILIZATIONBYPROLIFERATIVESTRESSBUTALSOCAUSESACCUMULATIONOFMDⅣTHATCOMPROMISESP53ACTIVITYTHISPHENOMENONMAYREDUCETHECLINICALEFFICACYOFMDM2一SPECIFICINHIBITORSBYPREVENTINGMDMXDOWNREGULATIONKEYWORDSMDM2MDMXARFP53UBIQUITINATIONNUTLINII

簡介：目的脊柱黃韌帶骨化OSSIFICATIONOFLIGAMENTUMFLAVUM，0LF本質(zhì)屬于軟骨內(nèi)成骨，但是，關(guān)于其病因和發(fā)病機(jī)制的分歧較多，目前尚無有效的藥物防治方法，手術(shù)是唯一治療手段，但手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)大且遠(yuǎn)期效果不確切。如何預(yù)測骨化是否進(jìn)展，如何防止骨化的繼續(xù)發(fā)展和術(shù)后復(fù)發(fā)，是臨床上亟待解決的問題，這些問題的解決都必須建立在對發(fā)病機(jī)制清晰了解的基礎(chǔ)上。因此，從多角度對其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究是非常必要的。已知局部解剖力學(xué)和生長因子BMPS、TGFΒ是黃韌帶骨化的可能因素，黃韌帶骨化初期有豐富的血管增生，血管生成是骨化的必備條件。調(diào)節(jié)血管生成的細(xì)胞因子眾多，主要有血管內(nèi)皮生長因子VEGF、成纖維細(xì)胞生長因子FGF、骨形成蛋白BMPS、轉(zhuǎn)化生長因子ΒTGFΒ、胰島素樣生長因子IGF、血小板源性生長因子PDGF和環(huán)氧化酶2COX2等，推測BMPS和TGFΒ可能是通過促進(jìn)局部血管生成而發(fā)揮促韌帶骨化的作用。VEGF是迄今為止已知的最強(qiáng)的促血管生成因子，COX2是炎癥因子PGE2介導(dǎo)的血管生成的關(guān)鍵酶?；谝陨涎芯砍晒瑢?shí)驗(yàn)從血管生成和黃韌帶局部解剖學(xué)角度，研究血管生成和胸椎椎板傾斜角在黃韌帶骨化中的作用和臨床意義，從宏觀生物力學(xué)到微觀分子生物學(xué)研究脊柱黃韌帶骨化發(fā)病的可能中心環(huán)節(jié)，提出藥物預(yù)防和控制的可能性，以期更好地指導(dǎo)臨床，為黃韌帶骨化的綜合施治尋找可能的途徑。方法脊柱后路手術(shù)切取的正常NL，5例、退變DL，9例和骨化OL，L8例的黃韌帶標(biāo)本，作HE染色，地衣紅染色，SP法作VEGF、COX2、ON、CD34免疫組化染色，觀察比較各組纖維組成、血管生成和各因子的表達(dá)分析OL組CD34表達(dá)與CT、MRI影像學(xué)表現(xiàn)的關(guān)系。組織塊結(jié)合酶消化法體外培養(yǎng)骨化13例和正常5例黃韌帶細(xì)胞LFCS，觀察其生物學(xué)特性，作ALP染色和透射電鏡觀察，在常規(guī)、低氧和不同濃度塞來昔布藥物作用下，采用SP法作VEGF、COX2免疫細(xì)胞化學(xué)染色和ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液VEGF濃度，RTPCR法測定骨化6例和正常3例LFCS的VEGF、COX2和BMP2MRNA表達(dá)，分析各因子對骨化的作用及其相互關(guān)系。以直立狀態(tài)下脊柱矢狀面重力線為參照，分析不同節(jié)段黃韌帶所受力矩大小，測量干燥胸椎標(biāo)本20具共233個(gè)椎骨椎板傾斜角LSA，并分析其角度分布與TOLF患者22例共90個(gè)骨化灶黃韌帶骨化好發(fā)部位之間的關(guān)系。將黃韌帶與其相鄰上下椎板視為“椎板黃韌帶椎板復(fù)合體”，從理論上分析黃韌帶在不同LSA時(shí)受力情況。結(jié)果DL和OL組彈力纖維含量明顯低于NL組QND468，QNO670，OL組在韌帶與骨化的交界處可見豐富血管增生，OL組VEGF和COX2表達(dá)IOD值高于DL組TVEGF219，TCOX2247，DL和OL組ON表達(dá)差異無顯著性T0N036，DL和OL組MVD高于NL組QND379，QNO610，DL和OL組差異無顯著性QDO237，MVD在CT和MRI的兩種不同分型中差異有顯著性TCT424，TMRI462。共體外培養(yǎng)黃韌帶細(xì)胞17株，正常LFCS5株，骨化LFCSL2株。細(xì)胞從貼附于培養(yǎng)瓶內(nèi)的韌帶組織小塊萌出緩慢，約需610D可見有細(xì)胞從組織小塊邊緣萌出，呈典型成纖維細(xì)胞形態(tài)。OL組常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞可形成不透亮鈣化結(jié)節(jié)，ALP染色陽性，免疫細(xì)胞化學(xué)染色COX2陽性，VEGF弱陽性，NL組表達(dá)均陰性。OL組LFCS低氧培養(yǎng)24H后COX2和VEGF均強(qiáng)陽性表達(dá)，塞來昔布10ΜMOLL組培養(yǎng)72H后，COX2和VEGF表達(dá)弱陽性，20100ΜMOLL組表達(dá)均陰性。常規(guī)培養(yǎng)組在細(xì)胞80％匯合時(shí)上清液VEGF濃度顯著高于鈣化結(jié)節(jié)形成時(shí)測定值T260，低于低氧培養(yǎng)組T543，塞來昔布組隨藥物濃度增加，上清液VEGF濃度整體呈下降趨勢，塞來昔布抑制細(xì)胞生成VEGF，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系。細(xì)胞存活率在藥物濃度20ΜMOLL組顯著低于對照組P118，Q294，Q176，P值均大于005，即三者之間相對表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，NL組LFCS三者表達(dá)陰性。胸椎LSA與相應(yīng)椎體水平面成鈍角，分布以T7T10為波谷段，TOLF分布以T8T10為波峰段，兩者分布具有相關(guān)性，LSA最小的下胸段與TOLF好發(fā)部位大體一致。黃韌帶受軸向牽拉力為FSINΑ，在椎板垂直的理想狀態(tài)下黃韌帶受力為F，角Α越大，黃韌帶受到的張力越小，反之亦然。結(jié)論1反復(fù)微小創(chuàng)傷→韌帶修復(fù)增生→局部肥厚低氧→VEGF、COX2異常分泌→血管生成→韌帶纖維化、骨化。黃韌帶骨化是一個(gè)連續(xù)性發(fā)展的病理過程，血管生成可能是啟動骨化過程的最終步驟，有重要的臨床影像學(xué)和治療學(xué)意義。2體外培養(yǎng)黃韌帶骨化患者的非骨化部位的黃韌帶細(xì)胞可表達(dá)成骨細(xì)胞表型，低氧能刺激黃韌帶細(xì)胞異常分泌COX2和VEGF，選擇性COX2抑制劑塞來昔布能抑制黃韌帶細(xì)胞的分裂增殖和COX2和VEGF的產(chǎn)生，提示血管生成抑制劑可能有預(yù)防術(shù)后骨化復(fù)發(fā)和控制骨化進(jìn)展的作用，為臨床綜合施治提供可能的途徑。3VEGF、COX2和BMP2三者關(guān)系密切，互相作用，共同促使黃韌帶內(nèi)血管生成和骨化發(fā)生。4脊柱生理曲度是0LF多發(fā)于胸椎和HLF多發(fā)于頸、腰椎的解剖學(xué)基礎(chǔ)，胸椎黃韌帶所受的張應(yīng)力是牽拉性骨贅形成的力學(xué)因素，胸椎LSA的不同和由此作用于LF牽拉力的不同可能是TOLF多發(fā)于下胸段的解剖學(xué)和生物力學(xué)因素之一。5反復(fù)機(jī)械應(yīng)力引起脊柱黃韌帶細(xì)胞分子生物學(xué)改變，宏觀力學(xué)機(jī)制通過微觀分子生物學(xué)機(jī)制來發(fā)揮作用，兩者是統(tǒng)一體，不應(yīng)割裂開來研究黃韌帶骨化的機(jī)制。

簡介：隨著人們對藥用植物內(nèi)生菌根真菌研究的深入，越來越多的藥用植物內(nèi)生菌根真菌的次生代謝產(chǎn)物被分離鑒定，并被證明其中含有與宿主植物相同或相似的有效成分。研究藥用植物內(nèi)生菌根真菌的活性成分、為藥用植物資源尋找合理的替代品已成為當(dāng)今藥用植物研究的熱點(diǎn)問題之一。本實(shí)驗(yàn)通過對藥用植物內(nèi)生菌根真菌的研究，為其成為藥用植物合理的替代品提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。本實(shí)驗(yàn)利用組織分離的方法，從常見的16種藥用植物的根部分離得到了11株內(nèi)生菌根真菌。并對其中的5個(gè)菌株進(jìn)行了生物學(xué)特陛、抑菌活性、有效化學(xué)成份及分子生物學(xué)等方面了研究。供試的5個(gè)菌株分別為分離自桔梗中的內(nèi)生菌根真菌JG1102，分離自防風(fēng)中的內(nèi)生菌根真菌FF0121，分離自苦參中的內(nèi)生菌根真菌KS1220，分離自玉竹中的內(nèi)生菌根真菌YZ1104，分離自黃芩的內(nèi)生菌根真菌NQIN0116。其中，可以通過形態(tài)學(xué)，即分生孢子的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定的有4株。即桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102初步鑒定為桔梗鏈格孢ALTERNARIAPLATYCODONIS，防風(fēng)內(nèi)生菌根真菌FF0121根鏈格孢ALTERNARIARADICINA，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220豆鏈格孢ALTERNARIAAZUKIEA，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104初步鑒定為燕麥鐮孢菌FUSARIUMAVENACEUM本實(shí)驗(yàn)分別從5種不同的碳源和氮源中，篩選出適宜菌株JG1102、FF0121、KSL220、YZ1104和LHQIN0116生長的碳源和氮源。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并本著節(jié)約成本的原則，我們分別選擇了葡萄糖和馬鈴薯作為內(nèi)生菌根真菌培養(yǎng)中的最佳碳源和氮源，即在供試的內(nèi)生菌根真菌的培養(yǎng)中，利用馬鈴薯葡萄糖PDA培養(yǎng)基就可以達(dá)到最佳的效果。在最適生長溫度的研究中，本實(shí)驗(yàn)確定了20～25℃為內(nèi)生菌根真菌的最適溫度。從供試的5個(gè)菌株中篩選出了3株具有抑制細(xì)菌活性的菌株，分別為JG1102、YZ1104和HQIN0116。抑菌結(jié)果表明，此3個(gè)菌株的發(fā)酵產(chǎn)物、甲醇提取液、乙醇提取液對細(xì)菌均有一定的抑菌活性，并且甲醇提取液的抑菌率較乙醇提取液的抑菌率略高。但這3個(gè)菌株的水提液對測試細(xì)菌則都沒有抑菌活性。通過薄層層析色譜的分析，分別用黃酮展開劑CHCLMEOH8515和生物堿展開劑CHCLMEOH71加少量氨水和二乙胺薄層展開后，10％的濃硫酸顯色，觀察熒光和顯色斑點(diǎn)。結(jié)果表明菌株JG1102、YZ1104和HQIN0116與其宿主原植物含有相同或相似生物堿和黃酮類的有效成分。以ITS1和ITS4為引物，對KS1220的RDNA進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了測序，結(jié)果表明這種內(nèi)生菌根真菌與已有的土壤真菌的同源相似性較高。本文的創(chuàng)新點(diǎn)本實(shí)驗(yàn)首次采用組織分離和形態(tài)學(xué)鑒定的方法，確定了桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102為桔梗鏈格孢，防風(fēng)內(nèi)生菌根真菌FF0121為根鏈格孢，苦參內(nèi)生菌根真菌KS1220位為鏈格孢，玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104為燕麥鐮孢菌。本實(shí)驗(yàn)首次篩選出了3株具有抑制細(xì)菌活性的內(nèi)生菌根菌株，分別為桔梗內(nèi)生菌根真菌JG1102桔梗鏈格孢、玉竹內(nèi)生菌根真菌YZ1104燕麥鐮孢菌和黃芩內(nèi)生菌根真菌HQIN0116。并通過化學(xué)成分的初步檢驗(yàn)，證明了這3個(gè)菌株與其宿主原植物含有相同或相似的生物堿和黃酮類有效成分。

簡介：NO20032323河暗蓮科六蠆碩士研究生畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn)動物皮膚病原真菌分子生物學(xué)檢測方法的建立及應(yīng)用研究生導(dǎo)師專業(yè)二級學(xué)院研究起止日期提交同期龔巧玲劉福英教授劉軍須副教授生物化學(xué)與分子生物學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2004年9月一2006年3月2006年3月中文摘要養(yǎng)物，接種于沙氏液體培養(yǎng)基，置27℃恒溫?fù)u床80轉(zhuǎn)／分振蕩培養(yǎng)10天。將培養(yǎng)液倒入100ML離心管內(nèi)離心，沉淀裝入15MLEP管中，70℃或液氮保存。取以上冷凍保存的三種菌沉淀物少量各約1OMG用破壁酶破壁，使用酚氯仿抽提法抽提DNA；然后用皮膚病原真菌通用引物CHS11S，CHS11R和隨機(jī)引物FML進(jìn)行PCR擴(kuò)增，鑒別三種皮膚真菌標(biāo)準(zhǔn)菌株。2通用引物PCR特異性及敏感性測定特異性測定用皮膚病原真菌通用引物進(jìn)行PCR，擴(kuò)增大腸桿菌DNA化學(xué)裂解法提取、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22細(xì)胞DNA由本室提供。敏感性測定DNA提取方法同上，以紫外分光光度法測定DNA質(zhì)量濃度，根據(jù)測定值將DNA進(jìn)行1O倍系列質(zhì)量濃度稀釋，得到100NG一10龜?shù)?個(gè)質(zhì)量濃度，然后對其進(jìn)行PCR擴(kuò)增。3皮膚病原真菌動物模型的建立取三種標(biāo)準(zhǔn)菌株傳種到沙氏斜面固體培養(yǎng)基，27℃培養(yǎng)1O天。取下菌落加適量滅菌生理鹽水制成菌懸液，用劃痕法建立實(shí)驗(yàn)動物皮膚病原真菌動物模型。4使用分子生物學(xué)方法及傳統(tǒng)方法檢測皮膚病原真菌用接種鏟從建立的動物模型身上刮取毛發(fā)及鱗屑于沙氏斜面固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，2～3天后菌落長出，從培養(yǎng)基上刮取菌落提取DNA及用通用引物PCR擴(kuò)增鑒別，同時(shí)將可疑菌落分離純化，6～7天后用隨機(jī)引物FML進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒別，12～14天后根據(jù)鏡檢及菌落形態(tài)鑒別皮膚病原真菌。5河北省各地實(shí)驗(yàn)動物的皮膚病原真菌檢測從實(shí)驗(yàn)動

簡介：第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文人源性抗角蛋白單鏈抗體的構(gòu)建、表達(dá)和FAB片段生物學(xué)作用及其分子機(jī)理的研究姓名李承新申請學(xué)位級別博士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師劉玉峰200161第四軍醫(yī)大掌博士掌位論文諸多限制，而且，由于角蛋白是分子量在48～68KD之間的一組分子，我們自正常人血清中所提取純化的AKAUTOAB也是針對這一組分子量不同的角蛋白的多克隆抗體，這就使研究中的AKAUTOAB作用特異性較差，無法明確AKAUTOAB的作用究竟是源于針對某一特定角蛋白抗體的單獨(dú)作用，還是多種抗角蛋白抗體的綜合作用。因此，既往所觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果至少應(yīng)該是針對多種分子量角蛋白的綜合作用，尚無法反映針對不同分子量角蛋白的單克隆AKAUTOAB的作用。目前AKAUTOAB的研究正面臨兩大問題①臨床應(yīng)用研制具有良好療效、能批量生產(chǎn)且無毒副作用的產(chǎn)品，因此研發(fā)有效的抗角蛋白的基因工程抗體已是勢在必行；②作用機(jī)理在分子水平上闡明AKAUTOAB生物學(xué)作用的細(xì)胞與分子機(jī)理，特別是AKAUTOAB發(fā)揮作用的信號傳導(dǎo)機(jī)制，后者是全面闡明AKAUTOAB生物學(xué)作用的基礎(chǔ)。分子機(jī)理的研究是臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)，而臨床應(yīng)用又是闡明機(jī)理的目的。尋找更為有效和準(zhǔn)確的研究方法及手段來盡快解決這些問題已迫在眉睫。我們進(jìn)行取研究的目的就在于觀察抗角蛋白基因工程抗體FAB片段的生物學(xué)效應(yīng)、制備抗角蛋白基因工程單鏈抗體及探討抗不同分子量角蛋白的抗體生物學(xué)作用的、可能的信號傳導(dǎo)機(jī)制，為今后的深入研究奠定基礎(chǔ)。主碉實(shí)驗(yàn)內(nèi)容吸結(jié)果＼／＼／第一部分人源性抗角蛋白單鏈抗體的克隆、表達(dá)及活性測定1利用基因重組技術(shù)對從半合成噬菌體抗體庫中克隆的人源性抗角蛋白抗體FAB片段進(jìn)行了改造，獲得了人源性抗角蛋白SEFV片段。FDNA序列分析結(jié)果表明，PSCFV的VK和VH基因序列同RRKZ的VK和VN基因序列完全相同，表明在FAB片段改建成SCFV過程中未發(fā)生基因突變。用ELISA的方法測定可溶性表達(dá)的SCFV抗體與角蛋白以及鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAG等無關(guān)抗原的結(jié)合反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)SCFV能特異性地與角蛋白結(jié)合而與其它抗原不結(jié)合，說明人源性抗角蛋白FAB抗體改建為SCFV后具有較好的特異性和親和力，但可溶性表達(dá)的SCFV的親和力低于可溶性FAB片段；0、2將利用噬菌體抗體庫技術(shù)從半合成噬菌體抗體庫中克隆到的人源性抗角蛋白抗體FAB片段成功地進(jìn)行了可溶性表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)金屬鏊合層析純化后，并采用ELISA和WESTERNBLOT等方法進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，可溶性表達(dá)的FAB片段不僅具有良好的抗原結(jié)合活性，而且，具有相當(dāng)高的特異性，僅識別48KD的角蛋白，與其它分子量的角蛋白或鐵蛋白、胃蛋白酶、HBSAG等無關(guān)抗原無交叉反應(yīng)；＼J

簡介：復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞表面分子特異性結(jié)合肽的篩選及其生物學(xué)功能姓名莢衛(wèi)東申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)指導(dǎo)教師湯釗猷20060401博士論文中文摘要能肝癌細(xì)胞表面特異性結(jié)合肽。為使篩選到的特異性結(jié)合肽具有代表性，我們采取差減篩選策略，先將噬菌體肽庫與MHCC97L共育，這樣得到的新噬菌體肽庫就消除了與MHCC97L細(xì)胞表面結(jié)合的非特異性噬菌體，然后再篩選與HCCLM3細(xì)胞表面結(jié)合的噬菌體。由于MHCC97L和HCCLM3具有相似的遺傳背景，從而消除了不同樣本由于遺傳背景不同而固有的性狀差異，將混雜因素減少到最低。研究顯示經(jīng)過3輪連續(xù)差減篩選，回收率從39010弓增加到11510～，陽性噬菌體克隆得到有效的富集；隨機(jī)挑選48個(gè)噬菌體克隆進(jìn)行DNA序列分析，獲得11種肽序列，其中展示ALATRPTYRPROLEUPROPROAWYPLPP肽的噬菌體被高度富集，占第3輪噬菌體克隆的77％37／48。噬菌體體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示所獲得的11種噬菌體克隆與HCCLM3細(xì)胞表面的結(jié)合效率明顯高于對照空白噬菌體33～278倍；平均為47倍，其中AWYPLPP噬菌體與HCCLM3的結(jié)合效率是對照空白噬菌體的278倍。將AWYPLPP序列與蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫BLAST進(jìn)行同源序列搜索，結(jié)果顯示所得到的蛋白質(zhì)主要為細(xì)胞外或細(xì)胞表面蛋白、腫瘤特異性抗原及前體、底物蛋白等，如可能與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管生成相關(guān)的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白一1ECML，同源性為71％。上述結(jié)果表明，采用BRASL噬菌體隨機(jī)肽庫技術(shù)和差減篩選策略，獲得了11種與高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞表面分子的結(jié)合肽，其中為首的結(jié)合肽為AWYPIPP。2高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞表面分子特異性結(jié)合肷的鑒定本部分的研究目的采用噬菌體體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀、抗噬菌體免疫細(xì)胞化學(xué)染色、免疫熒光染色和激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)以及噬菌體結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)，利用具有不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細(xì)胞株，對高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞表面結(jié)合肽AWYPLPP肽的特異性進(jìn)行鑒定。本課題的初衷是篩選高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞特異性結(jié)合肽，盡管AWYPLPP噬菌體對高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株HCCLM3展示了良好的選擇性，但不能確保AWYPLPP噬菌體可以與高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞結(jié)合。我們選擇了7種不同轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細(xì)胞株，包括高轉(zhuǎn)移潛能的人肝癌細(xì)胞株MHCC97、MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6，低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株MHCC97L、PLC／PRE／5和無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株HEP3B，正常人肝細(xì)胞株CCLL3即CHANG1IVET，對AWYPLPP肽的特異性進(jìn)行鑒定。噬菌體體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀研究顯示，與低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株MHCC97L、PLC／PRE／5和無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株HEP3B以及正常人肝細(xì)胞

簡介：以骨組織衰老為特征的一系列代謝性骨病正成為威脅中老年人健康生活的重要因素破骨細(xì)胞骨吸收功能和成骨細(xì)胞骨形成功能失衡是其發(fā)生的主要機(jī)制研究和闡明破骨細(xì)胞的增齡改變規(guī)律和衰老特點(diǎn)有利于對其病理機(jī)制的認(rèn)識、防治方案的制定該文以不同月齡大鼠為研究對象分別以股骨和腰椎為皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨代表采用TRAP染色技術(shù)、吸收陷窩定量分析技術(shù)和RTPCR等手段觀察比較大鼠幼年、青年、中年和老年等不同生理階段破骨細(xì)胞的數(shù)量、骨吸收功能變化和破骨細(xì)胞功能酶表達(dá)等狀態(tài)并從破骨細(xì)胞發(fā)生的血源前體干細(xì)胞和微環(huán)境骨髓細(xì)胞的增齡變化等不同角度探索其形成的可能機(jī)制

簡介：點(diǎn)擊查看更多外周原始神經(jīng)外胚葉瘤臨床病理學(xué)和分子生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的本研究的主要目的是對2003年濟(jì)南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)開展全面的調(diào)查，從現(xiàn)場流行病學(xué)的角度出發(fā)，初步描述所有病例的“三間”分布等基本情況，探討其流行因素；同時(shí)，結(jié)合血清流行病學(xué)、病毒學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，運(yùn)用已經(jīng)建立的血清中和抗體檢測、腸道病毒分離鑒定和RTPCR快速診斷等方法，從病原學(xué)上明確病因，并對分離到ECHO30的VP1段進(jìn)行基因序列的測定和分析，確定ECHO30山東分離株的基因型及其變異程度。材料與方法所有病例信息來源于2003年章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)調(diào)查的資料，包括發(fā)病情況調(diào)查和個(gè)案調(diào)查。病原學(xué)標(biāo)本來源于爆發(fā)期內(nèi)采集的43份糞便標(biāo)本和24份急性期、14份恢復(fù)期血清標(biāo)本。病毒的分離、型別鑒定以及血清中和抗體試驗(yàn)按照WHO脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室手冊規(guī)定的方法進(jìn)行；19株陽性分離株，經(jīng)TRIZOL試劑提取總RNA，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)RTPCR合成互補(bǔ)脫氧核糖核酸CDNA，PCR產(chǎn)物純化后測定VP1基因的全長。借助SEQUENCHER，BIOEDIT，MEGA21等軟件進(jìn)行結(jié)果分析。血清流行病學(xué)標(biāo)本采用按比例多級抽樣方法，NTS2Δ38，設(shè)置7個(gè)年齡組，發(fā)病地區(qū)病例組和未發(fā)病地區(qū)對照組各取2各鄉(xiāng)鎮(zhèn)，以每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)每個(gè)年齡組20人為標(biāo)準(zhǔn)，每人采集靜脈血3ML。得到血清標(biāo)本病例組397份，對照組248份，運(yùn)用中和抗體試驗(yàn)技術(shù)，測定血清中和抗體的滴度。以上所得結(jié)果用SPSS120進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。結(jié)果2003年6～9月，濟(jì)南章丘市發(fā)生了無菌性腦膜炎的爆發(fā)，發(fā)病高峰集中在7～8月，發(fā)病1743例，發(fā)病年齡集中在15歲以下，本次爆發(fā)的罹患率181‰，5～9歲年齡組高發(fā)，占全部病例數(shù)的55％，男女性別比157∶1，按照罹患率大小的空間分布，本次爆發(fā)以明水鎮(zhèn)為中心，向東呈扇形分布，臨床表現(xiàn)以發(fā)熱9456％、頭痛9596％、嘔吐8287％為主，預(yù)后良好，無致死病例出現(xiàn)。病原學(xué)結(jié)果提示引起爆發(fā)的病原體為單一的人類腸道病毒ECHO30；理化特性顯示，該分離株為具有“D”特征的強(qiáng)毒株，致病力強(qiáng)。分離株基因序列測定的結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)病原體為ECHO30，但相較于BASTIANNI標(biāo)準(zhǔn)株，已經(jīng)出現(xiàn)了核苷酸序列的變異，進(jìn)化樹顯示ECHO30山東章丘株已經(jīng)與2003年山東泰安株、浙江株共同形成了新的基因組；同時(shí)認(rèn)為，分子生物學(xué)診斷方法的確立和運(yùn)用，將加速病原學(xué)診斷的過程，降低對病患的傷害，提高經(jīng)濟(jì)和社會效益。血清流行病學(xué)結(jié)果證實(shí)，章丘地區(qū)確實(shí)存在ECHO30爆發(fā)和流行，15歲以下健康兒童的中和抗體GMT達(dá)到了1∶5308，高于對照地區(qū)的GMT1∶3245，中和抗體滴度分布集中在1∶64～1∶256之間，抗體陽性率達(dá)到9093％，提示疾病流行過后，人群具有一定的免疫力。流行因素分析認(rèn)為，此次爆發(fā)應(yīng)歸結(jié)為以下幾個(gè)因素共同的作用，該地區(qū)多年未曾有過ECHO30所致疾病的流行，易感人群累積較多；病原體ECHO30亞型發(fā)生了核苷酸的變異，形成了新的基因組，并且毒力較以往的流行株有所提升，具有了強(qiáng)毒株的“D”特征；當(dāng)?shù)氐淖匀坏乩項(xiàng)l件和飲食習(xí)慣，成為此次爆發(fā)的有利客觀條件。結(jié)論2003年濟(jì)南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)是由當(dāng)?shù)囟嗄晡丛l(fā)現(xiàn)循環(huán)的非脊灰腸道病毒ECHO30新基因組廣泛感染所致。今后，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)非脊灰腸道病毒所致疾病的監(jiān)測和控制工作。

簡介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文低分子肝素及肝素結(jié)合型表皮生長因子對人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響姓名吳曉霞申請學(xué)位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師張建平20070520◇之童碩士論文中文摘要2、探討LMWH是否可以對體外培養(yǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生作用，影響其增殖、侵襲及分化能力。3、LML|『H、HBEGF單獨(dú)或共同作用于滋養(yǎng)細(xì)胞，觀察Ⅲ州和HBFM；F是否存在對滋養(yǎng)細(xì)胞影響的相互作用。研究方法1滋養(yǎng)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定人早孕期絨毛組織取自復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院5～10孕周行人工流產(chǎn)的正常妊娠婦女。按照胰蛋白酶／DNA酶I消化和密度梯度離心兩步法分離滋養(yǎng)細(xì)胞。分離后的細(xì)胞用免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定細(xì)胞及其純度。20％胎牛血清的叫跚高糖培養(yǎng)液體外培養(yǎng)。2姍H對人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞生物學(xué)功能的影響21實(shí)驗(yàn)分組LMWH組成分為ENOXAPARIN，藥物終濃度為0025IU／M1、025IU／M1、25IU／ML、25IU／M1、250IU／M1，對照組即蹦蹦培養(yǎng)液組。22枷嚇增殖試驗(yàn)研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細(xì)胞增殖能力的影響作用。將人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞加入預(yù)先包被MATRIGEL的96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。行W丌比色試驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖情況。23TRANSWELL侵襲試驗(yàn)研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響作用。預(yù)先將TRANSWELL板包被MATRIGEL備用。往上室加入滋養(yǎng)細(xì)胞懸液，并分別加入各種處理因素；下室加入叫聊高糖培養(yǎng)液，37℃，5％C0培養(yǎng)箱中孵育48H。棉簽輕輕拭去上室濾膜內(nèi)面的細(xì)胞，保留定向遷移至濾膜下表面的細(xì)胞，多聚甲醛固定，蘇木素染色，中性樹膠封片，高倍顯微鏡200倍下每孔隨機(jī)選擇5個(gè)視野計(jì)數(shù)細(xì)胞。24HCG分泌試驗(yàn)研究不同濃度LMWH對滋養(yǎng)細(xì)胞分化能力的影響作用。將滋養(yǎng)細(xì)胞加入24孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)過夜。在培養(yǎng)液中添加各種處理因素，繼續(xù)培養(yǎng)48H。收集各孔的培養(yǎng)上清液，儲存于一20℃?zhèn)溆?，采用化學(xué)發(fā)光法測定BHOG濃度。

簡介：華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文LRIG2對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL15生物學(xué)特性的影響及其分子生物學(xué)機(jī)制研究姓名王寶峰申請學(xué)位級別博士專業(yè)外科學(xué)（神經(jīng)外科）指導(dǎo)教師雷霆20090501華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文3第二部分第二部分LRIG2基因短發(fā)夾基因短發(fā)夾RNA表達(dá)穩(wěn)定株的建立及下調(diào)表達(dá)穩(wěn)定株的建立及下調(diào)LRIG2對EGFR信號通路的影響信號通路的影響目的目的構(gòu)建針對LRIG2基因的短發(fā)夾RNASHRNA的表達(dá)載體，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株觀察目的基因表達(dá)的變化及其對EGFR信號通路的影響。方法方法根據(jù)GENBANK中LRIG2基因序列設(shè)計(jì)2條RNA干擾序列，命名LRIG2SHRNA1、LRIG2SHRNA2，同時(shí)設(shè)計(jì)1條非特異性序列作為陰性對照。據(jù)此設(shè)計(jì)合成各自的寡核苷酸鏈，退火后連接入PGENESIL2載體，轉(zhuǎn)化擴(kuò)增后進(jìn)行序列測定。用不同濃度的G418作用于GL15細(xì)胞，得到G418對于GL15細(xì)胞的篩選濃度。3種重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系GL15細(xì)胞，用G418篩選后挑單克隆后擴(kuò)增獲得穩(wěn)定株。逆轉(zhuǎn)錄RTPCR和WESTERN印跡法分別在MRNA和蛋白水平上檢測LRIG2的表達(dá)。用表皮生長因子EGF100NGML體外干預(yù)得到的穩(wěn)定細(xì)胞株，WESTERNBLOT測定EGFR和磷酸化EGFR水平的變化。結(jié)果結(jié)果3種重組表達(dá)載體PGENESIL2LRIG2SHRNA1、PGENESIL2LRIG2SHRNA2和PGENESIL2NEGATIVESHRNA經(jīng)限制性酶切及DNA測序分析證明序列插入正確。G418對于GL15細(xì)胞的篩選濃度為600GML，篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染三種質(zhì)粒的GL15細(xì)胞，轉(zhuǎn)染PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細(xì)胞LRIG2MRNA和蛋白表達(dá)明顯低于轉(zhuǎn)染PGENESIL2NEGATIVESHRNA組PGENESIL2LRIG2SHRNA1組LRIG2蛋白無明顯變化。EGF刺激5分鐘和30分鐘后，PGENESIL2LRIG2SHRNA2組細(xì)胞EGFR和PEGFR蛋白水平均低于對照組。結(jié)論結(jié)論成功構(gòu)建了針對LRIG2基因的SHRNA表達(dá)載體PGENESIL2LRIG2SHRNA2，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后可抑制LRIG2基因表達(dá)，LRIG2與LRIG1作用相反，下調(diào)LRIG2可減少EGF誘導(dǎo)的EGFR磷酸化，促進(jìn)EGFR降解。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞富含亮氨酸重復(fù)序列免疫球蛋白樣蛋白2；RNA干擾；短發(fā)夾RNA；EGFR

簡介：Y1406904分類號R361密級學(xué)位類別科學(xué)學(xué)位D專業(yè)學(xué)位口◎?qū)W校代碼學(xué)號1006220033009又蚌醬科矢垮TLANJINMEDICALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATION論文題目肺癌進(jìn)展組織芯片中OPN和相關(guān)蛋白表達(dá)的生物學(xué)意義和分子機(jī)制的探討TITLERESEACHOFBIOLOGICALSIGNIFICANCEANDTHEMOLECULARMECHANISMOFOPNANDRELATIVEPROTEINEXPRESSIONINLUNGCANCERPROGRESSIONTISSUEMICROARRAY一級學(xué)科基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級學(xué)科病理學(xué)與病理生理學(xué)論文作者吳興業(yè)指導(dǎo)教師王新允教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二OO八年五月天津醫(yī)科人學(xué)碩七學(xué)位論文2．在肺原發(fā)癌中，隨著腫瘤分化程度的降低，OPN的表達(dá)逐漸升高。腫瘤的分化程度越低，其惡性度也越高，腫瘤細(xì)胞的增殖能力越強(qiáng)。III期IV期肺癌中OPN蛋白色表達(dá)明顯高于III期者，說明在肺癌的進(jìn)展過程中發(fā)揮著重要作用。因而OPN作為判斷腫瘤預(yù)后的新指標(biāo)，其表達(dá)強(qiáng)度可進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療。3．原發(fā)性肺癌中CD44V6蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān)，提示CD44V6通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和促進(jìn)腫瘤血管形成等方式參與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移，CD44V6可以作為預(yù)后估計(jì)的參考指標(biāo)。4．原發(fā)性肺癌中MMP．9蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期顯著相關(guān)，提示MMP．9通過降解ECM，調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附功能，與其他蛋白發(fā)揮協(xié)同作用，并促進(jìn)腫瘤血管形成，參與肺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，MMP．9可以作為早期診斷和預(yù)后估計(jì)的參考指標(biāo)。5．CD44V6與MMP．9的表達(dá)無相關(guān)性，提示二者通過不同的作用機(jī)制抑制細(xì)胞的凋亡和腫瘤血管的生成，從而在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起著不同的作用。6．原發(fā)性肺癌中OPN、CD44V6和MMP．9蛋白表達(dá)和臨床分期顯著正相關(guān)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)陽性率要明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，在IIIIV期肺癌中的陽性率顯著高于IIL期。這些結(jié)果提示三者均可以促進(jìn)肺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，與肺癌進(jìn)展和不良生物學(xué)行為相關(guān)，聯(lián)合檢測三者可以作為預(yù)后估計(jì)的參考指標(biāo)。7．組織芯片技術(shù)作為一項(xiàng)高新技術(shù)，完全適用于科研工作，該研究進(jìn)一步證實(shí)其可行性，使用此項(xiàng)技術(shù)既節(jié)省了時(shí)間和試劑，又提高了效率，減少誤差，組織芯片有望成為未來病理學(xué)工作者們進(jìn)行科學(xué)研究的有力武器。關(guān)鍵詞組織芯片肺癌癌前病變OPNCD44V6MMP．9免疫組織化學(xué)