簡(jiǎn)介：目的研究體外培養(yǎng)日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞試圖引起血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的分裂尋求引起血吸蟲(chóng)細(xì)胞增殖分裂的有效物質(zhì)為獲得日本血吸蟲(chóng)體外培養(yǎng)無(wú)限增殖的細(xì)胞系提供參考和依據(jù)。模擬自然界的疫水富集毛蚴并提取毛蚴基因組DNA建立一種靈敏、特異的痕量檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)毛蚴的PCR方法。研究日本血吸蟲(chóng)DNA序列片段的2D圖形表示和3D圖形表示從不同角度反映隱藏在DNA序列中的生物學(xué)上的特征來(lái)尋找所隱藏的生物學(xué)的基本規(guī)律為下一步在生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)中驗(yàn)證規(guī)律指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)并發(fā)掘更深層次生命的本質(zhì)奠定基礎(chǔ)。方法取感染7～8W日本血吸蟲(chóng)的小鼠頸椎脫臼法處死無(wú)菌條件下挑取日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)若干條以20條為一組剪碎后用改良日本血吸蟲(chóng)細(xì)胞體外培養(yǎng)方法培養(yǎng)OLYMPUS倒置顯微鏡下拍照記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。隨機(jī)抽取兩個(gè)培養(yǎng)瓶離心收集細(xì)胞制備日本血吸蟲(chóng)染色體OLYMPUSCX31顯微鏡下觀察鑒定日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的存活狀況。把培養(yǎng)瓶隨機(jī)分為三組分別向其中加促細(xì)胞分裂物質(zhì)BFGFIL2和CONA并對(duì)培養(yǎng)瓶依次做標(biāo)記放在相同的環(huán)境和條件中進(jìn)行培養(yǎng)定點(diǎn)定位連續(xù)觀察體外培養(yǎng)日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況并用OLYMPUS數(shù)碼相機(jī)在OLYMPUS倒置顯微鏡下進(jìn)行顯微攝影。取感染6～8W日本血吸蟲(chóng)的小鼠肝臟碾磨后沉淀孵化并利用間接連續(xù)離心法富集毛蚴采用蛋白酶K苯酚法提取毛蚴基因組DNA。登陸GENBANK查詢獲得日本血吸蟲(chóng)保守序列18S小亞基單位核糖體脫氧核酸18SRDNA基因利用引物設(shè)計(jì)軟件PRIMERPREMIER50和OLIGO6自主設(shè)計(jì)一對(duì)引物建立水體檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)毛蚴的PCR方法。梯度稀釋血吸蟲(chóng)毛蚴基因組DNA進(jìn)行PCR方法的靈敏性試驗(yàn)設(shè)置陰性對(duì)照PCR產(chǎn)物通過(guò)電泳鑒定。選取平面直角坐標(biāo)系的兩個(gè)坐標(biāo)軸的4個(gè)方向分別代表4種核苷酸堿基來(lái)作DNA序列片段的2D圖形表示。畫(huà)出相互間隔一個(gè)單位的4條水平線并讓ACGT這4種堿基分別與這4條水平線對(duì)應(yīng)對(duì)應(yīng)堿基描點(diǎn)用直線連接所有相鄰的點(diǎn)最終得到DNA序列片段的“四水平線”圖。將4個(gè)三維空間中的向量分別賦予DNA序列的4種堿基100→A010→C001→G和111→T。根據(jù)向量來(lái)制作DNA序列片段的點(diǎn)的坐標(biāo)。再用直線連接相鄰的點(diǎn)而得到DNA序列片段的3D曲線。最后將DNA序列片段的3D曲線投影到2維平面比較其形狀并進(jìn)行分析。找出DNA序列的特征序列構(gòu)建基于特征序列的DNA序列片段的“雙水平線”圖。構(gòu)建DNA序列片段的有向圖作圖方法同前面的DNA序列片段的2D圖形表示一樣只不過(guò)在連接相鄰的點(diǎn)時(shí)用的是有向箭頭而非線段。結(jié)果1血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞在OLYMPUS倒置顯微鏡下呈球形、色澤鮮亮不添加任何促細(xì)胞分裂物質(zhì)的情況下細(xì)胞數(shù)量起初隨時(shí)間的增長(zhǎng)而有所增多。但隨著時(shí)間進(jìn)一步推移觀察定位的血吸蟲(chóng)細(xì)胞卻“不增殖、不傳代”幾乎很難看到細(xì)胞密度的明顯變化。制備日本血吸蟲(chóng)染色體在油鏡下觀察發(fā)現(xiàn)隨機(jī)抽取的兩瓶細(xì)胞均存在分裂中期相并且染色體數(shù)目N8。不同的促細(xì)胞分裂物質(zhì)對(duì)血吸’蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的影響不完全相同。添加BFGF的血吸蟲(chóng)細(xì)胞增殖并不明顯而添加IL2和CONA的血吸蟲(chóng)細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯增多。其中添加IL2的血吸蟲(chóng)細(xì)胞增殖個(gè)數(shù)最多最為明顯。2PCR擴(kuò)增日本血吸蟲(chóng)毛蚴得到特異性DNA片段片段長(zhǎng)度為463BP陰性對(duì)照組無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。PCR法可檢測(cè)出日本血吸蟲(chóng)毛蚴DNA的最低濃度為625PGΜL。3依次得到了DNA序列片段的2D圖形表示、“四水平線”圖、3D曲線、“雙水平線”圖和DNA序列片段的有向圖并進(jìn)行比較分析。結(jié)論在不添加任何促細(xì)胞分裂物質(zhì)的情況下日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞體外培養(yǎng)“不增殖、不傳代”幾乎很難看到細(xì)胞密度的明顯變化；促細(xì)胞分裂物質(zhì)BFGF對(duì)日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的增殖沒(méi)有明顯促進(jìn)作用而IL2和CONA對(duì)日本血吸蟲(chóng)成蟲(chóng)細(xì)胞的增殖有明顯促進(jìn)作用并且IL2的促進(jìn)作用最為明顯。建立的水體檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)毛蚴的PCR方法靈敏、特異具有一定的預(yù)警作用。DNA序列片段的2D圖形表示和3D圖形表示能從不同角度反映隱藏在DNA序列中的生物學(xué)上的特征。DNA序列片段的2D圖形表示由于簡(jiǎn)并現(xiàn)象導(dǎo)致信息丟失但DNA序列片段的3D曲線卻避免了因與自身相交或重疊而導(dǎo)致的簡(jiǎn)并現(xiàn)象。DNA序列片段的有向圖表示的簡(jiǎn)并度比相應(yīng)無(wú)向圖的低得多甚至在某些時(shí)候下將不再出現(xiàn)簡(jiǎn)并現(xiàn)象。而且在有向圖中我們所看到的實(shí)際上正是沿著生物序列“游走”時(shí)的“歷史”。因此有向圖更容易激發(fā)人們的形象思維從而有利于人們迅速地抓住生物序列的特征。

簡(jiǎn)介：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌的分子生物學(xué)研究姓名王赫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師李巖200341得潰瘍性結(jié)腸炎組織中的腺細(xì)胞和炎性細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞作為對(duì)照；上述方法獲得的細(xì)胞用一步法提取DNA。應(yīng)用酚一氯仿法提取散發(fā)性大腸癌中癌組織和相應(yīng)的淋巴結(jié)組織作為對(duì)照的DNA。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一單鏈構(gòu)像多態(tài)性方法IOCRSSCP檢測(cè)潰瘍性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎伴不典型增生及潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌組織中的微衛(wèi)星狀態(tài)6個(gè)位點(diǎn)LNSCA、MDF41、D18S47、D2S123、D3S1317、D13S158。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)與正常組織相比，若腫瘤組織DNA出現(xiàn)電泳帶的移位、缺失或額外新的電泳帶即確定為該位點(diǎn)微衛(wèi)星不穩(wěn)定。分析組間差異性及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性與HMSH2蛋白表達(dá)缺失的相關(guān)性。第三部分潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌組織中HMSH2基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化測(cè)定實(shí)驗(yàn)組潰瘍性結(jié)腸炎伴不典型增生7例，潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌8例；對(duì)照組散發(fā)性大腸癌30例。應(yīng)用DNA甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶HPAⅡ消化DNA，37℃水浴4小時(shí)后，HMSH2基因啟動(dòng)子區(qū)域PCR擴(kuò)增。甲基化分析取8VAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上電泳，若出現(xiàn)擴(kuò)增帶107BP，則所檢測(cè)的組織存在甲基化，否則為非甲基化。同樣的標(biāo)本在無(wú)HPAⅡ酶切情況下作相同的處理作為對(duì)照。分析HMSH2基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化與HMSH2蛋白表達(dá)缺失的相關(guān)性。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用X2檢驗(yàn)，分析組間差異性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)A0．05雙側(cè)，全部數(shù)據(jù)用SPSS10．0FORWINDOWS95軟件包進(jìn)行分析，P0．05時(shí)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P0．01時(shí)為差異顯著。結(jié)果P53蛋白過(guò)表達(dá)的陽(yáng)性率在潰瘍性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎伴不典型增生、潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌、散發(fā)性大腸癌、慢性結(jié)腸炎等不同組織中分別為4％、44．44％、85．71％、60．61％和O％。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明P53蛋白過(guò)表達(dá)率在潰瘍性結(jié)腸炎與慢性結(jié)腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌與散發(fā)性大腸癌、潰瘍性結(jié)腸炎伴不典型增生與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但在潰瘍性結(jié)腸炎與潰瘍性結(jié)腸炎伴不典型增生組問(wèn)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0．05，潰瘍性結(jié)腸炎與潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)性大腸癌組間的差異顯著PO．01O2

簡(jiǎn)介：廈門(mén)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫(xiě)作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和廈門(mén)大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范試行。另外，該學(xué)位論文為彩阻碼課題組的研究成果，獲得幣陋碼課題組經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在啦約實(shí)驗(yàn)室完成。請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫(xiě)課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。聲明人簽名T沂弘彥年6月／鄉(xiāng)日目錄目錄目錄■I摘要VII第一章前言。111染色體不穩(wěn)定性與染色體異倍化現(xiàn)象1111簡(jiǎn)介1112中心體的復(fù)制和形成2113中心體增殖復(fù)制導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定性的發(fā)生2114細(xì)胞對(duì)異常數(shù)目中心體的反應(yīng)4115中心體額外增殖導(dǎo)致染色體異倍化412絲氨酸、蘇氨酸激奠POLOLIKEKINASE15121簡(jiǎn)介5122PLKL的基因與蛋白結(jié)構(gòu)功能6123調(diào)控PLKI的方式7124有絲分裂G2期到M期的轉(zhuǎn)換過(guò)程中PLKL的功能813微管蛋白1R與環(huán)狀蛋白復(fù)合體丫TURC13131簡(jiǎn)介13132徽管蛋白丫復(fù)合體與微管成核機(jī)制。13133徽管蛋白1，復(fù)合體在細(xì)胞周期中的定位與功能。16134徽管蛋白Y復(fù)合體對(duì)微管正極結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)調(diào)控1714多功能的架構(gòu)蛋白AXIN18141簡(jiǎn)介18142AXIN的基因型與蛋白結(jié)構(gòu)18143AXIN的生物學(xué)功能20144AXIN的調(diào)控方式2615立置背景28

簡(jiǎn)介：南開(kāi)大學(xué)博士學(xué)位論文Ⅰ前列腺癌微轉(zhuǎn)移分子生物學(xué)檢測(cè)指標(biāo)的研究Ⅱ基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制因子在前列腺癌中異常表達(dá)的研究姓名趙洪申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師張琚200241南開(kāi)大學(xué)博士研究生畢業(yè)學(xué)位論文ABSTRACTOBJECTIVETOSTUDYTHEHIGHSENSITIVITYANDSPECIFICITYMARKERANDMETHODFORDETECTINGTHEMICROMETASTASISOFPROSTATECANCER,INORDERTOALLOWMOREPRECISESTAGEANDPROGNOSISOFPATIENTSWITHPROSTATECANCER．METHODSPERIPHERALBLOODWASOBTAINEDFROM32HEALTHYPERSONS，33PATIENTSSUFFERINGFROMBPHAND51PATIENTSWITHPROSTATECANCER20WITHPROSTATECONFINEDTUMOR；17WITHEXTRAPROSTATICPROSTATECANCER；14WIMMETASTATICDISEASE．THEMONONUCLEARCELLSAREISOLATEDBYFICOLLGRADIENT．THEENTIRERTNESTEDPERASSAYFORPSA，HK2ANDPSMASMARKERSWASPERFORMEDTODETECTCIRCULATINGPROSTATECELLS．THERESTLLTSOFRTNESTEDPERASSAYWERECOMPAREDWITHCLINICALPARAMETERSANDANALYZEDBYSTATISTICSMEMOD．RESULTSRTNESTEDPERPOSITIVITYFORPSA，HK2ANDPSMARE52．94％，43．14％AND68．63％RESPECTIVELYINPROSTATECANCERGROUP，AND29．23％，7．69％AND4．62％RESPECTIVELYINCONTROLGROUP．THEREISAHIGHLYSIGNIFICANTDIFFERENCEP0．01TODISTINGUISHPATIENTSWITHPROSTATECANCERFROMBPHPATIENTSANDHEALTHYMENBYDETECTINGTHETHREEMARKERS．RTNESTEDPERSENSITIVITYFORPSMWAS74．2％INPATIENTSWITHMETASTATICDISEASECD．HIGHERTHANPSA61．29％、HK256．61％．THERTNESTEDPCRPOSITIVITYOFPSAANDHK2INCREASEDASCLINICALSTAGESEVOLVED，BUTDIDNOTEXHIBITSTATISTICALSIGNIFICANCE．THERTNESTEDPERPOSITIVITYFORPSMWASHIGHERTHANTHATOFPSAANDHK2INEACHSTAGE，ANDINCREASEDASCLINICALSTAGESEVOLVED．THEREISASIGNIFICANTDIFFERENCECOMPAREDTHESTAGEOFPATIENTSWITHRTNESTEDPERPSMPOSITIVITYP0．05．THETESTHASASSAYSENSITIVITYOFATLEASTLLNCAPCELLPSA，HK2ANDPSMPOSITIVECONTR01PER107LEUKOCYTESFORDETECTIONOFPSA，HK2ANDPER108LEUKOCYTESFORDETECTIONOFPSM．CONCLUSIONTHESENSITIVITYANDSPECIFICITYOFRTNESTEDPERFORPSMASAMARKERISHIGHERTHANTHATFORPSAANDHK2．THERESULTSHAVESHOWNACORRELATIONBETWEENRT．NESTEDPCRPSMPOSITIVEANDSTAGINGDIAGNOSIS．PSMRTNESTEDPERMETHODTODETECTTHEMICROMETASTASISOFPROSTATECANCERMAYHAVEAGREATERVALUEINPROSTATICCANCER’SDIAGNOSIS，THERAPYCHOICEANDPROGNOSTICEVALUATION．．KEYWORDSPROSTATESPECIFICANTIGEN；HUMANKALLIKREIN2PROSTATESPECIFICMEMBRANEANTIGEN；RTNESTEDPCRPROSTATECANCER2

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多枸櫞酸桿菌中質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮耐藥基因的分子生物學(xué)特征及qnrB24基因分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多地奧心血康對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等影響的分子生物學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文膠質(zhì)瘤干/祖細(xì)胞的細(xì)胞與分子生物學(xué)特征研究姓名吳銀艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)神經(jīng)外科學(xué)指導(dǎo)教師黃強(qiáng)20080401膠質(zhì)瘤干／祖細(xì)胞的細(xì)胞與分子生物學(xué)特征研究中文摘要第二部分原發(fā)和復(fù)發(fā)膠質(zhì)瘤干／祖細(xì)胞在裸小鼠腦內(nèi)移植瘤的特征目的人源膠質(zhì)瘤干／祖細(xì)胞HUMANGLIOMASTEMCELLS／PROGENITORS，HGSCPS能分化成親本腫瘤細(xì)胞的全部亞型，在免疫缺陷動(dòng)物腦內(nèi)具有高致瘤性已得到公認(rèn)，但其侵襲性與親本腫瘤的關(guān)系以及GSCPS與移植瘤組織中血管細(xì)胞的關(guān)系尚未明確。本研究探討源自同一患者原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤組織的GSCPS在裸小鼠顱內(nèi)原位移植瘤的特征以及GSCPS移植瘤組織中的腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)系，旨在證明GSCPS裸小鼠原位移植瘤的侵襲性與親本腫瘤的關(guān)系和GSCPS在腦腫瘤組織重構(gòu)中所起的作用。方法將已在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)的原發(fā)和復(fù)發(fā)HGSCPS球在立體定向儀輔助下接種到裸小鼠右腦尾狀核。實(shí)驗(yàn)鼠出現(xiàn)惡病質(zhì)時(shí)處死，取移植瘤組織常規(guī)石蠟包埋、切片、HE、人類白細(xì)胞抗原HUMANLEUCOCYTEANTIGEN，HLA和基質(zhì)金屬蛋白酶．1MATRIXMETALLOPROTEINASE．1，MMPL染色，觀察其致瘤率、侵襲性和血管來(lái)源細(xì)胞。結(jié)果所接種的40只裸小鼠在30天內(nèi)全部因腫瘤而發(fā)病。無(wú)論是原發(fā)還是復(fù)發(fā)HGSCPS在裸小鼠腦內(nèi)接種部位里浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的同時(shí)，還散布于其它區(qū)域。但兩者的侵襲形式不盡相同，原發(fā)者在接種側(cè)半球，呈團(tuán)塊，局限于腦實(shí)質(zhì)；復(fù)發(fā)者，還浸潤(rùn)軟腦膜和對(duì)側(cè)半球，呈粟粒樣分布。MMPL細(xì)胞的分布，復(fù)發(fā)者比原發(fā)者要密集得多。HLA染色顯示移植瘤中存在人源腫瘤細(xì)胞直接構(gòu)成的血管。結(jié)論HGSCPS除了具有高致瘤性，還具有高侵襲性。復(fù)發(fā)的HGSCPS侵襲性更強(qiáng)，除了與MMPL高表達(dá)有關(guān)，還說(shuō)明HGSCPS在侵襲性上具有親本腫瘤特異性。在HGSCPS的裸小鼠移植瘤中，腫瘤細(xì)胞在宿主腦內(nèi)廣泛分布并構(gòu)成了血管。GSCPS可能轉(zhuǎn)分化成腫瘤血管細(xì)胞，在腦膠質(zhì)瘤組織重構(gòu)中起重要作用。關(guān)鍵詞膠質(zhì)瘤干／祖細(xì)胞；移植瘤；致瘤性；侵襲性；組織重構(gòu)第三部分克隆基因工程鼠的膠質(zhì)瘤干／祖細(xì)胞和神經(jīng)干／祖細(xì)胞目的據(jù)推測(cè)膠質(zhì)瘤干虛細(xì)胞GLIOMASTEMCELLS／PROGENITORS，GSCPS源于神經(jīng)干／祖細(xì)胞NEURALSTEMCELLS／PROGENITORS，NSCPS，但缺少實(shí)驗(yàn)根據(jù)?？寺∫呀?jīng)發(fā)生膠質(zhì)瘤的基因工程鼠的GSCPS和NSCPS以及同品系胎鼠的NSCPS，旨在為進(jìn)一步研究?jī)烧邷Y源關(guān)系提供實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞。LI

簡(jiǎn)介：研究背景手足口?。℉FOOTMOUTHDISEASEHFMD）是由人腸道病毒（HUMANENTEROVIRUSHEV）引起的常見(jiàn)兒童急性傳染病，以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現(xiàn)皮疹為主要臨床特征，少數(shù)病例出現(xiàn)腦炎、心肌炎、肺水腫、急性弛緩性麻痹等嚴(yán)重并發(fā)癥，極少數(shù)情況下可引起死亡。HFMD可由許多血清型的HEV引起，但最主要的病原體為人腸道病毒71型（HEV71）和柯薩奇病毒A組16型（CVA16）。自1981年HFMD在中國(guó)上海首次報(bào)道以來(lái)，全國(guó)各地均有HFMD暴發(fā)及散發(fā)的報(bào)道。內(nèi)蒙古自治區(qū)自2007年首次報(bào)道HFMD以來(lái)，疫情基本呈逐年遞增的趨勢(shì)，而且HFMD的重癥病例和死亡病例的發(fā)病率也呈逐年增加，截至2010年全年累計(jì)報(bào)告HFMD病例18944例，重癥病例247例，死亡13例。然而到目前為止，HFMD的致病機(jī)理還不確定，而且還沒(méi)有安全有效的疫苗和藥物用于預(yù)防和控制本病，因此加強(qiáng)該病的流行病學(xué)、病原學(xué)及基因特征和病理學(xué)研究具有非常重要的意義。為了更好的預(yù)防和控制HFMD，我們開(kāi)展了相關(guān)內(nèi)容的基礎(chǔ)研究。研究目的為了了解內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行情況，了解HFMD主要致病病原體的流行本底，更好地預(yù)防和控制HFMD，我們開(kāi)展了相關(guān)內(nèi)容的和應(yīng)用基礎(chǔ)研究，旨在闡明和揭示內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)特點(diǎn)、HEV71和CVA16分子流行病學(xué)特征和HEV71重癥病例的病理學(xué)特點(diǎn)。主要方法（1）采用描述性流行病學(xué)方法對(duì)2008～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)特征進(jìn)行分析。（2）應(yīng)用REALTIMEPCR方法對(duì)2010年12個(gè)盟市和2011年部分盟市門(mén)診疑似病例的標(biāo)本進(jìn)行病原鑒定，然后進(jìn)行病毒分離，應(yīng)用REALTIMEPCR方法對(duì)病毒分離物進(jìn)行鑒定，對(duì)鑒定為其它HEV的陽(yáng)性分離物進(jìn)行VP4編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測(cè)定和分析。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的HFMD患者臨床標(biāo)本中分離到的HEV71隨機(jī)選取代表株進(jìn)行VP1編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測(cè)定和分析，應(yīng)用MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與HEV71其它各基因型和基因亞型的代表株的親緣進(jìn)化關(guān)系；從選取的HEV71代表株中按年代和癥狀不同隨機(jī)選取12株進(jìn)行基因組全長(zhǎng)測(cè)序和分析，應(yīng)用SIMPLOT軟件分析和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71代表株與A組其他腸道病毒的相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系。（3）對(duì)2010年在12個(gè)盟市和2011年在部分盟市門(mén)診采集的疑似HFMD病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，應(yīng)用REALTIMEPCR方法對(duì)病毒分離物進(jìn)行CVA16鑒定。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的手足口病患者臨床標(biāo)本中分離到的CVA16隨機(jī)選取代表株進(jìn)行VP1編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測(cè)定和分析，與CVA16其它各基因型和基因亞型的代表株和內(nèi)蒙古2007年和2008年的代表株構(gòu)建親緣性進(jìn)化樹(shù)；從選取的CVA16代表株中按照癥狀的不同選取6株進(jìn)行基因組全長(zhǎng)序列測(cè)定和分析，應(yīng)用SIMPLOT軟件和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行CVA16代表株與其他腸道病毒的相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系。（4）對(duì)2010年河南省1例HEV71引起的死亡病例進(jìn)行尸體剖檢，并將多個(gè)組織分別進(jìn)行福爾馬林處理和液氮保存，并分別進(jìn)行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)，初步探討HEV71的致病機(jī)理。研究結(jié)果（1）2010～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的發(fā)病率不同年份、月份和盟市之間不同，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著；發(fā)病高峰主要集中在6～8月，比南方城市的高峰期推遲一個(gè)月；發(fā)病人群主要集中在1～10歲尤其是1～4歲，占總發(fā)病人的8233；男性發(fā)病率高于女性發(fā)病率，構(gòu)成比為151，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著，同時(shí)盟市人口的發(fā)病率比旗縣人口的發(fā)病率高，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著。（2）內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的主要病原是CVA16和HEV71，同時(shí)從個(gè)別HFMD患者的臨床標(biāo)本中分離出10株其他腸道病毒，重癥病例中以HEV71為主；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株屬于C4基因亞型C4A進(jìn)化分支，并且存在多個(gè)傳播鏈；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與2008年北京代表株親緣關(guān)系比2007年內(nèi)蒙古代表親緣關(guān)系近，說(shuō)明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71不是獨(dú)立進(jìn)化的，而是與中國(guó)流行的HEV71在共同進(jìn)化；2010～2011年流行的HEV71代表株與2008臺(tái)灣代表株來(lái)源于同一個(gè)原始株，經(jīng)重組和親緣進(jìn)化關(guān)系樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)，2010～2011年流行的HEV71代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主。（3）內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16代表株均屬于B1基因亞型的兩大進(jìn)化分支B1A和B1B，并且存在多個(gè)傳播鏈，有兩條優(yōu)勢(shì)傳播鏈；與2009年山東、北京和2010年河南的代表株親緣關(guān)系很近，說(shuō)明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16不是獨(dú)立進(jìn)化的，而是與中國(guó)流行的CVA16共同進(jìn)化；2010年B1B分支的CVA16與2009年上海代表株來(lái)源于同一個(gè)原始株，屬于B1A進(jìn)化分支的CVA16與2011年泰國(guó)的代表株來(lái)源于同一個(gè)原始株，同時(shí)B1B分支的CVA16進(jìn)化的比較快；經(jīng)相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)，2010年流行的CVA16代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主，而且非結(jié)構(gòu)蛋白編碼的核苷酸與HEV71原型株同源性很近，提示CVA16與HEV71發(fā)生重組。（4）HEV71死亡病例尸體眼觀病變主要表現(xiàn)為肺淤血、水腫，支氣管管腔內(nèi)可見(jiàn)灰白色黏稠液體；腦水腫，蛛網(wǎng)膜下腔充血、出血。主要病理組織學(xué)病變?yōu)槟X脊髓發(fā)生水腫、管套形成、衛(wèi)星現(xiàn)象、嗜神經(jīng)元現(xiàn)象，推測(cè)HEV71引起了非化膿性腦脊髓炎；肺水腫、肺泡結(jié)締組織增生、肺泡腔內(nèi)透明膜形成、粉紅色漿液滲出、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、肺泡Ⅱ型細(xì)胞脫落，推測(cè)HEV71引起了病毒性肺炎。該病例的主要受害器官是腦脊髓和肺臟。免疫組化檢測(cè)，不但在神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號(hào)，還在肺、支氣管、闌尾、胃、十二指腸、肝、空腸、脾、胸腺、胰、腎組織細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性信號(hào)。據(jù)此推測(cè)HEV71是一種泛嗜性病毒；該病毒可通過(guò)多種細(xì)胞內(nèi)增殖（包括血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖）經(jīng)血液循環(huán)在機(jī)體內(nèi)完成擴(kuò)散；主侵器官是腦脊髓和肺臟，直接致死原因是神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂和呼吸衰竭。結(jié)論（1）本文闡明了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)規(guī)律，闡明了HFMD的發(fā)病時(shí)間、易感人群和地區(qū)分布與全國(guó)其它地區(qū)的異同點(diǎn)，以及其自身的規(guī)律性。（2）本文確定了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的病原譜以HEV71、CVA16為主，和兼有其他腸道病毒如CVB4參與致本病。（3）揭示了CVA16和HEV71的主要分子生物學(xué)特征（包括分子流行病學(xué)、病毒基因特征、進(jìn)化關(guān)系等）。（4）豐富了HEV71致病的病理學(xué)特征，并在神經(jīng)組織、肺臟、支氣管、胃腸道、肝臟、胰腺、腎臟和脾臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號(hào)。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R4452密級(jí)學(xué)位類別科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位回／學(xué)校代碼學(xué)號(hào)學(xué)科門(mén)類L00622010702292醫(yī)學(xué)又肄鼉科袁警TL囊麓JL麓麓薯蠢L驀蠢ILL罐麓I垤L爆萋1I髻碩士學(xué)位論文刑LASTER’SDISSER『I’ATION論文題目乳腺癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MM表現(xiàn)與分子生物學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性研究TITLESTUDYONCORRELATIONOFDYNAMICCONTRASTENHANCEDMAGNETICRESONANCEIMAGINGFEATURESANDMOLECULARBIOLOGYMARKERSINBREASTCANCER一級(jí)學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)論文作者安麗華指導(dǎo)教師陳東風(fēng)導(dǎo)師組成員王少春孫新海天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的分析乳腺癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)MRJ表現(xiàn)與分子生物學(xué)指標(biāo)雌激素受體ESTROGENRECEPTORER、孕激素受體PROGESTERONERECEPTORPR、人表皮生長(zhǎng)因子受體2HUMANEPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR2，HER2、核增殖標(biāo)志物KI一67表達(dá)的相關(guān)性。以期通過(guò)DCEM砒表現(xiàn)揭示腫瘤的生物學(xué)行為，并為腫瘤的預(yù)后評(píng)估及臨床治療方案的選擇提供影像學(xué)參考。從而提高動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振檢查在臨床診療中的應(yīng)用價(jià)值。方法收集我院2011年04月2013年08月術(shù)前行動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振檢查，并經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的乳腺癌53例共55個(gè)腫塊，檢查前、術(shù)前均未行放、化療治療。采用德國(guó)西門(mén)子30T超導(dǎo)磁共振掃描儀，常規(guī)行T1加權(quán)成像T1WEIGHTEDIMAGING，T1WI、T2加權(quán)成像T2WEIGHTEDIMAGING，T2WI及動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描，觀察病變?cè)鰪?qiáng)后的形態(tài)學(xué)特征腫塊大小、形態(tài)、邊緣、時(shí)間信號(hào)強(qiáng)度曲線TIMESIGNALINTENSITYCURVE，TIC類型、強(qiáng)化形式、早期增強(qiáng)率等。免疫組化染色測(cè)定分子生物學(xué)指標(biāo)ER、PR、HER2、KI67的表達(dá)情況。分析乳腺癌動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振DYNAMICCONTRASTENHANCEDMAGNETICRESONANCEIMAGING，DCEMRI表現(xiàn)與分子生物學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性。所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSSL90軟件處理，采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中SPEARMAN等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，P005，腫塊越大，其鼬67陽(yáng)性表達(dá)率越高。2腫塊形態(tài)與HER2陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)R0305，P005，在類圓形、分葉形及不規(guī)則形腫塊中，其HER2、KI67的陽(yáng)性表達(dá)率是依次增高的，腫塊傾向于分葉形、不規(guī)則形時(shí)，其HER2、飚67陽(yáng)性表達(dá)較高。3腫塊邊緣與ER、PR陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)R值分別為0288，、0294，P005，即

簡(jiǎn)介：銀杏聚戊烯醇類化合物包括游離聚戊烯醇PPS和聚戊烯醇乙酸酯PPAS，是銀杏葉中除類黃酮和萜內(nèi)酯外的又一類重要次生代謝產(chǎn)物，對(duì)人類具有重要的藥用和保健作用。目前關(guān)于銀杏聚戊烯醇的研究主要集中在成分分析和含量測(cè)定上，對(duì)于其生物合成相關(guān)酶基因的克隆與表達(dá)尚未見(jiàn)研究。本文以銀杏不同生長(zhǎng)時(shí)期的葉片（510月份）以及不同組織器官（葉、花、果實(shí)和根）為材料，測(cè)定和分析各器官間PPS的含量，克隆銀杏PPS合成的相關(guān)基因CPT、PT、FPS，研究銀杏PPS合成關(guān)鍵基因CPT的表達(dá)情況。主要研究結(jié)果如下1、對(duì)銀杏不同生長(zhǎng)時(shí)期雌雄葉片中的PPS含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在不同生長(zhǎng)時(shí)期雌雄葉片中均可以檢測(cè)到PPS的存在，其中雄葉的含量在32092195438ΜGG1FW之間，雌葉的含量在40193229167ΜGG1FW之間。2、對(duì)銀杏雄株不同生長(zhǎng)時(shí)期的幼葉和老葉的PPS含量進(jìn)行分析，結(jié)果表明，幼葉的含量在48030196189ΜGG1FW之間，老葉的含量在32092100403ΜGG1FW之間，不同時(shí)期均為幼葉高于老葉。3、對(duì)銀杏不同器官間的PPS含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同器官均檢測(cè)到PPS的存在，但含量不同。其中，根中的含量為3573ΜGG1FW，花粉中的含量為5805ΜGG1FW，均明顯低于果實(shí)（54531ΜGG1FW）和葉片138962ΜGG1FW。4、以不同生長(zhǎng)時(shí)期銀杏雌株葉片為材料，比較了CTAB法、乙二醇丁醚法和改良TRIZOL法提取銀杏葉片RNA的效果，結(jié)果表明改良TRIZOL法獲得的RNA濃度和產(chǎn)率均較高，可滿足后續(xù)分子生物學(xué)研究。5、根據(jù)不同植物順式異戊烯基轉(zhuǎn)移酶CPT基因的保守區(qū)序列，設(shè)計(jì)PCR引物，采用RTPCR和RACE技術(shù)，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1210BP的CPT基因全長(zhǎng)CDNA。該基因789BP的開(kāi)放閱讀框F編碼262個(gè)氨基酸，與其他植物CPT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBCPT，GENEBANK登錄號(hào)為JN108023。6、根據(jù)不同植物異戊烯基轉(zhuǎn)移酶PT基因的保守區(qū)序列，設(shè)計(jì)PCR引物，采用RTPCR和RACE技術(shù)，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1646BP的PT基因全長(zhǎng)CDNA。該基因750BP的F，編碼249個(gè)氨基酸，與其他植物PT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBPT，GENEBANK登錄號(hào)為JQ303336。7、根據(jù)GENBANK中其它植物法尼基焦磷酸合成酶FPS基因序列設(shè)計(jì)引物，以銀杏葉片RNA為模板，采用3RACE方法擴(kuò)增得到CDNA3端部分序列。該CDNA3端部分長(zhǎng)701BP，包含一個(gè)316BP的F，3端有385BP的非翻譯區(qū)UTR并具有完整的POLYA尾巴，編碼104個(gè)氨基酸，與其他植物FPS基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GBFPS，GENEBANK登錄號(hào)為JQ309808。8、對(duì)銀杏不同器官CPT基因相對(duì)表達(dá)水平研究表明，CPT基因的表達(dá)水平與不同器官中PPS的合成與積累變化趨勢(shì)一致，但不同發(fā)育時(shí)期葉片中CPT基因的表達(dá)水平與PPS的變化動(dòng)態(tài)不一致。

簡(jiǎn)介：目的MIRNAMICRIBONUCLEICACID，微小核糖核酸是一種單鏈非編碼小分子RNA（RIBONUCLEICACID，核糖核酸），在基因表達(dá)調(diào)控方面具有廣泛和普遍的作用，但目前對(duì)其在骨折愈合與不愈合中的調(diào)控作用尚知之甚少。本研究擬首先篩選萎縮性骨不連修復(fù)組織中異常表達(dá)的MIRNA種類，并通過(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)表達(dá)上調(diào)MIRNA的成骨功能相關(guān)靶基因，再?gòu)募?xì)胞水平驗(yàn)證萎縮性骨不連組織中表達(dá)上調(diào)MIRNA對(duì)預(yù)測(cè)靶基因的調(diào)控作用，從而闡明MIRNA在萎縮性骨不連發(fā)病過(guò)程中的調(diào)控作用及其分子生物學(xué)機(jī)制，為骨不連的基礎(chǔ)和臨床研究提供理論和實(shí)踐依據(jù)。方法（1）以臨床患者萎縮性骨不連修復(fù)組織（A組，3例）與正常骨折愈合后內(nèi)固定鋼板取出時(shí)鋼板周圍骨痂組織（B組，3例）為研究對(duì)象，采用EXIQONMIRCURYLNAMICRNA芯片110版對(duì)各組織中提取的RNA進(jìn)行MIRNA篩選分析。在篩選出萎縮性骨不連組織中異常表達(dá)的MIRNA后，采用熒光QRTPCR（QUANTITATIVEREALTIMEPOLYMERASECHAINREACTION，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)）對(duì)芯片結(jié)果中A組表達(dá)上調(diào)的MIRNA在兩種組織的表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證，并采用瀏覽計(jì)算機(jī)預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)的生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其可能的靶基因，探尋MIRNA可能參與的骨折愈合和萎縮性骨不連相關(guān)病理生理過(guò)程。（2）上調(diào)MIRNA與預(yù)測(cè)靶基因關(guān)系的驗(yàn)證取人骨髓全血，離心分離HBMSCS（HUMANBONEMESENCHYMALSTEMCELLS，人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞），傳代培養(yǎng)。將人工合成的四種表達(dá)上調(diào)MIRNA的雙鏈小RNA轉(zhuǎn)染入第四代HBMSCS，48小時(shí)后提取細(xì)胞總RNA，采用QRTPCR、WB（WESTERNBLOTTING，蛋白印跡）、雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)等多種方法，驗(yàn)證MIRNA對(duì)預(yù)測(cè)靶基因的作用，確認(rèn)MIRNA在萎縮性骨不連中的具體調(diào)控作用和分子生物學(xué)機(jī)制。（3）MIRNA和相應(yīng)靶基因在誘導(dǎo)HBMSCS成骨分化過(guò)程中表達(dá)水平及功能的相關(guān)研究采用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)HBMSCS成骨分化的方法，觀察在誘導(dǎo)HBMSCS成骨分化過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)（012H1D2D4D7D14D）相應(yīng)MIRNA、靶基因MRNA（MESSENGERRIBONUCLEICACID，信使核糖核酸）與蛋白表達(dá)水平的變化趨勢(shì)，進(jìn)一步驗(yàn)證這些上調(diào)MIRNA在誘導(dǎo)成骨分化中的調(diào)控作用并探討成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液的誘導(dǎo)成分在此過(guò)程中促進(jìn)成骨分化的作用。結(jié)果（1）萎縮性骨不連修復(fù)組織相對(duì)鋼板周圍骨痂組織有9種MIRNA發(fā)生15倍以上表達(dá)上調(diào)（HSAMIR149，HSAMIR221，HSAMIR6283P，HSAMIR6545P，以及5種HSAMIRPLUS），9種MIRNA發(fā)生15倍以上表達(dá)下調(diào)（HSALET7B，HSAMIR220B，HSAMIR513A3P，HSAMIR551A，HSAMIR5765P，HSAMIR1236，KSHVMIRK1265P，以及2種HSAMIRPLUS）。QRTPCR結(jié)果提示，數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄并在A組表達(dá)上調(diào)的四種MIRNA在組織水平的表達(dá)變化趨勢(shì)與芯片結(jié)果一致。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，四種表達(dá)上調(diào)MIRNA的預(yù)測(cè)靶基因包括多種成骨功能相關(guān)基因。（2）分離培養(yǎng)的HBMSCS具有典型的干細(xì)胞形態(tài)特征，貼壁時(shí)間短，細(xì)胞融合快，體外擴(kuò)增容易，可以向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)，適合作為種子細(xì)胞用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。在成功將上調(diào)MIRNA的合成雙鏈小RNA轉(zhuǎn)染進(jìn)第四代HBMSCS48H后，提取細(xì)胞總RNA，QRTPCR檢測(cè)表明，三種預(yù)測(cè)靶基因（HSAMIR149的預(yù)測(cè)靶基因ALPL、HSAMIR221的預(yù)測(cè)靶基因PDGFA和HSAMIR6545P的預(yù)測(cè)靶基因BMP2）的MRNA表達(dá)量受到明顯抑制，其余預(yù)測(cè)靶基因的MRNA無(wú)明顯下降；WB則表明上述三種預(yù)測(cè)靶基因的蛋白表達(dá)量均受到明顯抑制。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)則證明三種預(yù)測(cè)靶基因的預(yù)測(cè)靶位點(diǎn)分別直接受到HSAMIR149、HSAMIR221和HSAMIR6545P的靶向調(diào)控，其中ALPL的兩個(gè)預(yù)測(cè)靶位點(diǎn)只有第二個(gè)受到HSAMIR149的直接調(diào)控。（3）誘導(dǎo)HBMSCS成骨分化過(guò)程中，得到確認(rèn)的成骨性靶基因ALPL、PDGFA和BMP2的MRNA和蛋白表達(dá)量在多數(shù)時(shí)間點(diǎn)有明顯增加，尤其以誘導(dǎo)分化后2～7天變化最為顯著（ALPL蛋白為1～7天），第14天時(shí)又有所下降。不同時(shí)間點(diǎn)的MIRNA、靶基因MRNA和蛋白水平存在表達(dá)差異，其中HSAMIR149和HSAMIR6545P的變化趨勢(shì)與各自靶基因ALPL和BMP2的MRNA及蛋白表達(dá)水平總體上呈負(fù)相關(guān)，而HSAMIR221與PDGFA的變化趨勢(shì)無(wú)明顯負(fù)相關(guān)關(guān)系，兩者的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。結(jié)論（1）萎縮性骨不連修復(fù)組織中存在MIRNA的異常表達(dá)；四種在該組織中上調(diào)的MIRNAHSAMIR149、HSAMIR221、HSAMIR6283P和HSAMIR6545P有可能通過(guò)抑制多種成骨功能相關(guān)靶基因的表達(dá)，在調(diào)控骨折向萎縮性骨不連發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。（2）細(xì)胞水平驗(yàn)證表明四種在組織水平上調(diào)的MIRNA中，HSAMIR149與其預(yù)測(cè)的靶基因ALPL、HSAMIR221與其預(yù)測(cè)的靶基因PDGFA、HSAMIR6545P與其預(yù)測(cè)的靶基因BMP2之間存在直接調(diào)控作用，異常上調(diào)的MIRNA通過(guò)抑制成骨功能相關(guān)靶基因ALPL、PDGFA和BMP2的表達(dá)而限制其生物學(xué)功能，引起了萎縮性骨不連的發(fā)生發(fā)展。（3）多種成骨功能相關(guān)靶基因的MRNA和蛋白表達(dá)水平在誘導(dǎo)HBMSCS成骨分化過(guò)程中大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)發(fā)生了表達(dá)上調(diào)，HSAMIR149和HSAMIR6545P與其相應(yīng)靶基因ALPL和BMP2的MRNA及蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明這兩種MIRNA在誘導(dǎo)成骨分化過(guò)程中與其靶基因MRNA和蛋白表達(dá)水平的調(diào)控密切相關(guān)。簡(jiǎn)述之，本研究從萎縮性骨不連修復(fù)組織中找到具有關(guān)鍵調(diào)控作用的MIRNA，發(fā)現(xiàn)有三種表達(dá)異常上調(diào)的MIRNA通過(guò)抑制成骨功能相關(guān)靶基因引起了萎縮性骨不連的發(fā)生發(fā)展，其中兩種MIRNA的表達(dá)水平與成骨功能相關(guān)靶基因的MRNA和蛋白表達(dá)水平密切相關(guān)。本研究可能將為萎縮性骨不連的診斷和治療提供新的理念。

簡(jiǎn)介：近年來(lái)，氣單胞菌引起了人們?cè)絹?lái)越多的關(guān)注，一方面由氣單胞菌引起的疾病在不斷增多，不僅包括一些普通的腸胃感染，還包括一些腸外疾病，例如類炎性腸病和菌血癥。另一方面，對(duì)于氣單胞菌病理機(jī)制的研究也吸引了越來(lái)越多人的注意。然而，無(wú)論對(duì)于氣單胞菌的診斷還是對(duì)其病理機(jī)制的研究都要求建立一種快速檢測(cè)氣單胞菌的方法。目前對(duì)于氣單胞菌的檢測(cè)還主要采用傳統(tǒng)的菌種培養(yǎng)和生理生化鑒定方法，操作繁瑣復(fù)雜，檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，交叉反應(yīng)多。本課題首創(chuàng)利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）檢測(cè)氣單胞菌，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）是一種新的恒溫核酸擴(kuò)增方法，其特點(diǎn)是針對(duì)靶基因的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶（BSTDNAPOLYMERASE）在等溫條件（65℃左右）保溫幾十分鐘，即可完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)。它具有簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。在此課題中，我們針對(duì)氣單胞菌16S23SRRNA基因間區(qū)（INTERGENICSEQUENCEIGS）序列設(shè)計(jì)4條特異性引物（兩條內(nèi)引物和兩條外引物）進(jìn)行LAMP擴(kuò)增。為了檢測(cè)引物的特異性，127株氣單胞菌（包括18株典型菌株和109株臨床分離株）和84株臨床或分類上與氣單胞菌相似的菌株被鑒定。結(jié)果顯示LAMP具有很強(qiáng)的特異性，且其靈敏度可達(dá)到101CFU。我們將普通PCR和LAMP做了對(duì)照。結(jié)果顯示普通PCR的靈敏度最多可達(dá)102CFU。此外，我們對(duì)實(shí)際糞便樣本也進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示LAMP的檢測(cè)結(jié)果與普通PCR和生化培養(yǎng)的檢測(cè)結(jié)果是一致的。我們深入探討了利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)進(jìn)行氣單胞菌檢驗(yàn)的程序和方法，建立了比較完善的反應(yīng)體系，提高了檢驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確性，有望將檢驗(yàn)時(shí)間由原來(lái)的2496小時(shí)縮短到1小時(shí)。該方法檢測(cè)氣單胞菌特異性強(qiáng)、靈敏度高，并且操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本低，有望發(fā)展成為快速檢測(cè)氣單胞菌的有效手段。

簡(jiǎn)介：協(xié)同刺激信號(hào)在T細(xì)胞參與免疫應(yīng)答的起始、效應(yīng)和終止等不同階段都發(fā)揮了重要的調(diào)控作用且需要達(dá)到相對(duì)平衡。PD1PDL途徑介導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)能有效抑制T、B細(xì)胞功能，在機(jī)體免疫應(yīng)答后期的負(fù)性調(diào)節(jié)中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，并在腫瘤免疫、自身免疫、移植免疫和慢性病毒感染等疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要的生物學(xué)意義。PD1CD279為負(fù)性協(xié)同刺激分子受體，其最顯著的特征是胞漿區(qū)含有一個(gè)免疫受體酪氨酸抑制基序ITIM和一個(gè)免疫受體酪氨酸轉(zhuǎn)換基序ITSM。PD1主要在活化的T、B和NK等細(xì)胞上呈誘導(dǎo)性表達(dá)，PD1有PDL1B7H1，CD274和PDL2B7DC，CD273兩個(gè)配體。PDL1和PDL2同屬B7超家族，在蛋白結(jié)構(gòu)上均包含有IGV樣區(qū)、IGC樣區(qū)、跨膜區(qū)和一個(gè)短而保守的胞漿區(qū)。PDL1廣泛組成性表達(dá)于多種實(shí)質(zhì)器官組織、免疫細(xì)胞以及多種類型的腫瘤細(xì)胞上，而PDL2僅表達(dá)于活化的巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、骨髓來(lái)源的基質(zhì)細(xì)胞和個(gè)別腫瘤細(xì)胞株。研究表明，PD1隨T細(xì)胞活化程度逐步上調(diào)表達(dá)，PD1PDL相互作用后觸發(fā)ITSM基序募集信號(hào)分子SHP2，引發(fā)抑制信號(hào)的產(chǎn)生，致使效應(yīng)性T細(xì)胞失能并及時(shí)進(jìn)入凋亡。因此，PD1PDL途徑對(duì)T細(xì)胞在免疫應(yīng)答過(guò)程中恰當(dāng)而有效的調(diào)節(jié)具有重要的生物學(xué)意義，通過(guò)研究PD1PDL與多種臨床疾病的相關(guān)性，闡明其作用機(jī)理，有望為這些疾病的免疫治療提供新策略。研究發(fā)現(xiàn)，多種協(xié)同刺激分子能分別以細(xì)胞膜型和可溶性兩種形式存在，包括CD28、CTLA4、CD80、CD86、ICOSL、B7H3和B7H4等?？扇苄苑肿涌梢酝ㄟ^(guò)蛋白水解酶裂解細(xì)胞上的膜型分子而形成，也可由專一的MRNA直接編碼產(chǎn)生。有些可溶性分子具有臨床診斷價(jià)值。本研究旨在構(gòu)建基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞L929PD1和L929PDL1的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研制鼠抗人PD1和PDL1單克隆抗體，并對(duì)單抗的生物學(xué)特性進(jìn)行研究；分別建立特異性檢測(cè)人SPD1和SPDL1的ELISA方法，并對(duì)ELISA檢測(cè)體系的穩(wěn)定性和精確性等進(jìn)行分析、評(píng)價(jià)；利用SPDI的ELISA方法對(duì)健康人和自身免疫病患者外周血中的SPD1表達(dá)水平及特性進(jìn)行分析，同時(shí)，對(duì)SPD1的產(chǎn)生機(jī)制進(jìn)行研究，探討該可溶性因子對(duì)PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用及其在自身免疫病中的生物學(xué)意義；應(yīng)用建立的ELISA分析SPDLI在人外周血和多種體外培養(yǎng)細(xì)胞上清中的表達(dá)特性，研究功能性SPDL1的產(chǎn)生機(jī)制及其對(duì)T細(xì)胞的協(xié)同刺激效應(yīng)，分析肺癌患者外周SPDL1的表達(dá)及其與腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的相關(guān)性。這些研究結(jié)果為闡明SPD1和SPDL1對(duì)PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用及其生物學(xué)意義提供了新的線索。一、鼠抗人PD1和PDL1單克隆抗體的研制及生物學(xué)特性的研究目的研制特異性鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體，為研究人PD1PDL1分子在免疫細(xì)胞上的表達(dá)特性和探討該抑制途徑對(duì)人免疫細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)提供必要的物質(zhì)材料。方法以穩(wěn)定高表達(dá)人PD1、PDL1分子的基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞L929PD1、和L929PDL1為免疫原，常規(guī)免疫BALBC小鼠，采用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合，并以基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞和融合蛋白通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或ELISA方法篩選雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，將鑒定后符合要求的雜交瘤細(xì)胞株進(jìn)行反復(fù)篩選和多次克隆化培養(yǎng)，最終獲得多株分泌特異性鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；采用IG亞型快速定性試紙法、單抗單抗或單抗蛋白競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)、WESTERNBLOT和ELISA等試驗(yàn)，對(duì)獲得的單克隆抗體進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定；用間接免疫熒光法分析PD1、PDL1在不同類型細(xì)胞表面的表達(dá)特性；應(yīng)用獲得的單抗對(duì)人T、DCS等細(xì)胞進(jìn)行體外生物學(xué)功能的研究。結(jié)論成功菝得多株新的鼠抗人PD1、PDL1單克隆抗體，識(shí)別不同抗原表位的單抗為進(jìn)一步應(yīng)用于研制ELISA試劑盒，從而用于測(cè)定可溶性蛋白因子奠定了良好基礎(chǔ)。上述單抗的研制也為揭示膜型PD1和PDL1的表達(dá)特性，探討PD1PDL1抑制途徑對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及其生物學(xué)意義提供了必要的物質(zhì)材料。二、特異性檢測(cè)人可溶性PD1、PDL1蛋白ELISA試劑盒的研制目的研制特異性高靈敏度檢測(cè)人SPD1和SPDL1的ELISA試劑盒，為定量分析不同來(lái)源的臨床標(biāo)本和研究這兩種可溶性因子的功能提供有效的檢測(cè)手段。方法利用ANTIPD1MAB489作包被抗體在碳酸鹽緩沖液中預(yù)包被ELISA板，BIOTINANTIPD1MAB9H1作為檢測(cè)抗體識(shí)別與489相結(jié)合的抗原，再與STREPTAVIDINHRP反應(yīng)，最后用TMB底物進(jìn)行顯色反應(yīng)，建立雙抗體夾心SPD1酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒。利用相同批次多組檢測(cè)孔進(jìn)行精確性分析，利用相同批次ELISA板在不同測(cè)定時(shí)間點(diǎn)的準(zhǔn)確性進(jìn)行試劑盒穩(wěn)定性分析。同樣的方案，用ANTIPDL1MAB2HLL作為包被抗體和BIOTINANTIPDL1MAB10D7作為檢測(cè)抗體建立特異性檢測(cè)人SPDL1的ELISA體系。結(jié)論特異性高靈敏度檢測(cè)人SPD1和SPDL1ELISA試劑盒的建立為定量分析PD1PDL1抑制途徑中可溶性蛋白因子提供了有效的檢測(cè)手段。三、SPD1表達(dá)的特性及其對(duì)PD1PDL1途徑的阻斷作用和在自身免疫病理中的意義目的揭示健康人外周血中SPD1表達(dá)的特性，闡明機(jī)體中SPD1的產(chǎn)生機(jī)制，探討SPD1在自身免疫病患者外周異常表達(dá)的意義及其對(duì)PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用。方法利用自主研制的SPD1ELISA試劑盒檢測(cè)分析不同年齡段健康人外周血中SPD1的表達(dá)求平；流式細(xì)胞術(shù)和ELISA分析人T細(xì)胞在體外刺激活化過(guò)程中膜型和可溶性PD1的表達(dá)特性；通過(guò)RTPCR和TPPCR法克隆人全長(zhǎng)PD1FLPD1、缺失外顯子3的PD1PD1AEX3和PD1胞外段SPD1基因，構(gòu)建PLRES2EGFPFLPD1、PLRES2EGFPPD1AEX3和PLRES2EGFPSPDL重組真核表達(dá)載體，用脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，于不同時(shí)間點(diǎn)收集基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞并用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)分析細(xì)胞膜上PD1的表達(dá)，用WESTERNBLOT和SPD1ELISA方法對(duì)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)上清中SPD1進(jìn)行定性和定量分析；合成PD1蛋白胞內(nèi)段特定的抗原肽，免疫新西蘭兔制備兔抗人PD1胞內(nèi)段多抗；免疫沉淀技術(shù)收集人血清中的SPD1并進(jìn)行WESTERNBLOT，應(yīng)用兔抗人PD1胞內(nèi)段多抗與SPD1蛋白雜交顯色，進(jìn)而鑒定SPD1蛋白特性；通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)分析SPD1蛋白與PDL1、PDL2的結(jié)合能力；利用SPD1ELISA和WESTERNBLOT方法對(duì)自身免疫病患者（GRAVES’、RA和HSP）外周血中該因子進(jìn)行定量和定性分析。結(jié)論功能性SPD1存在并高表達(dá)于自身免疫病患者外周為進(jìn)一步闡明SPD1對(duì)PD1PDL1抑制信號(hào)的阻斷作用開(kāi)拓了新的途徑，為探討該可溶性因子在生理和自身免疫病理?xiàng)l件下的生物學(xué)意義奠定了良好的基礎(chǔ)。四、SPDL1表達(dá)的特性及其對(duì)PD1PDL1途徑促進(jìn)作用和在腫瘤免疫逃逸中的意義目的應(yīng)用SPDL1ELISA揭示健康人外周血和多種體外培養(yǎng)細(xì)胞上清中SPDL1表達(dá)的水平和特性，闡明SPDL1的產(chǎn)生機(jī)制，探討SPDL1在腫瘤患者外周異常表達(dá)的意義及其對(duì)PD1PDL1途徑的調(diào)節(jié)作用。方法利用自主研制的SPDL1ELISA試劑盒檢測(cè)分析健康人外周血中SPDL1的表達(dá)水平；流式細(xì)胞術(shù)和ELISA分析人MODCS在體外誘導(dǎo)分化成熟過(guò)程中膜型PDL1MPDL1和可溶性PDL1SPDL1的表達(dá)特性；ELISA法檢測(cè)分析多種MPDL1和MPDLI細(xì)胞株產(chǎn)生SPDL1的水平；應(yīng)用免疫沉淀和WESTERNBLOT技術(shù)鑒定SPDL1蛋白的分子量；在高表達(dá)SPDL1的L929PDL1和MODCS細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入金屬蛋白酶抑制劑MMPI，于不同時(shí)間分析SPDL1的表達(dá)量；通過(guò)與PD1IG融合蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)分析SPDL1的生物學(xué)活性；應(yīng)用CCK8摻入法體外研究SPDL1對(duì)T細(xì)胞增殖和活化的抑制作用；利用SPDL1ELISA分析該因子在肺癌患者外周血中的表達(dá)水平，將獲得的結(jié)果用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件與各項(xiàng)臨床指標(biāo)作相關(guān)性分析。結(jié)論人外周血中存在的功能性SPDL1能促進(jìn)PD1PDL1負(fù)性信號(hào)，該因子參與了腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，這為研究PD1PDL1靶向免疫治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有重要的理論研究和潛在的應(yīng)用價(jià)值。相關(guān)，成熟MODCS產(chǎn)生高水平SPDL1；SPDL1主要由MPDL1細(xì)胞經(jīng)金屬蛋白酶MMPS剪切MPDL1產(chǎn)生；PD1SPDL1作用后能顯著抑制T細(xì)胞的增殖和活化；肺癌患者外周異常高表達(dá)SPDL1，其表達(dá)水平與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

簡(jiǎn)介：第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文甲狀腺癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影像學(xué)評(píng)估和相關(guān)分子生物學(xué)研究姓名張春旭申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師王強(qiáng)20050401第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文甲狀豫頸漠巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影像學(xué)評(píng)估和相關(guān)分子生耪學(xué)研究中文摘要目的1研究甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CT特點(diǎn)及其在甲狀腺癌的診斷和手術(shù)方式的選擇方面的應(yīng)用價(jià)值；2檢測(cè)CMET蛋白在有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌和無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌，甲狀腺濾泡狀癌及良性甲狀腺組織中的表達(dá)，探討其和甲狀腺癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的關(guān)系和臨床應(yīng)用意義。方法1回顧性分析經(jīng)手術(shù)及病理診斷的50例甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CT表現(xiàn)；2采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)了有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀腺癌62例，無(wú)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀腺癌50例，甲狀腺濾泡狀腺癌10例，良性甲狀腺組織30例中的C一煳蛋白的表達(dá)。結(jié)果150例中，1IM區(qū)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，Ⅳ區(qū)19例，V區(qū)1例，V19例。43例甲狀腺癌中39例邊緣規(guī)則。32例乳頭狀癌中，3L例淋巴結(jié)明顯強(qiáng)化密度與正常甲狀腺相似，LO例有囊性變，其中8例淋巴結(jié)囊內(nèi)有明顯強(qiáng)化的乳頭狀結(jié)節(jié)，9例有細(xì)顆粒狀鈣化。11例濾泡癌、髓樣癌、未分化癌中，LO例淋巴結(jié)明顯強(qiáng)化，10例與甲狀腺原發(fā)或復(fù)發(fā)腫瘤密度一致，密度均勻或不均勻2有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺乳頭狀癌中的CMET表達(dá)明顯高于其它三組P0001。四組兩兩比較結(jié)果如下有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳頭狀癌組PO001，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳頭狀癌和濾泡狀癌PO001，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳頭狀癌和良性甲狀腺PO001，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳頭狀癌和濾泡狀癌P0002，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳頭狀癌和良性甲狀腺P0001。濾泡狀癌和良性甲狀腺組織PO口酷無(wú)明顯差異。結(jié)論1甲狀腺癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)好發(fā)部位為頸靜脈鏈周圍、氣管食管溝淋巴結(jié)明顯強(qiáng)化、與正常甲狀腺密度一致、囊性交、囊壁內(nèi)明顯強(qiáng)化的乳頭狀結(jié)節(jié)及細(xì)顆粒狀鈣化為甲狀腺乳頭狀癌的特征性改變淋巴結(jié)明顯強(qiáng)化、與甲狀腺腫瘤密度一致為濾泡癌、髓樣癌、末分化癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的特點(diǎn)。它有助于甲狀腺癌的術(shù)前診斷，和選擇甲狀腺癌的手術(shù)方式2CMET的表達(dá)是甲狀腺乳頭狀癌是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)因子，是腫瘤的囊外擴(kuò)展和直接侵犯的標(biāo)記。它對(duì)甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的術(shù)前評(píng)估，乃至決定手術(shù)方式有一定指導(dǎo)意義。關(guān)鍵詞甲狀腺癌，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，CT，C一尬T，甲狀腺乳頭狀癌，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

簡(jiǎn)介：南開(kāi)大學(xué)碩士學(xué)位論文原癌蛋白LM02與乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究及其分子生物學(xué)機(jī)制初探姓名李慧慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生理學(xué)指導(dǎo)教師朱天慧201205中文摘要胞遷移能力方面可能具有重要作用，且其發(fā)揮作用的機(jī)制可能異于作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的方式，而主要通過(guò)定位于胞漿中的LM02，以某種未知的機(jī)制發(fā)揮作用。為尋找其胞漿的作用靶點(diǎn)，我們以LM02為誘餌蛋白進(jìn)行了酵母雙雜交篩選，從結(jié)果來(lái)看，我們發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與細(xì)胞粘附、運(yùn)動(dòng)相關(guān)的LM02潛在結(jié)合蛋白，包括偽足形成過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白ARP3，GAPUNCTIONPROTEIN以及受體酪氨酸激酶NTRK2等，這些結(jié)果也進(jìn)一步提示我們LM02參與了細(xì)胞粘附與遷移的調(diào)控過(guò)程。另外也篩選出了和LM02發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能相關(guān)的蛋白SAPL8，為L(zhǎng)M02轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能的研究提供了新的線索。關(guān)鍵詞原癌蛋白LM02；乳腺癌；酵母雙雜交II