簡介：肝癌衍生生長因子HDGFHEPATOMADERIVEDGROWTHFACT最初是從無血清培養(yǎng)人類肝癌細(xì)胞株HUH7中純化得到的高肝素親和性生長因子，具有促成纖維細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，血管平滑肌細(xì)胞和一些肝癌細(xì)胞等多種細(xì)胞生長的功能。其家族成員包括HDGF和其相關(guān)蛋白HRPS以及LEDGF，其共同的結(jié)構(gòu)特征是N端有一高度保守的HATH區(qū)，N端無類似信號肽的疏水區(qū)，具有二分的NLS。FFRP2基因是最新發(fā)現(xiàn)的HDGF相關(guān)蛋白家族的一個重要成員，定位于19P133區(qū)帶，由12個外顯子組成，其CDNA全長2344BP，編碼671個氨基酸。HRP2與HDGF的同源性為127％。其N端也有一個高度保守的HATHPWWP結(jié)構(gòu)域。HDGF家族的HATH區(qū)同源性很高，高同源性提示HATH是維持HDGF家族分子功能的重要功能域。HATH區(qū)也有類似的核定位信號。業(yè)已證實(shí)，轉(zhuǎn)錄協(xié)同因子P52／P75中N端也有和HDGF的HATH同源度達(dá)71％的區(qū)域。P52／P75通過介導(dǎo)上游特異序列激活子和轉(zhuǎn)錄復(fù)合物結(jié)合從而影響轉(zhuǎn)錄。因此推測HATH區(qū)也有部分定位到細(xì)胞核的作用。此外，HATH區(qū)可能與肝素的結(jié)合有關(guān)?，F(xiàn)有研究表明，突變或缺失HATH區(qū)的外源性HDGF蛋白不能進(jìn)入細(xì)胞。這提示HATH區(qū)可能在HDGF家族靶向到細(xì)胞中發(fā)揮重要作用。HEPATOMADERIVEDGROWTHFACTRELATEDPROTEINIIHRP2是HDGFS家族一個重要成員，其N端也有一個HATH結(jié)構(gòu)域。本研究通過體外表達(dá)HATHPWWP融合蛋白，再過分子篩時發(fā)現(xiàn)有雙峰的特性，經(jīng)分析顯示分子量約為單體和二聚體，由此提示該分子有單體和二聚體兩種形式。繼而非變性膠實(shí)驗(yàn)也證實(shí)這一點(diǎn)。為排除融合蛋白GST本身形成二聚體，采用全長HRP2／MYC和HRP2A／MYCHATH，B／MYC中斷，C／MYC片斷尾巴與GSTHATHPWWP作PULLDOWN分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明人HRP2的HATHPWWP結(jié)構(gòu)域能形成二聚。正如P53等很多蛋白必須形成多聚體結(jié)構(gòu)才有活性，HRP2可能通過HATH結(jié)構(gòu)域形成二聚體產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)活性，但確切機(jī)制及相應(yīng)功能還有待進(jìn)一步的研究。此外我們還建立了體內(nèi)小泛素化樣修飾SUMO系統(tǒng)。細(xì)胞生命活動的調(diào)控在分子水平表現(xiàn)為蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)的相互作用協(xié)調(diào)性。此協(xié)調(diào)性可通過可逆性蛋白質(zhì)共價修飾來進(jìn)行。SUMOSMAILUBIQUITIN1IKEMODIFIER是近年來發(fā)現(xiàn)的在結(jié)構(gòu)上類似于泛素的一類小分子蛋白質(zhì)修飾物，SUMO通過與靶蛋白共價結(jié)合修飾廣泛參與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄、核內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)與定位、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和維持基因組穩(wěn)定等功能。目前己發(fā)現(xiàn)有4種SUMO家族蛋白SUMO1，2，3SUMO4和至少50種SUMO修飾的底物被鑒定。SUMO的研究涉及到多種重要的功能包括信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，DNA損傷修復(fù)和染色體分離。其中蛋白激酶的SUMO化修飾對其正確的細(xì)胞內(nèi)定位及功能是至關(guān)重要的。我們通過SUMOPLOT分析軟件對實(shí)驗(yàn)室40余條分子進(jìn)行SUMO位點(diǎn)分析，篩選分值比較高的蛋白分子，進(jìn)一步通過體內(nèi)SUMO化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。涉及知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)，本文僅出示CK2激酶的SUMO化的部分?jǐn)?shù)據(jù)。通過體內(nèi)SUMO化試驗(yàn)證實(shí)CK2能被SUMO化修飾，且PIASL和PIAS3能加強(qiáng)CK2的SUMO化，提示它們可能是CK2的E2。

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文乙酰肝素酶（HPSE）的蛋白表達(dá)與肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)研究姓名周銀杰申請學(xué)位級別碩士專業(yè)胸外科學(xué)指導(dǎo)教師田輝20080510原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名魚堅(jiān)二日期鯊墨■關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名2主垃絲導(dǎo)師簽名日期坦重豎}

簡介：研究背景和目的隨著生活水平的提高，糖尿病發(fā)病率迅速增高，目前世界糖尿病患者大約1億7千萬人，其并發(fā)癥在全世界范圍內(nèi)急劇增加。在糖尿病各種慢性并發(fā)癥中，糖尿病腎病DIABETICNEPHROPATHY，DN是最主要的血管并發(fā)癥，不僅發(fā)病率高，且最終發(fā)展為終末期。腎衰而致死，死亡率亦高。DN已成為發(fā)達(dá)國家終末期腎衰的首位病因，在我國為終末期腎衰第二大病因。據(jù)美國腎臟病資料系統(tǒng)USRDS的統(tǒng)計(jì)顯示，超過30％的終末期腎功能衰竭為DN所致。DN嚴(yán)重威脅人類的生命和健康，已成為世界關(guān)注的重要問題。DN基本病理特征包括系膜基質(zhì)合成增多，腎小球基底膜增厚，從而引起腎小球硬化及腎小管間質(zhì)纖維化。生長因子和細(xì)胞因子的過度表達(dá)如轉(zhuǎn)化生長因子Β1TRANSFMINGGROWTHFACTΒ1TTGFΒ1，結(jié)締組織生長因子CONNECTIVETISSUEGROWTHFACT，CTGF，生長激素，胰島素樣生長因子和血管內(nèi)皮生長因子在DN發(fā)生和進(jìn)展中起重要作用。目前認(rèn)為，TGFΒ1是己知的在DN中致硬化作用最強(qiáng)的細(xì)胞因子。腎臟多種實(shí)質(zhì)細(xì)胞，尤其是系膜細(xì)胞合成分泌TGFΒ1，并擁有其特異性受體。TGFΒ1有自我誘生作用，即在損傷部位釋放的TGFΒ1可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生更多的TGFΒ1從而在局部放大了其生物學(xué)作用。TGFΒ1可上調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUCOSETRANSPTERGLUT1，引起細(xì)胞內(nèi)糖攝入增加和右旋D葡萄糖增加；增加細(xì)胞外基質(zhì)蛋白合成，如膠原Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、纖連蛋白、層連蛋白等，增強(qiáng)細(xì)胞表面細(xì)胞外基質(zhì)EXTRACELLULARMATRIXECM受體整合素的表達(dá)，使細(xì)胞與基質(zhì)黏附增強(qiáng)，促使ECM在腎小球的沉積，促進(jìn)系膜擴(kuò)張，基底膜增厚；足細(xì)胞凋亡、分離，誘發(fā)基底膜剝脫；刺激足細(xì)胞分泌血管內(nèi)皮生長因子，并抑制ECM降解酶的合成與活性，使ECM降解減少，從而促使腎小球硬化。阻斷TGFΒ1活性能抑制ECM的增加和減輕腎臟纖維化。但由于TGFΒ1同時具有抗免疫、抗增生效應(yīng)，通過基因敲除的方法長期完全阻斷TGFΒ1的作用，動物不能生存。因而人們不得不繼續(xù)探尋其更加特異的作用途徑。CTGF在DN發(fā)病過程中作為TGFΒ1的下游調(diào)節(jié)因子，介導(dǎo)TGFΒ1的上述作用。體外實(shí)驗(yàn)顯示，CTGF能誘導(dǎo)ECM的合成增加，并且在高糖、機(jī)械張力、非酶糖基化終產(chǎn)物ADVANCEDGLYCATIONENDPRODUCTSAGES和TGFΒ1下，CTGF在腎臟細(xì)胞表達(dá)明顯增加。CTGF可以和胰島素樣生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、TGFΒ1和骨形態(tài)蛋白BONEMPHOGEICPROTEINSBMPS相互作用，并影響上述因子的信號傳導(dǎo)。已有專家提出CTGF可作為DN治療的新靶點(diǎn)。AGES及其受體在DN的發(fā)病及進(jìn)展中有很重要的作用。AGES在半衰期長的蛋白質(zhì)膠原蛋白、晶體蛋白、彈性蛋白等及細(xì)胞壁上蓄積，使血管壁增厚，彈性降低。當(dāng)腎小球基底膜增厚時，即使有效糾正高血糖，已被糖化的蛋白質(zhì)也不能恢復(fù)正常。此外，糖化的蛋白質(zhì)與基膜中重要的陰離子蛋白聚糖成分硫酸乙酰肝素的親和力降低，清除增加，一方面損傷基膜的電荷屏障，同時喪失抑制基膜及系膜增生的作用，從而導(dǎo)致基膜和系膜增生。AGES通過兩種方式發(fā)揮作用受體依賴性信息交聯(lián)通路和非受體依賴性通路對腎臟造成損害。AGES與非酶糖基化終產(chǎn)物受體RECEPTFADVANCEDGLYCATIONENDPRODUCT，RAGE結(jié)合，可激活第二信號系統(tǒng)，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子包括TGFA、血小板源細(xì)胞因子、白介素1等，對腎小球及腎小管間質(zhì)造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷。目前防治DN的措施包括有效控制血糖，控制系統(tǒng)性高血壓，抑制腎素血管緊張素系統(tǒng)RAS，控制血脂障礙等。雖然這些措施可以減緩蛋白尿的增加和腎功能減退，減少死亡率，DN仍然是一個巨大的臨床課題，迫切需要更有效的治療措施。葡萄子原花青素GRAPESEEDPROANTHOCYANIDINEXTRACTSGSPE是一類在植物界廣泛存在的具有抗氧化作用的多酚化合物，是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的自由基清除劑，具有非常強(qiáng)的體內(nèi)活性。其抗自由基氧化能力是維生素E的50倍、維生素C的20倍。近年來國外研究發(fā)現(xiàn)GSPE有心血管保護(hù)作用，它的自由基清除能力可抗心肌缺血再灌注損傷，通過抑制低密度脂蛋白的氧化作用而抗動脈粥樣硬化。針對糖尿病，GSPE可抑制糖尿病大鼠體內(nèi)非酶糖基化反應(yīng)。國內(nèi)外對DN的防治方法多種多樣，但目前為止尚無GSPE預(yù)防及治療DN的深入研究。本研究擬以糖尿病大鼠為動物模型，從腎臟病理水平，細(xì)胞，分子生物學(xué)水平包括CTGF，TGFΒ1，BMP7，AGES，RAGE，NEPHRINPODOCIN研究GSPE對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用GSPE預(yù)防及治療DN提供更深入的理論依據(jù)，為減少DN的發(fā)生，減緩DN的發(fā)展開辟一種嶄新的治療方法。材料和方法雄性WISTAR大鼠，禁食12小時，尾靜脈注射STZ55MGKG即55MLKG，72H后測定血糖，以空腹血糖水平≥167MMOLL300MGKG為糖尿病模型成功的標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)分組和處理1正常對照組C取健康雄性WISTAR大鼠12只，生理鹽水灌胃。2GSPEE常治療組CT取健康雄性WISTAR大鼠12只，GSPE250MGKG1D1灌胃。3模型組DM糖尿病模型大鼠15只，生理鹽水灌胃。4GSPE小劑量治療組T1糖尿病模型大鼠15只，GSPE250MGKG1D1灌胃。5GSPE大劑量治療組T2糖尿病模型大鼠15只，GSPE500MGKG111灌胃。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束，取血，留尿，取腎組織，檢測血白蛋白ALBUMINALB，肌酐SERUMCREATININESCR，AGES，HDL，LDL，血尿酸URICACIDUA，血糖FASTINGPLASMAGLUCOSE，F(xiàn)PG，糖化血紅蛋白HEMOGLOBINALC，HBALC，總膽固醇CHOLESTEROL，CH，甘油三酯TRIGLYCERIDE，TG，尿查24H尿蛋白總量。腎組織病理檢查包括光鏡PAS染色、MASSON染色、電鏡觀察系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、足細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化及進(jìn)行TGFΒ1，CTGF，BMP7，RAGE，NEPHRIN，PODOCIN免疫組化染色。采用RTPCR技術(shù)檢測TGFΒ1，CTGF，BMP7，RAGE，NEPHRINPODOCINMRNA，WESTERN印跡法檢測其蛋白表達(dá)。比較各組間差異。結(jié)果DM組FPG、HBA1C、血清AGES、血壓、24H尿蛋白定量、內(nèi)生肌酐清除率CCR、腎重體重水平均顯著高于C組P＜001；DM組ECM蓄積增多，固有細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)受損；DM組腎組織中TGFΒ1，CTGF，RAGEMRNA及蛋白表達(dá)水平增加，與C組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005或P＜001；DM組NEPHRIN，BMP7MRNA及蛋白水平較C組顯著降低P＜005。治療組T1組和T2組血清AGES、血壓、24H尿蛋白定量、CCR、腎重體重水平較DM組顯著降低P＜005或P＜001，且ECM蓄積減少，固有細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)受損情況減輕；治療組T1組和T2組與DM組相比，腎組織中NEPHRIN，BMP7MRNA及蛋白表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005或P＜001，TGFΒ1、CTGF、RAGEMRNA及蛋白顯著降低P＜005或P＜001。T1組與T2組之間相比，CCR、腎重體重和CTGFMRNA水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005或P＜001。結(jié)論應(yīng)用GSPE干預(yù)DN大鼠，證實(shí)GSPE能夠顯著降低糖尿病大鼠蛋白尿、血壓，改善腎小球高濾過狀態(tài)，減輕腎臟ECM蓄積及固有細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損害，對DN具有明確的治療作用。其作用機(jī)制與降低血清AGES、下調(diào)RAGE、TGFΒ1、CTGF表達(dá)及上調(diào)BWP7表達(dá)有關(guān)；對足細(xì)胞有明確的保護(hù)作用，可上調(diào)足細(xì)胞跨膜蛋白NEPHRIN的表達(dá)從而改善足突結(jié)構(gòu)減輕蛋白尿。本研究為DN的治療提供了新思路，為臨床應(yīng)用GSPE預(yù)防及治療DN提供更深入的理論依據(jù)，為減少DN的發(fā)生，減緩DN的發(fā)展開辟一種嶄新的治療方法。

簡介：安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文合肥市部分醫(yī)院產(chǎn)SHV型Β內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性及其分子生物學(xué)特征姓名程君申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)（傳染病）指導(dǎo)教師李家斌孫秋林20070501學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名昂晷日期呷，，稆學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留，使用學(xué)位論文的規(guī)定。學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國家主管部門或指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)行學(xué)校圖書管被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名刁翻日期叼占瑪導(dǎo)師簽名黽齜渺螺’魂。

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位畢業(yè)論文上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目CEACAM6在胃癌中生物學(xué)功能和分子機(jī)制的研究研宄生姓名學(xué)號指導(dǎo)教師導(dǎo)師組成員學(xué)科（專業(yè)）張運(yùn)強(qiáng)1107209188燕敏教授朱正綱教授劉炳亞教授楊秋蒙副教授外科學(xué)（普通外科）論文提交日期2013年4月本課題受以下基金資助國家自然科學(xué)基金81172324，教育部博士點(diǎn)基金（博導(dǎo)類）（20110073110071，國家支撐計(jì)劃（2011BA203191，上海市教委重點(diǎn)12ZZ102和12ZZ105，上海市市科委基礎(chǔ)重點(diǎn)（10JC1411100上海交通大學(xué)碩士學(xué)位畢業(yè)論文上海交通大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研宄工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研宄做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名日期年月日

簡介：缺血性心腦血管疾病具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率的特點(diǎn)，嚴(yán)重危害人類的健康。即便重癥醫(yī)學(xué)和介入治療實(shí)現(xiàn)了盡早恢復(fù)血流供應(yīng)，但恢復(fù)血流灌注的同時不可避免地引發(fā)再灌注損傷，其致殘率與病死率依然很高。缺血再灌注損傷ISCHEMIAREPERFUSIONINJURY，IR的機(jī)制涉及細(xì)胞內(nèi)鈣超載、線粒體功能紊亂、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、凋亡、自噬等動態(tài)、快速發(fā)展的級聯(lián)反應(yīng)。如何在恢復(fù)血流供應(yīng)的同時，又能減輕再灌注損傷是缺血性心腦血管疾病防治的重要課題。烏司他丁ULINASTATIN，UTI是從健康成年男性尿液中提取的糖蛋白水解酶抑制劑，已廣泛應(yīng)用于包括全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥、休克、彌散性血管內(nèi)凝血、重癥急性胰腺炎、心肺復(fù)蘇術(shù)后、移植及缺血再灌注損傷等多個臨床領(lǐng)域。有較多證據(jù)表明其具有清除自由基及抑制炎性介質(zhì)釋放等作用，但其具體的作用和分子生物學(xué)機(jī)制尚不明確，且其對缺血再灌注后大腦學(xué)習(xí)記憶功能的作用也不清楚。近年來，國內(nèi)外對缺血后處理的研究日漸增多，提出了藥物后處理的概念，其在操作上具有更好的可控性，更加可行和方便，在再灌注階段經(jīng)皮冠狀動脈介入治療使得將藥物靶向運(yùn)輸?shù)焦诿}內(nèi)皮和心肌組織成為可能。給藥方式的日趨靶向化，使得患者將從再灌注治療中進(jìn)一步獲益。本研究旨在研究烏司他丁對心、腦缺血再灌注損傷的影響及其具體分子作用機(jī)制，對再灌注損傷后學(xué)習(xí)記憶功能的影響；比較烏司他丁藥物后處理在心肌再灌注治療中經(jīng)冠脈途徑給藥是否優(yōu)于外周靜脈給藥，探討心肌再灌注治療中更適宜的給藥途徑。目的探討烏司他丁對心、腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法第一部分烏司他丁對腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組SHAMGROUP、缺血再灌注組ISCHEMIAREPERFUSIONGROUP，IRGROUP、烏司他丁高劑量組40000UKG、烏司他丁中劑量組20000UKG、烏司他丁低劑量組10000UKG。分別于缺血即刻由腹腔注射給藥。缺血2H后將線栓拔出實(shí)現(xiàn)再灌注，再灌注24H后進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)檢查。采用組織病理學(xué)法觀察海馬區(qū)形態(tài)學(xué)變化；免疫組化法檢測缺血側(cè)腦組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9MATRIXMETALLOPROTEINASE，MMP9的表達(dá)；WESTERNBLOT檢測缺血側(cè)腦組織中核轉(zhuǎn)錄因子NUCLEARTRANIONFACTΚB，NFΚB、細(xì)胞間粘附分子INTERCELLULARADHESIONMOLECULE1，ICAM1的表達(dá)；酶聯(lián)免疫檢測法ENZYMELINKEDIMMUNOADSDENTASSAY，ELISA測定血清腫瘤壞死因子ΑTUMNECROSISFACTALPHA，TNFΑ、白細(xì)胞介素10INTERLEUKIN10，IL10的含量；生物化學(xué)比色法測定腦組織勻漿中超氧化物歧化酶SUPEROXIDEDISMUTASE，SOD、脂過氧化產(chǎn)物丙二醛MALONDIALDEHYDE，MDA的水平。另取大鼠進(jìn)行MRIS水迷宮測試。第二部分烏司他丁對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)扎左冠狀動脈前降支30分鐘，再灌注3小時制備大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組，心肌缺血再灌注組IRGROUP，缺血后處理組ISCHEMIAPOSTCONDITIONINGGROUP，IPOSTCGROUP，烏司他丁冠脈途徑給藥組10000UKG，烏司他丁尾靜脈途徑給藥組10000UKG。采用硝基四氮唑藍(lán)NITROBLUETETRAZOLIUM，NBT染色法檢測心肌梗死面積；HE染色觀察心肌形態(tài)學(xué)變化；心電圖記錄組間多時間點(diǎn)對比變化；酶聯(lián)免疫檢測法測定血清TNFΑ、IL10的含量；生物化學(xué)比色法測定血清SOD、MDA及一氧化氮NITRICOXIDE，NO的水平。結(jié)果第一部分烏司他丁對腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究大鼠局灶性腦缺血2H再灌注24H后，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損體征，主要表現(xiàn)為提尾懸空時，右前肢屈曲、內(nèi)收緊貼胸壁，肩內(nèi)旋，行走時向偏癱側(cè)旋轉(zhuǎn)，同側(cè)肌張力下降，表明模型制作成功；HE染色顯示缺血側(cè)腦組織海馬CA1區(qū)有明顯的缺血及壞死表現(xiàn)；烏司他丁各劑量組均可明顯改善腦缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能障礙，減輕海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞損傷程度。WESTERNBLOT結(jié)果顯示，缺血再灌注組大鼠缺血側(cè)腦組織中ICAM1及NFΚBP65蛋白表達(dá)水平較假手術(shù)組明顯升高；烏司他丁各劑量可不同程度地降低缺血側(cè)腦組織中ICAM1和NFΚBP65的表達(dá)。由酶聯(lián)免疫檢測結(jié)果可見，腦缺血再灌注損傷還可引起TNFA等致炎因子及IL10抗炎因子水平的升高；烏司他丁各劑量組可明顯降低由缺血再灌注所引起的TNFΑ表達(dá)水平的升高，且升高抗炎因子IL10的水平。生化檢測指標(biāo)結(jié)果顯示，大鼠腦缺血2H再灌注24H后，腦組織勻漿中的MDA含量明顯升高，SOD活性明顯降低。烏司他丁各劑量組可顯著降低腦組織勻漿中的MDA含量，升高SOD的活性。MRIS水迷宮測試結(jié)果顯示，烏司他丁各劑量組與模型組比較可使逃避潛伏期縮短，平臺象限距離百分比增加，穿越平臺次數(shù)增加。第二部分烏司他丁對心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究心電圖結(jié)果顯示模型組ST段、T波明顯升高、病理性Q波的出現(xiàn)明顯增多，與假手術(shù)組相比具有顯著性差異P結(jié)論烏司他丁可改善大鼠腦缺血再灌注損傷后的神經(jīng)功能缺損，減輕海馬CA1區(qū)損傷程度，增強(qiáng)腦缺血再灌注損傷大鼠認(rèn)知記憶能力，對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有良好的保護(hù)作用。烏司他丁可通過減輕大鼠缺血再灌注后腦組織中性粒細(xì)胞浸潤，降低粘附分子ICAM1和促炎因子MMP9、TNFΑ的水平，升高抗炎因子IL10的水平，降低NFΚB的表達(dá)水平及降低MDA的含量，升高抗氧化介質(zhì)SOD的含量來減輕缺血再灌注后腦組織的損傷，發(fā)揮其保護(hù)作用。烏司他丁藥物后處理能產(chǎn)生與機(jī)械性缺血后處理相似的保護(hù)效應(yīng)；烏司他丁可能是通過降低NO的含量，抑制腫瘤壞死因子表達(dá)，升高抗炎細(xì)胞因子IL10的水平，及清除過氧化產(chǎn)物MDA，升高抗氧化介質(zhì)SOD和NO的含量從而達(dá)到心肌細(xì)胞保護(hù)性效果；烏司他丁冠狀動脈給藥抗氧化應(yīng)激及降低腫瘤壞死因子的效果優(yōu)于經(jīng)尾靜脈給藥。烏司他丁對心、腦缺血再灌注損傷具有較全面的多環(huán)節(jié)保護(hù)作用。

簡介：本研究分為三部分第一部分、應(yīng)用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)研究骨髓增生異常綜合征腫瘤相關(guān)標(biāo)志物骨髓增生異常綜合征MDS是一類異質(zhì)性較高的疾病。部分患者可在發(fā)病后1年內(nèi)即轉(zhuǎn)變成急性白血病AML，這里稱之為TMDSTRANSFMEDMDS；而另一些患者則可長期保持穩(wěn)定而不進(jìn)展為AML，稱作SMDSSTABLEMDS。KUNJU等人2009對MDS骨髓CD34細(xì)胞的CDNA芯片研究中顯示，這兩組預(yù)后不同的MDS患者具有不同的基因表達(dá)譜GEP特點(diǎn)。而作為一種高通量的蛋白質(zhì)研究技術(shù)，蛋白質(zhì)芯片在研究腫瘤標(biāo)志物方面已經(jīng)有很多成功的應(yīng)用。在本研究中，我們首次應(yīng)用人蛋白質(zhì)芯片對MDS患者血漿中相對于正常對照組異常表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行較為全面的檢測。我們檢測了64個MDS樣本，其中包括28名TMDS患者和36名SMDS患者，還檢測了13個轉(zhuǎn)白AMLPOSTMDS樣本，正常對照樣本為34個，共111個血漿樣本。所有樣本均通過與包含有9483個人類蛋白質(zhì)的芯片雜交而進(jìn)行檢測。所得的數(shù)據(jù)通過應(yīng)用PROCAT算法和QUANTILE校正進(jìn)行芯片內(nèi)部和芯片之間的校正和標(biāo)準(zhǔn)化。然后再對數(shù)據(jù)進(jìn)行非參數(shù)假設(shè)檢驗(yàn)，得出了相對于正常對照組有顯著差異的蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)組P這些蛋白質(zhì)參與體內(nèi)許多生物過程，如細(xì)胞凋亡、細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等等。一些高表達(dá)的蛋白質(zhì)中有一部分與CDNA芯片的結(jié)果一致（如AKT3和FGF16）。而且，這些蛋白標(biāo)志物與IPSS評分也顯示出很高的相關(guān)性。我們的實(shí)踐表明蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是MDS腫瘤血漿標(biāo)志物研究的有力工具，在研究中我們篩選出MDS患者血漿中一些潛在的腫瘤標(biāo)志物及疾病進(jìn)展相關(guān)標(biāo)志物。這對于促進(jìn)MDS患者的臨床診斷和預(yù)后判斷具有積極地意義。第二部分、單純SQ伴5Q異常MDS患者RPS14表達(dá)水平及其與造血細(xì)胞凋亡關(guān)系目的探討SQ核型異常的骨髓增生異常綜合征MDS患者核糖體蛋白RPS14的表達(dá)水平及與骨髓造血細(xì)胞凋亡的關(guān)系。方法采用實(shí)時定量PCR方法檢測18例單純5Q異常（7例）或SQ伴有其他染色體異常（11例）MDS患者RPS14、MDM2、P53的MRNA表達(dá)水平，同時采用堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶APAAP方法檢測患者骨髓有核細(xì)胞P53蛋白表達(dá)，并同步采用TDT介導(dǎo)的DUTP缺口末端（熒光）標(biāo)記（TUNEL）法檢測骨髓細(xì)胞凋亡，10例正常人作為對照。結(jié)果1518例833％伴有5Q異?；颊吖撬杓?xì)胞RPS14表達(dá)降低，其中67例單純5Q異?；颊弑磉_(dá)降低，911例5Q伴其他核型異常患者表達(dá)降低；RPS14表達(dá)與MDM2、P53表達(dá)水平均呈正相關(guān)，而P53表達(dá)與骨髓細(xì)胞凋亡呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論SQ5Q伴其他核型異?；颊逺PS14表達(dá)下降，并可能通過MDM2降低P53表達(dá)導(dǎo)致骨髓造血細(xì)胞過度凋亡。第三部分、IGFIR作為骨髓增生異常綜合征骨髓克隆細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物的研究目的胰島素樣生長因子I型受體IGFIR具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，抑制細(xì)胞凋亡的功能，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們既往的研究發(fā)現(xiàn)IGFIR在MDS骨髓有核細(xì)胞表達(dá)明顯增高，在高危組MDS的表達(dá)增高更為明顯。為了進(jìn)一步研究IGFIR在MDS骨髓造血干細(xì)胞中的表達(dá)狀況及其與MDS預(yù)后的關(guān)系；以及探索IGFIR對MDS骨髓克隆細(xì)胞的標(biāo)志性作用，我們設(shè)計(jì)了本課題。方法1在擴(kuò)大病例的同時通過流式細(xì)胞術(shù)FCM檢測IGFIR在MDS患者骨髓CD34細(xì)胞中的表達(dá)狀況；2應(yīng)用免疫磁珠法對MDS患者骨髓單個核細(xì)胞進(jìn)行紅系分選，對分選出的不含紅細(xì)胞的單個核細(xì)胞進(jìn)行FISH檢測從而觀察去紅后單個核細(xì)胞IGFIR表達(dá)與克隆細(xì)胞的相關(guān)性；3應(yīng)用FCM進(jìn)行IGFIR陽性細(xì)胞分選，通過對陽性細(xì)胞的FISH檢測進(jìn)行克隆細(xì)胞純化實(shí)驗(yàn)，從而進(jìn)一步證實(shí)IGFIR在克隆細(xì)胞中的特異性表達(dá)及其對克隆細(xì)胞的純化效率。結(jié)果1IGFIR在MDS患者骨髓CD34細(xì)胞中高表達(dá)，其中IPSS評分低危／中危1IPSS≤1組和中危2高危組IPSS≥15患者的IGFIR表達(dá)具有顯著差異P005，P00128，提示IGFIR在MDS疾病預(yù)后判斷中的意義；2去紅處理后的MDS骨髓單個核細(xì)胞惡性克隆比例顯著增高，表明去除紅系干擾后IGFIR表達(dá)與克隆細(xì)胞相關(guān)性更高；3IGFIR分選后的骨髓克隆細(xì)胞百分比顯著升高，表明IGFIR對骨髓克隆細(xì)胞具有顯著的富集作用，提示IGFIR可作為MDS克隆細(xì)胞潛在的純化標(biāo)志。

簡介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文三種蠕形螨組織化學(xué)、酶組織化學(xué)及山羊蠕形螨酶學(xué)、分子生物學(xué)研究姓名馮玉新申請學(xué)位級別碩士專業(yè)病原生物學(xué)指導(dǎo)教師袁方曙20090515山東大學(xué)碩士學(xué)位論文白酶活性。用改進(jìn)法提取山羊蠕形螨的基因組DNA，以瓊脂糖電泳及紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測。結(jié)果經(jīng)過組織化學(xué)染色后，三種蠕形螨內(nèi)部結(jié)構(gòu)、糖原、酯類及DNA著色。經(jīng)過酶組織化學(xué)染色，三種蠕形螨體內(nèi)酸性磷酸酶、脂肪酶所在部位被染成棕黑色，堿性磷酸酶所在部位被染成黑色，酯酶所在部位被染成紫紅色。ASPERENE法測酯酶活性，酶源組吸光度為0．205±0．027，陰性對照組吸光度為O．090±0．008，兩組間有顯著差異尺0．01。以明膠平板法測定山羊蠕形螨蛋白酶活性，考馬斯亮藍(lán)R250染色后酶源所在孔周圍形成透明環(huán)，說明酶源中含有能消化明膠的蛋白酶。用改進(jìn)的方法，成功用5000條山羊蠕形螨提取出基因組DNA，瓊脂糖電泳顯示為一高分子量DNA條帶，紫外分光光度計(jì)檢測OD260／OD280大于1．6。結(jié)論自創(chuàng)的蠕形螨整體染色法解決了蠕形螨整體染色顯示內(nèi)部結(jié)構(gòu)的問題。發(fā)現(xiàn)三種蠕形螨體內(nèi)含有大量的糖原、酯類和DNA，具有酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、酯酶和脂肪酶活性。山羊蠕形螨體內(nèi)酯酶及蛋白酶活性較高。這支持蠕形螨以脂類和角蛋白為食的觀點(diǎn)，它可能是一種脂螨。同時酶可能是蠕形螨致病的化學(xué)物質(zhì)。成功提取出高質(zhì)量的山羊蠕形螨基因組DNA。以上創(chuàng)新性工作為今后從染色法、酶學(xué)、分子生物學(xué)角度研究蠕形螨的結(jié)構(gòu)、生理、分類和致病機(jī)理鋪平道路。關(guān)鍵詞蠕形螨；組織化學(xué)；酶組織化學(xué)；酶學(xué)；基因組DNA；分子生物學(xué)2

簡介：大連醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)用APPCR進(jìn)行皮膚癬菌的分子生物學(xué)鑒定姓名孔祥明申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚病與性病學(xué)指導(dǎo)教師楊國玲200151紅色毛癬菌221709O704KB片段，須癬毛癬菌10O8507O5KB片段，紫色毛癬菌2116100908O705KB片段，斷發(fā)毛癬菌22131008O85O7O4KB片段；小孢子菌屬的4個種擴(kuò)增的主要帶型分別為犬小孢子菌232I16121008O4204KB片段，石膏小孢子菌2018080604KB片段，粉小孢子菌201308O65O5O3O15KB片段，雞禽類小孢予菌1709O8O65O_302502KB片段；絮狀表皮癬菌2018O65O6KB片段孢子絲菌0906O503KB片段白念珠菌151003KB片段。用引物OPDL8擴(kuò)增毛癬菌屬4個種擴(kuò)增的主要帶型分別為紅色毛癬菌10090604022KB片段，須癬毛癬菌O804022KB片段，紫色毛癬菌110604O35022KB片段，斷發(fā)毛癬菌20090750604022KB片段小孢子菌屬的4個種擴(kuò)增的主要帶型分別為犬小孢子菌20100907KB片段，石膏，J、孢子菌212011O7O35025KB片段，粉小孢子菌110706O4KB片段，雞禽類小孢子菌12105O，7O35025KB片段絮狀表皮癬菌201206035KB片段，孢子絲菌131050603KB片段白念珠菌0906KB片段。來自不同地區(qū)的3J株紅色毛癬菌多次APPCR擴(kuò)增除出現(xiàn)主帶相同的電泳帶型外，多數(shù)菌株間還發(fā)現(xiàn)有一定的差異。OPAALL為引物的電泳帶型為2217090704KB片段，0PDL8為引物的電泳帶型為10090604022KB片段。‘_一～／7結(jié)論1APPCR方法適合皮膚癬菌從基因分子水平上進(jìn)行鑒定、分型的研究。2OPAAL1和0PDL8引物，對皮膚癬菌的三個屬均發(fā)現(xiàn)有固定的電泳帶型及保守序列，屬間、種間差異明顯，提示該引物可用于皮膚癬菌的鑒別。3用0PAAL1和0PDL8的擴(kuò)增，不同地區(qū)的紅色毛癬菌表現(xiàn)出不同的結(jié)果，提示用該引物擴(kuò)增，可從分子水平上表現(xiàn)出紅色毛癬菌的種內(nèi)亞型，而且該方法有助于分型的研究。4雙引物OPAALL和OPDL8擴(kuò)增并未較單引物擴(kuò)增具有明顯的多態(tài)性。2

簡介：胡寶洋博卜學(xué)位論文ANZ基因表達(dá)潛及機(jī)制英文縮略詞英文縮寫ADPASEAEC英文縮略詞表全稱ADENOSINEDIPHOSPHATEASE3AMINO9ETHYLCARBAZOLEBFGFBASICFIBROBLASTGROWTHFACTOR中文名稱腺昔二磷酸酶3氨基9乙烷基咔哇堿性成纖維細(xì)胞生長因子骨髓基質(zhì)細(xì)胞牛血清白蛋白33‘二氨基苯聯(lián)胺DIL十八烷基四甲基AIL垛撥基花青高氯酸鹽E2ERESTFACSFITCGFPGOHRPMSCNGFOIRPBSPCRPEARISCRNAIROPBONEMARROWSTROMALCELLBOVINESERUMALBURMIN33DIAMENOBENZIDINE11DIOCTADECYL3333TETRAMETHYLINDOCARBOCYANINEPERCHLORATEESTRODIALESTROGENRECEPTOREXPRESSEDSEQUENCETAGFLUORESCENTACTIVATEDCELLFLUORESCEINISOTHIOCYANATEGREENFLURENCEINTPROTEINGENEONTOLOGYHORSERADISHPEROXIDASEMECENCYHMALSTEMCELLNERVEGROWTHFACTOROXYGENINDUCEDRETINOPATHYPHOSPHATEBUFFERSALINEPOLYMERASECHAINREACTIONPARAFORMALDEHYDERNAINDUCEDSILENCINGCOMPLEXRNAINTERFERENCERETINOPATHYOFPREMATURITYREVERSERANSCRIPTASEPOLYMERASECHAIN雌二醇雌激素受體表達(dá)序列標(biāo)簽熒光活化細(xì)胞分類器綠色熒光素綠色熒光蛋白基因本體學(xué)辣根過氧化物酶間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)生長因子氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變磷酸鹽緩沖液聚合酶鏈反應(yīng)多聚甲醛RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物RNA千擾早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病RTPCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)SHRNASIRNASOMVEGFREACTIONSMALLHAIRPINRNASMALLINTERFERINGRNASSELFORGANIZINGMAPVASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR小發(fā)夾樣RNA小分子千擾RNA片段自組織分類圖血管內(nèi)皮生長因子胡寶洋博】學(xué)位論文OIR攀IM表達(dá)譜及IN制摘V后的BMSC培養(yǎng)上7R3對內(nèi)皮細(xì)胞作用的變化。進(jìn)一步將轉(zhuǎn)染后的BMSC移植入O工R模型小鼠眼的玻璃體內(nèi)，研究其抗血管新生的機(jī)制。研究的主要結(jié)果有LADP酶法能使內(nèi)皮細(xì)胞著色，呈黑色或棕褐色。正常小鼠剛出生時，結(jié)合鋪片和切片觀察，發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜中暫無血管分布，但可見散在分布的ADP酶陽性細(xì)胞。此時，在視網(wǎng)膜表面可見密集的玻璃體血管網(wǎng)。之后，視網(wǎng)膜血管以自中心向周邊和自內(nèi)層向外層的規(guī)律逐漸發(fā)生。在血管從視網(wǎng)膜內(nèi)層向外層發(fā)生的過程中，約在P12，先從內(nèi)層向外發(fā)出較大的螺旋形血管，再進(jìn)一步形成外層血管網(wǎng)。至P18，視網(wǎng)膜血管發(fā)育基本成熟，而玻璃體血管則退化。2從P7開始，將C57BL6J小鼠置于75的高氧環(huán)境中飼養(yǎng)5天后，至P18可見異常新生的血管突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜進(jìn)入玻璃體，表明小鼠OIR模型制備成功。3基因芯片雜交結(jié)果顯示，1402個基因至少一個時間點(diǎn)呈差異表達(dá)?；驑渚垲?、條件聚類將基因良好的聚為四個區(qū)兩大類。SOM聚類顯示12類不同的表達(dá)差異改變模式。基因本體學(xué)GO分析顯示發(fā)育相關(guān)基因及G蛋白信號通路相關(guān)基因改變明顯。4RTPCR顯示視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞株RF6A有ERNGF及TRKA等表達(dá)。一定劑量的E2NGF均可促進(jìn)RF6A細(xì)胞的增殖及劃痕修復(fù)，且呈劑量一效應(yīng)關(guān)系。EZNGF處理的細(xì)胞有相似的凋亡率。應(yīng)用K252ANGF受體TRKA的拮抗劑既可阻斷NGF的作用，也可部分抑制E的作用。對于內(nèi)皮細(xì)胞的管腔化形成實(shí)驗(yàn)，E和NGF的作用則不一致。5免疫組化與ELISA顯示，體外培養(yǎng)的BMSC表達(dá)多種生長因子，如VEGFIGF及NGF等。BMSC的培養(yǎng)上清可促進(jìn)RF6A細(xì)胞的增殖、遷移及管腔化形成。6CMDIL可有效的標(biāo)記BMSC。將標(biāo)記的BMSC注移植入OIR小鼠的玻璃體腔內(nèi)，發(fā)現(xiàn)部分BMSC可遷移至視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層，并表達(dá)GFAP。根據(jù)視網(wǎng)膜鋪片ADP酶染色觀察及連續(xù)切片視網(wǎng)膜前內(nèi)皮細(xì)胞核計(jì)數(shù)，均顯示BMSC可抑制OIR小鼠視網(wǎng)膜的血管新生。7成功構(gòu)建大鼠VEGF的千擾質(zhì)粒PSUPERNEGFI，經(jīng)BLASTN檢索具有特異性。經(jīng)重組質(zhì)粒酶切、測序鑒定正確后，抽提超純質(zhì)粒轉(zhuǎn)染第5代左右的BMSC轉(zhuǎn)染效率為25。轉(zhuǎn)染后BMSC培養(yǎng)上清中的VEGF也較對照組下降相似比例。干擾VEGF的表達(dá)后，其上清對RF6A細(xì)胞的作用較對照減低。將轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的BMSC注入OIR模型小鼠的玻璃體腔內(nèi)，其作用也較未轉(zhuǎn)染制質(zhì)粒的BMSC有所下降。

簡介：視黃酸X受體ΑRETINOIDXREPCETSΑ，RXRΑ是核受體超家族中重要的一員，RXRΑ受體能選擇性的與配體相結(jié)合或與其他核受體形成同源二聚體或異源二聚體，調(diào)控細(xì)胞的生理效應(yīng)，并且參與了生物體生長、發(fā)育、免疫和死亡等幾乎所有的生理過程的調(diào)節(jié)，因此，它的生物學(xué)功能與疾病密切相關(guān)，例如腫瘤以及代謝綜合癥等。所以RXRΑ受體一直是研究的熱點(diǎn)。目前報(bào)道的能與RXRΑ受體結(jié)合的天然小分子有9CISRA，而人工合成的有活性配體也不多，因此，我們的研究目的是根據(jù)RXRΑ受體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)一系列化合物，篩選出能與RXRΑ受體結(jié)合的小分子化合物。本課題通過優(yōu)化RXRΑLBD蛋白提取條件，得到較高產(chǎn)量的RXRΑLBD蛋白。通過BIACE技術(shù)（BIOMOLECULARINTERACTIONANALYSIS）偶聯(lián)RXRΑLBD蛋白對實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有化合物進(jìn)行高通量篩選，篩選得到6個有結(jié)合活性的小分子化合物，并測得它們的解離平衡常數(shù)KD值。進(jìn)一步采用等溫滴定量熱法（ISOTHERMALTITRATIONCALIMETRY，ITC）測定這6個小分子化合物與RXRΑLBD蛋白的結(jié)合能力，通過實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)和優(yōu)化，最后得到WH30和WH15兩個小分子化合物的解離平衡常數(shù)KD值以及熱力學(xué)參數(shù)。它們的KD值與BIACE實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，熱力學(xué)參數(shù)表明WH30和WH15與RXRΑLBD蛋白的結(jié)合是自發(fā)進(jìn)行的放熱反應(yīng)。用AUTODOCK425軟件對篩選出的兩個小分子化合物WH30和WH15與RXRΑLBD同源二聚體（PDBID4N5G）進(jìn)行分子對接，得到自由結(jié)合能和分子對接圖，自由結(jié)合能表示化合物與RXRΑLBD同源二聚體有結(jié)合活性，分子對接圖可以直觀看到WH30和WH15結(jié)合到RXRΑLBD同源二聚體的配體結(jié)合口袋，并與氨基酸形成氫鍵。因此，本課題通過BIACE、ITC技術(shù)以及分子對接實(shí)驗(yàn)得到兩個靶向結(jié)合RXRΑLBD蛋白的小分子化合物WH30和WH15，為治療與RXRΑ受體相關(guān)疾病的藥物開發(fā)打下一定基礎(chǔ)。

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名互塹日期趁Z羔≥／／中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名互盞指導(dǎo)教師簽名弦蘊(yùn)丞日期J衛(wèi)叫中文論著摘要姜黃素對轉(zhuǎn)基因鼠卵巢癌細(xì)胞系增殖和遷移能力的影響及相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制的研究刖吾卵巢上皮癌來源于卵巢上皮細(xì)胞，目前，對其發(fā)生癌變的分子生物學(xué)機(jī)制還不是十分明確。由于其發(fā)生存在遺傳復(fù)雜性及基因突變多元性，為此，本研究應(yīng)用了一個新的細(xì)胞體系，該體系以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體，將多種確定可引起遺傳突變的一系列常見癌基因轉(zhuǎn)染到P53基因敲除的雌性成年大鼠的卵巢表面上皮細(xì)胞內(nèi)。要生成這種具有遺傳定義的卵巢上皮癌細(xì)胞系，通過將編碼人類C．MYC原癌基因，鼠K．RAS剛2D以及姒標(biāo)記的鼠十四烷?；疉KT．1癌基因轉(zhuǎn)染到由K5．TVA．P53敲除的大鼠分離出的卵巢上皮細(xì)胞內(nèi)。根據(jù)目前的研究結(jié)果已證實(shí)，單獨(dú)轉(zhuǎn)染C．MYC，KRAS或AKT基因其中的一種，并不能使P53敲除的大鼠卵巢表面上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)變，然而，轉(zhuǎn)染至少這三個癌基因中的任意兩種，可使卵巢表面上皮細(xì)胞表型發(fā)生癌變。大鼠卵巢癌細(xì)胞系的生成如下CI基因型P53．／，CMYC,KRAS，C2基因型P53／,C．MYC,ALA，C3基因型P53／,KRAS,A／A。將CI，C2和C3細(xì)胞注射于裸鼠腹腔內(nèi)，所有結(jié)果表明其形成的腹腔擴(kuò)散癌組織與女性III期卵巢癌非常相似。同時，與人卵巢癌相似的是，腫瘤很少發(fā)生肝臟或脾臟轉(zhuǎn)移，而只局限于腹腔，松散的附著于腹膜表面、腸系膜和生殖器官。組織學(xué)顯示，來自CL和C2細(xì)胞的腹腔腫瘤類似卵巢漿液性乳頭狀癌，這是女性卵巢癌最常見的類型。來自C3細(xì)胞所產(chǎn)生的腫瘤類似低分化卵巢癌。由C1，C2和C3來源的腫瘤結(jié)節(jié)分離后，進(jìn)行體外培養(yǎng)，形成TL，T2和T3腫瘤細(xì)胞系。K．RAS原癌基因是RAS基因家族成員之一，致癌譜廣泛，活化多發(fā)生于卵巢癌的早期且同組織類型有關(guān)。近年對激素受體的研究發(fā)現(xiàn)激素信號系統(tǒng)和RAS的信號通路存在相互作用，ZAEEHOS等在人卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌組織中發(fā)現(xiàn)類固醇激素可直

簡介：浙江大學(xué)博士學(xué)位論文大腸癌肝轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)和生物信息學(xué)研究姓名葛維挺申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物信息學(xué)指導(dǎo)教師鄭樹20060501N镕_士掌位戈19、NSW20、NGW21、QVALUE22、COLN／N23、C01T／T24、MET／M25、LIVN／L對樣本做校正后的秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量對基因做校正后的秩和檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量校正后的差異顯著性評價正常腸上皮組織大腸癌原發(fā)灶組織大腸癌肝轉(zhuǎn)移灶組織正常肝組織2

簡介：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文CD97SIRNA轉(zhuǎn)染對胃癌細(xì)胞株MKN45生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究姓名龔道軍申請學(xué)位級別博士專業(yè)普通外科學(xué)指導(dǎo)教師陳力20090501浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要重要作用。然而，CD97對胃癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其內(nèi)在機(jī)制仍然有待于闡明。第一章CD97SIRNA轉(zhuǎn)染對人胃癌細(xì)胞株MKN45增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響目的設(shè)計(jì)合成有效的CD97SIRNA，體外轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株，觀察CD97表達(dá)變化及其對體內(nèi)、外胃癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲能力的影響。方法1采用人胃癌細(xì)胞株MKN45，針對CD97基因設(shè)計(jì)SIRNA，采用化學(xué)法合成，篩選出最有效的CD97SIRNA。2CD97SIRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞48小時后，用RTPCR檢測CD97基因在MRNA水平表達(dá)的變化，72小時后用WESTERNBLOT和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測CD97基因在蛋白水平表達(dá)的變化，并用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)檢測胃癌細(xì)胞增殖、凋亡的變化，用細(xì)胞遷移和侵襲試驗(yàn)檢測胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。315只裸鼠隨機(jī)分為3組，每組5只，分別接種轉(zhuǎn)染SIRNACD97細(xì)胞抑制組，接種轉(zhuǎn)染陰性對照SIRNACD97細(xì)胞陰性對照組，接種未轉(zhuǎn)染細(xì)胞正常對照組。接種4周后，觀察各組成瘤情況，比較成瘤率。結(jié)果1CD97一SIRNA轉(zhuǎn)染48小時后，RTPCR方法檢測結(jié)果表明CD97在MRNA水平表達(dá)下降7012％；72小時后，WESTERNBLOT方法檢測結(jié)果表明CD97在蛋白水平的表達(dá)下降6635％。2CD97SIRNA轉(zhuǎn)染72小時后，MTT法檢測結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染組相比，細(xì)胞增殖率下降5245％；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，GL期細(xì)胞數(shù)量在未轉(zhuǎn)染組、陰性對照組和CD97SIRNA轉(zhuǎn)染組分別是1448士345％、1533士213％和3979士305％，S期細(xì)胞數(shù)量分別是6417士336％、6035士521％和2856士133％，出現(xiàn)GLS期阻IX

簡介：|FILLLIIIIILLUIILLLLLIFLLL0Y2663104中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名王絲』砑日期型坐羔塑中國醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬中國醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為中國醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名日期型生翌中文論著摘要BECLINL基因過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及其分子機(jī)制的初步研究目的結(jié)腸癌是常見的惡性腫瘤之一，以40歲～50歲年齡組發(fā)病率最高，全球每年新發(fā)病例約800萬人，占所有惡性腫瘤的10％15％。結(jié)腸癌在我國的發(fā)病率有增高的趨勢，死亡率僅次子肺癌和肝癌，占我國惡性腫瘤第三位。BECLINL基因也稱BECNL基因，是酵母ATG6的同系物，也是哺乳動物參與自噬的特異性基因。BECLINL不僅參與自噬體的形成，還可通過調(diào)節(jié)自噬活性對腫瘤發(fā)生、發(fā)展起著重要作用。關(guān)于自噬基因BECLINL與非小細(xì)胞肺癌，乳腺癌，宮頸癌等都有了相關(guān)的研究，但BECLINL與結(jié)腸癌在體內(nèi)外關(guān)系的研究還很少。本研究旨在利用BECLINL基因在結(jié)腸癌細(xì)胞HCTL5和HCTLL6細(xì)胞中過表達(dá)，對細(xì)胞的自噬、凋亡、侵襲、生長活性及相關(guān)基因表達(dá)進(jìn)行檢測，以此來研究BECLINL基因過表達(dá)對結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，初步探索自噬基因BECLINL的在結(jié)腸癌中的分子機(jī)制。方法設(shè)計(jì)特異引物利用RTPCR方法從HCTL5細(xì)胞總RNA反轉(zhuǎn)錄BECLINLCDNA，并連接到PUCM．T載體中，進(jìn)行酶切鑒定及測序。將測序正確的PUCM．BECLINL克隆DNA及PCDNA3．1／MYC．HIS質(zhì)粒DNA擴(kuò)增，分別進(jìn)行ECORI、XBAI雙酶切，純化BECLINL和PCDNA3．1／MYCHIS片段，連接，轉(zhuǎn)化，擴(kuò)增，酶切鑒定及測序。將構(gòu)建的BECLINL質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染HCTL5、HCTLL6細(xì)胞并進(jìn)行G418篩選建立穩(wěn)定克隆細(xì)胞系，在DNA水平進(jìn)行鑒定，分別在RNA水平和蛋白水平上對PCDNA3．1／MYCHISBECLINL質(zhì)粒進(jìn)行表達(dá)檢測，篩選獲得BECLINL高表達(dá)結(jié)腸癌陽性克隆細(xì)胞株，并進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測，用WESTERNBLOT檢測LC3BII、LC3BI蛋白表達(dá)，，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測自噬蛋白LC3B表達(dá)，電鏡下觀察克隆細(xì)胞株亞細(xì)胞形態(tài)變化；用ANNEXINVFITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測；用細(xì)胞增殖試劑盒CCK檢測細(xì)胞生長；采用TRANSWELL侵襲實(shí)驗(yàn)來研究BEDIM基因過表