簡介：上海交通大學博士學位論文論文題目骨橋蛋白異構(gòu)體在胃癌中的生物學作用及其分子機制研究學號指導教師0097209123菱匾蒸副教授學科專業(yè)處科堂F普通處科L論文提交日期2012年4月上海交通大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名日期加P年廠月LET

簡介：該論文運用RAPD（ROMAMPLIFIEDPOLYMOPHISMICNDA隨機擴增多態(tài)性DNA）方法研究了來自山西黎城長治平順壺關屯留及安澤6個地區(qū)11個連翹地方栽培品系的親緣關系并用HPLCHIGHPERFMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHY高效液相色譜方法測定連翹主要指標成分連翹甙含量的變異情況RAPD分析結(jié)果表明連翹栽培的地方品系間存在明顯的DNA水平上的多樣性變異運用PHILIP36軟件包以及WAGENER算法可分為ABC三個不同分支連翹甙含量分析結(jié)果顯示兩個遺傳關系相近分支B和C的連翹甙含量差異不顯著（T044P067平均連翹甙含量分別為053MGG和067MGG而這兩個類群與第三個類群遺傳差異大連翹甙含量差異也很大（87MGG）這種DNA分子多樣性差異與化學指標成分含量差異的相關性說明連翹的遺傳基礎可能對化學指標成分的形成和積累有顯著的影響該研究結(jié)果顯示運用RAPD分析手段進行藥材道地性研究具有可行性

簡介：鄭州大學碩士學位論文LEBER遺傳性視神經(jīng)病變的分子生物學檢測姓名胡宏閣申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師金學民李曉文20040430鄭州大學2001研究生畢業(yè)論文LEBER遺傳性視神經(jīng)病變的分子生物學檢測材料與方法共調(diào)查了河南、安徽兩省5個符合臨床診斷的LHON家系，其中三個家系同意檢測，在這三個家系中抽取了母系成員的血樣30份作為實驗組，抽取無視力障礙的正常人血樣32份作為對照組，兩組的男女比例X2O06，曠O81及年齡分布T072，P047相匹配。在無菌條件下抽取外周靜脈血，2％EDTA抗凝，有機酚法提取DNA。752紫外線分光光度計進行DNA定量及純度測定，用4對引物聚合酶鏈反應擴增出4個線粒體DNA片斷，涵蓋3394、3460、4136、4160、4216、11696、11778、14459、14482、14484、14498共11個突變位點，瓊脂糖凝膠電泳驗證DNA擴增產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度。擴增產(chǎn)物用于單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析和DNA測序DNASEQUENCING。本實驗的參照MTDNA序列是劍橋標準MTDNA序列。結(jié)果5個家系的母系成員共78人男36人，女42人，發(fā)病31人，發(fā)病率3974％，男女比例2011，平均發(fā)病年齡29OL歲。男性外顯率5555％，女性外顯率2619％。其中三個家系樊氏、毛氏、石氏患者發(fā)病年齡隨傳遞代數(shù)的增加而減小，呈現(xiàn)遺傳早發(fā)現(xiàn)象。用第一對引物P，、P擴增340BP片段片段1，自NPLL641至NPLL980，其中含11778、11696兩個位點。實驗組30例單鏈構(gòu)象多態(tài)性SSCP檢測結(jié)果全部為異常，對照組32例SSCP檢測結(jié)果全部正常。對片段1測序，測序結(jié)果與劍橋標準MTDNA序列比對，30個實驗組樣本均含有I1778位點突變，對照組均無此位點的突變。實驗組和對照組所有樣本都出現(xiàn)11719位點的突變。I1696位點測30個樣本，其中實驗組19個，對照組11個，均未發(fā)生突變。第二對引物P。、P。擴增338BP片段片段2，自NPL4200到NPL4538，其中含14459、14482、14484、14498四個位點，SSCP檢測發(fā)現(xiàn)僅一例LHON病人的結(jié)果有異常。反復驗證排除假陽性，其余29人未發(fā)現(xiàn)異常，對照組32人均未發(fā)現(xiàn)異常。片段2測序23個樣本，其中實驗組14個，對照組9個，所含4個目的位點均未發(fā)生突變。SSCP檢測中結(jié)果異常的一個樣品，多次測序均因為峰圖紊亂而無法判讀結(jié)果。第三對引物P；、P。擴增307BP片段，自NP3357到NP3663，其中含3394、3460兩個位點，實驗組和對照組的所有樣本經(jīng)SSCP檢測均未發(fā)現(xiàn)異常。實驗組和對照組各測4個樣品，均未發(fā)現(xiàn)突變。第四對引物P，、R擴增327BP片段，自NP4032到NP4358，含4136、4160、4216三個位點，實驗組和對照組的所有樣本經(jīng)SSCP檢測均未發(fā)現(xiàn)異常，片段4測序31個樣品，其中實驗組19個，對照組12個，所含3個目的位點均未發(fā)現(xiàn)突變。測序中發(fā)現(xiàn)實驗組一個樣品攜帶4164位點AG突變，此突變使酪氨酸替換為半2

簡介：點擊查看更多SMAD蛋白及其介導的生物學信號在肝纖維化分子發(fā)生機制中的作用研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多補腎健脾方藥抗癌扶正祛邪與拮抗化療毒副作用的分子生物學機制.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號R4451密級單位代碼10422學號L0860125∥簍辦孚SHANDONGUNIVERSITY碩士學位論文THESISFORMASTERDEGREE專業(yè)學位論文題目乳腺癌超聲征象與分子生物學表達及C反應蛋白表達水平的相關性研究STUDYONTHECORRELATIONBETWEENEXPRESSIONOFBREASTCARCINOMAULTRASONOGRAPHICFEATURESANDMOLECULARBIOLOGYEXPRESSIONANDCREACTIONPROTEIN作者姓名培養(yǎng)單位專業(yè)名稱指導教師合作導師王雯山東大學醫(yī)學院影像醫(yī)學與核醫(yī)學馬秸副教授2014年4月20EL目錄摘要1ABSTRACT。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。，。。。；符號說明51前言661日U舌11乳腺癌誘發(fā)原因612乳腺癌的基因分型913乳腺癌的分子生物學檢查914乳腺癌的超聲影像學檢查102資料與方法1121臨床資料1122方法11221CRP測定11222免疫組化檢測ER、PR、CERBB211223儀器與檢查方法1223統(tǒng)計學分析133結(jié)果1331血清CRP檢測結(jié)果1332乳腺癌患者的超聲惡性征象檢測結(jié)果1433乳腺癌超聲影像學表現(xiàn)與C反應蛋白表達水平的相關性研究143450例乳腺癌的分子標志物與超聲特征關系154討論1741C反應蛋白2042生物分子學在乳腺癌檢查中的應用2343乳腺癌的生物分子學與超聲影像特點關系235結(jié)論26參考文獻27綜J簽32致謝41

簡介：博士學位論文學校代碼L0023學號B2007136大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關分子的篩選和生物學功能研究IDENTIFICATIONANDFUNCTIONALSTUDYOFTHEM01ECULARMARKERSINC010RECTALCANCER所院姓名指導教師導師小組學科專業(yè)研究方向完成日期腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所馬怡茗黃常志黃常志張叔人冉宇靚馬潔袁興華肖建平孫克林生化與分子生物學蛋白質(zhì)組學與腫瘤分子生物學20104JQ北京協(xié)和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院博士研究生學位論文目錄㈣刪㈣『『JJ|J『JFFJJFF『脯Y177596IJI目錄I圖表索引I英文縮略詞對照V中文摘要L英文摘要2前言4月U舌4材料與方法6實驗結(jié)果3L第一部分大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關分子的篩選和鑒定一、大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關分子的篩選3L二、大腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移相關分子的鑒定32第二部分UCHLL促進大腸癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移一、UCHLL在大腸癌中的表達及與大腸癌發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關性1WEST鋤BLOT檢測UCHLL在大腸癌標本中的表達352免疫組化檢測UCHLL在大腸癌標本中高表達36二、UCHLL促進腫瘤細胞的增殖和運動能力1大腸癌癌細胞系中UCHLL的表達382UCHLL低表達是由于該基因啟動子區(qū)域發(fā)生高甲基化393UCHLL真核表達系統(tǒng)的構(gòu)建404穩(wěn)定表達UCHLL細胞系的篩選4L5UCHLL在HCT8細胞中的定位4L6UCHLL高表達對大腸癌細胞生物學性質(zhì)的影響4261UCHLL高表達促進HCT8細胞的體外增殖能力4262UCHLL高表達改變HCT8細胞的細胞周期4463UCHLL高表達提高HCT8細胞的集落形成能力4564UCHLL高表達促進HCT8細胞的體外遷移能力4565UCHLL高表達對HCT8細胞與細胞外基質(zhì)的黏附能力無影響47

簡介：第一部分重慶地區(qū)家兔博爾納病病毒自然感染狀況研究。目的檢測重慶地區(qū)家兔博爾納病病毒BNADISEASEVIRUS，BDV隱性帶毒情況。分析該BDV的可能種系來源及其與標準株STRAINVFR、STRAINHE80FR和STRAINH1766的同源性。方法采用巢式逆轉(zhuǎn)錄酶PCR結(jié)合熒光定量PCRREALTIMENRTPCR檢測重慶地區(qū)60例健康家兔腦組織BDVP24基因片段，并對其中的陽性產(chǎn)物進行基因序列測定，然后用BLAST軟件以及DNASTARV613EDITSEQ軟件對測序結(jié)果進行分析。結(jié)果2例家兔為陽性。該BDVP24片段的核苷酸序列與馬源BDVSTRAINH1766株同源性最高，為9767％，與標準株STRAINVFR和STRAINHE80FR同源性均為9651％，但是它們編碼的氨基酸相同。結(jié)論重慶地區(qū)家兔中存在動物源性BDV隱性感染，該BDVP24核苷酸序列與STRAINVFR和STRAINHE80FR具有高度同源性。但是與馬源的STRAINH1766同源性最高。第二部分重慶地區(qū)狗博爾納病病毒自然感染狀況的初步探討。目的初步了解重慶地區(qū)狗BDV的隱性感染情況，對檢測到的陽性片段進行核苷酸序列比對，探討其可能的種系來源及其與國外公認的標準株STRAINVFR、STRAINHE80FR和STRAINH1766的同源性。方法采用REALTIMENRTPCR檢測重慶地區(qū)40例健康狗腦組織右側(cè)前額葉BDVP24基因片段，并對其中的陽性產(chǎn)物進行基因序列測定，然后用BLAST軟件以及DNASTARV613EDITSEQ軟件對測序結(jié)果進行分析。結(jié)果5例狗為陽性。該BDVP24片段的核苷酸序列與標準株STRAINH1766和STRAINVFR同源性最高，為9767％。與STRAINHE80FR的同源性為9419％，與已有報道的奧地利狗源BDV同源性為9535％。但是它們編碼的氨基酸相同。結(jié)論重慶地區(qū)狗中存在動物源性BDV的隱性感染，該BDVP24核苷酸序列與STRAINH1766、STRAINVFR和STRAINHE80FR具有高度同源性。第三部分重慶地區(qū)鴿子博爾納病病毒自然感染狀況的研究。目的初步了解重慶地區(qū)鴿子博爾納病病毒BOMADISEASEVIRUS，BDV隱性感染狀況，對其感染的病毒株進行核苷酸序列比對，探討其可能的種系來源以及與國外公認的標準株STRAINVFR、STRAINHE80FR和STRAINH1766的同源性。方法本研究采用REALTIMENRTPCR技術對重慶地區(qū)60只鴿子的外周血單核細胞PBMCS中的BDVP24基因片段進行了檢測，并且對陽性PCR產(chǎn)物進行測序。然后用BLAST軟件以及DNASTARV613EDITSEQ軟件對該片段進行核苷酸比對及序列分析。結(jié)果四例樣本為陽性。該BDVP24片段的核苷酸序列與法國狐貍分離的BDV同源性最高，為9767％。與標準株STRAINVFR和STRAINHE80FR的同源性都是9651％，與STRAINH1766同源性僅為9535％。但是它們編碼的氨基酸相同。結(jié)論本研究表明重慶地區(qū)鴿子存在博爾納病病毒的隱性感染，其感染病毒的P24核苷酸片段與SWAINVFR、STRAINHE80FR以及STRAINH1766等國際公認的標準病毒株存在高度同源性。變異程度均小于465％，且其編碼的氨基酸無差別。

簡介：隨著臨床上抗生素的廣泛使用，細菌已出現(xiàn)耐藥性，因此尋找新的抗感染途徑已成為當今研究的熱點。群體感應QUUMSENSING，QS作為細菌間傳遞信號的重要方式，可釋放自誘導物分子來調(diào)控多種毒力因子的釋放以及細菌的致病性。如今，QS已經(jīng)成為新型、抗耐藥菌藥物設計的重要靶標，因該藥物不影響細菌生長只抑制QS調(diào)控的致病行為，理論上不會引起細菌的耐藥性。銅綠假單胞菌是一種可引起呼吸道感染、肺炎等疾病的條件致病菌，其存在三種基于信號分子的QS系統(tǒng)LAS、RHL和PQS系統(tǒng)。其中，LAS系統(tǒng)處于核心地位，它可以調(diào)控RHL和PQS的基因表達。但是，隨著對銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)的深入研究發(fā)現(xiàn)，LAS在群體感應調(diào)節(jié)中的核心地位并不是絕對的。研究顯示非核糖體肽合成酶AMBB參與合成一種新型QS信號分子IQS，它在環(huán)境壓力下（如低磷環(huán)境）取代LAS進而對RHL、PQS系統(tǒng)進行調(diào)控。本論文擬通過生物化學的方法，結(jié)合X射線晶體學的研究手段對AMBB蛋白的C端結(jié)構(gòu)域進行研究，以期從結(jié)構(gòu)生物學角度闡釋群體感應信號分子IQS的產(chǎn)生機制，亦或為今后群體感應抑制劑的研發(fā)提供理論基礎。本研究結(jié)果包括1成功構(gòu)建表達載體，并利用原核系統(tǒng)表達蛋白，已獲得大量高純度AMBBC蛋白2篩選到10種AMBBC晶體生長條件，經(jīng)優(yōu)化成功得到用于衍射的單晶3收集到分辨率高達25A的數(shù)據(jù)4成功制備重金屬衍生物及硒代甲硫氨酸晶體5通過定點突變引入甲硫氨酸增強反常散射信號解決相位問題，目前蛋白結(jié)構(gòu)已成功解析。

簡介：RABSONMENDENHALL綜合征（簡稱RMS），是一種罕見的遺傳性胰島素抵抗綜合征，為常染色體隱性遺傳病，其發(fā)病機制主要與胰島素受體基因突變有關，常為純合突變或者復合雜合突變，臨床上以嚴重的胰島素抵抗為特征，伴有多毛、黑棘皮、牙發(fā)育異常、松果體增生、指甲肥厚、生殖器肥大、腹部膨隆等。大部分患兒在青春期前死于嚴重的酮癥酸中毒，為此，早期診斷和治療對于病人的預后具有重要的意義。目的對1例罕見的6歲RABSONMENDENHALL綜合征患者進行臨床分析及分子生物學研究，探討其發(fā)病機制及其特點。方法收集患者及其父母的病史資料，進行血液生化及相關影像學檢查；采集患者及其父母DNA樣本，進行胰島素受體基因（INSR）及胰島素受體底物1基因（IRS1）的基因序列測序檢測；并運用高胰島素正葡萄糖鉗夾技術評估患者父母胰島素抵抗程度。結(jié)果該患者有黑棘皮、多毛、出牙早、牙列不齊、指甲厚、腹膨隆、外生殖器肥大等臨床特征，口服糖耐量及同步胰島素釋放試驗提示其有空腹血糖降低及嚴重的胰島素抵抗，臨床符合RABSONMENDENHALL綜合征；基因篩查發(fā)現(xiàn)，患者INSR第6號外顯子上存在MET469THR的改變，由父親遺傳所致；IRS1基因1號外顯子存在PRO569LEU的改變，為母親遺傳；同時，高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗證實雖然患者父母各攜帶一個雜合突變位點，但雙方都存在一定程度的胰島素抵抗。結(jié)論該患者存在胰島素受體基因（INSR）及胰島素受體底物1基因（IRS1）雙雜合突變，此為RABSONMENDEHALL綜合征一新的突變類型。

簡介：點擊查看更多人HLA-G-,1-分子的克隆、表達、生物學功能及HLA-G基因多態(tài)性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：河北醫(yī)科大學學位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學位論文在導師或指導小組的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權(quán)對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內(nèi)容相關的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學所有。否則，承擔相應法律責任。僦虢懈刪蓋軍謠㈣河北醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名、絮唧斗?章鷺琶導師簽章∞歹謹J20孵’多月硼中文摘要共刺激分子B7．H3在食管癌中的表達及對食管癌細胞生物學特性的影響摘要惡性腫瘤嚴重威脅全球人類健康。由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有多元性及復雜性，認識腫瘤發(fā)生發(fā)展機制和尋找治療腫瘤方法成為遏制腫瘤面臨的巨大挑戰(zhàn)。腫瘤免疫療法是繼手術、化療、放療后第四大有效的抗腫瘤療法。近年來，作為B7免疫球蛋白超家族的新成員，共刺激分子B7H3在多種腫瘤組織異常高表達，并與腫瘤的生物學特性密切相關，被認為可能是一種新的腫瘤標志物和潛在的治療靶點。目的本課題旨在通過檢測人食管鱗癌組織、相應癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7．H3分子的表達，分析其與患者I臨床病理因素以及術后生存時間之間的關系。檢測食管癌細胞株TE．1、TE．13、ETA．109細胞中B7．113的表達，并通過靶向干擾B7．H3基因表達來研究B7．H3對食管癌細胞增殖、侵襲等生物學行為的影響。方法L用免疫組織化學法檢測食管鱗癌組織、癌旁正常組織及食管鱗狀上皮不典型增生組織中B7H3蛋白的表達以及CD8T淋巴細胞的浸潤程度。2用RTPCRREVERSETRANSCRIPTIONPOLYMERASECHAINREACTION方法檢測食管癌細胞株TE．1、TE．13、ECA109中B7．H3的表達情況。3用RTPCR、WESTERNBLOT等方法檢測B7．H3SIRNA基因沉默后ECA．109細胞中B7．H3的M_RNA和蛋白表達情況。4通過MTT實驗分析沉默B7．H3后食管癌細胞的增殖活性。5通過劃痕實驗分析沉默B7一H3后食管癌細胞的遷移運動能力。6通過TRANSWELL實驗分析沉默B7H3后食管癌細胞的侵襲能力。結(jié)果L免疫組化結(jié)果顯示，B7．H3陽性著色主要定位在腫瘤細胞的細胞質(zhì)和細胞膜。在82例ESCC患者中，B7．H3陽性率為98．8％。癌旁正常組

簡介：鄭州大學碩士學位論文腦膜瘤MRI表現(xiàn)及病理與分子生物學的對照研究姓名劉依凝申請學位級別碩士專業(yè)影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導教師程敬亮20060520鄭州大學2∞6年碩十研究生畢業(yè)論文腦膜瘤刪表現(xiàn)與病理特征及癌細胞內(nèi)多種分子表達的相關性研究瘤MRL表現(xiàn)的分子病理學基礎，了解VEGF、COX2、EGFR、MMP9和11MP1在腦膜瘤進展過程中與臨床病理生物學行為和M心的關系，有機地把腫瘤分予生物學與臨床影像結(jié)合，為臨床預后評價及選擇治療方案提供依據(jù)。材料與方法本組82例腦膜瘤患者均經(jīng)鄭州大學第一附屬醫(yī)院手術及病理證實。術前全部采用德國SⅢMENS超導1OT磁共振成像系統(tǒng)行MRI平掃及增強掃描。腦膜瘤TLWI及T2WI均按其信號強度評定為1～5分，即TIWI信號明顯低于灰質(zhì)而與腦脊液相似為1分，信號稍低于灰質(zhì)為2分，等于灰質(zhì)為3分，稍高于灰質(zhì)為4分，高于扶質(zhì)而與脂肪信號接近為5分；T2WL信號明顯低于灰質(zhì)為1分，稍低于灰質(zhì)為2分，等于灰質(zhì)為3分，稍高于灰質(zhì)為4分，高于灰質(zhì)而與腦脊液信號接近為5分。強化程度評為1～3分，明顯低于球后脂肪信號為1分，稍低于球后脂肪信號為2分，等于或高于球后脂肪信號為3分，強化不均勻者，取其增強顯著部位評分。瘤周水腫按其范圍分為四度，O度，無水腫；I度，水腫范圍0～2CM；II度，水腫范圍2～4CRN；II【度水腫范圍大于4CM。同時記錄病灶的形態(tài)，有無包膜，病變內(nèi)有無囊變、血管流空征，瘤體強化是否均勻，有無硬膜尾征及瘤周侵犯。術后標本全部經(jīng)10％福爾馬林固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋，和M連續(xù)切片，每例收集7張，一張行雎染色，其余為免疫組化備用。依據(jù)2000年世界衛(wèi)生組織WHO提出的腦膜瘤分級、分類方法，將腦膜瘤分為L～ⅡI級。免疫組織化學染色采用SP法鏈霉抗生素蛋白過氧化酶連接法，STREPTARIDINPEMXJDASECONJUGATEDMETHOD，檢測腦膜瘤組織中ⅦGF、MMP9、TIMPL、COX2、EGFR的表達，各抗體免疫組化染色以腦膜瘤細胞胞膜和戚胞漿呈現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽性細胞，每張切片隨機選取5個視野F2001，各計數(shù)100個細胞，將染色強度半定量定為0～2共3個等級“0”級表示未見染色；“1”級表示染色的陽性細胞數(shù)少于20％；“2”級表示染色的陽性細胞數(shù)大于或等于20％。用CD34標記血管內(nèi)皮檢測MVD，按O～4級共5級的半定量方法分級“0”級表示高倍視野下血管數(shù)少于5條；“1”級表示高倍視野下血管條數(shù)多于5條，但少于25條“2”級表示高倍視野下血管條數(shù)多于25條，但少于50條；“3”級表示高倍視野下血管條數(shù)多于50條，但少于75條“4”級表示高倍視野下血管條數(shù)多于75條。全部數(shù)據(jù)經(jīng)SPSSLOO統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，以AO05為檢驗水準。Ⅱ

簡介：TRAILTNFRELATEDAPOPTOSISINDUCINGLIGIND又叫APO2L，是新近發(fā)現(xiàn)的TNF超家族成員，與TNFΑ和FASL一樣能誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。但TNFΑ和FASL的細胞毒副反應太大，無法應用于臨床。TRAIL有較廣的抗癌譜，能誘導對FASL和放化療有抗性的細胞凋亡，尤其在其抗癌作用中最獨特的特征是只選擇性誘導腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞發(fā)生凋亡，而對正常組織和細胞沒有顯著毒性效應。這一特殊的選擇性使TRAIL在腫瘤治療中具有很大的應用前景，因此，有必要對其進行研究開發(fā)。TRAIL分子的活性部分位于第114～281氨基酸，近來有研究報道，氨基酸95位前的序列具有抑制TRAIL誘導的細胞凋亡能力，較短的重組可溶性TRAIL分子具有較高的生物學活性。胞外區(qū)41～281氨基酸片斷是全長的可溶性TRAIL分子，含有胞外區(qū)的所有遺傳信息，目前尚未見有關這一片斷的研究報道。本實驗運用基因工程的原理和方法克隆編碼人胞外區(qū)41～281片斷的CDNA，并將其插入原核表達載體PQE80L中誘導蛋白表達，經(jīng)純化復性后，獲得有生物學活性的重組可溶性人TRAIL41～281分子RHSTRAIL41～281。這既能為下一步探討41～114氨基酸殘基間是否存在輔助的功能位點奠定基礎，也有利于研究胞外區(qū)可溶性分子的長短與其功能的關系，同時也可為臨床上多種惡性腫瘤的治療提供新型候選劑。本文的主要研究方法、內(nèi)容及結(jié)論如下①利用RTPCR技術從HL60細胞總RNA中擴增編碼人TRAIL胞外區(qū)41～281氨基酸片斷的CDNA，經(jīng)DNA測序后證實，擴增片斷的序列與GENBANK報道的完全一致。②將測序正確的人TRAIL胞外區(qū)41～281氨基酸片斷的CDNA插入高效原核表達載體PQE80L，限制性酶切鑒定結(jié)果表明，成功構(gòu)建了重組PQE80LHTRAIL41～281質(zhì)粒。③用重組表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5Α，IPIG誘導融合蛋白表達，SDSPAGE進行鑒定。結(jié)果獲得相對分子量為305KDA左右的特異表達蛋白，且表達量占細菌總蛋白的45％左右。④經(jīng)鑒定表達蛋白以包涵體的形式存在。對包涵體進行分離溶解后，用NINTA樹脂進行純化，得到純度在90％以上的目的蛋白。⑤采用分步透析法復性蛋白，WESTERNBLOT證實該蛋白為RHSTRAIL41～281。通過凝膠過濾層析分離出復性蛋白的三種不同大小分子，分別與RHSTRAIL41～281的三聚體、二聚體和單體相對應，進一步證實這是目的蛋白。同時三聚體的存在為RHSTRAIL41～281發(fā)揮其生物學功能奠定了基礎。⑥選用JURKAT細胞，采用多種方法檢測RHSTRAIL41～281的體外抗腫瘤能力。RHSTRAIL41～281處理的JURKAT細胞的形態(tài)及生長狀況通過顯微鏡觀察、臺盼藍排斥試驗和MTT試驗進行檢測。顯微鏡下觀察到JURKAT細胞表現(xiàn)出凋亡的形態(tài)學特征，同時臺盼藍和MTT試驗結(jié)果也顯示RHSTRAIL41～281分子能有效抑制JURKAT細胞的生長，并且該作用有明顯量效和時效關系。應用流式細胞儀和DNA斷裂實驗檢測細胞凋亡。流式細胞儀結(jié)果表明，RHSTRAIL41～281能有效誘導JURKAT細胞發(fā)生凋亡，并且這一效應呈良好量效與時效關系。DNA斷裂實驗的結(jié)果顯示，經(jīng)誘導的細胞出現(xiàn)了典型的DNA梯形條帶，這一凋亡的特征性變化進一步證實RHSTRAIL41～281蛋白具有較好的抗腫瘤活性，并且提示該蛋白能通過誘導細胞凋亡的方式抑制細胞生長和殺傷腫瘤細胞，從而發(fā)揮其抗癌作用。⑦41～281片斷作為全長的可溶性TRAIL分子，具有較好的抗腫瘤活性。在本研究中，功能性RHSTRAIL41～281分子的制備，為進行下一步的實驗研究和開發(fā)利用奠定了基礎。

簡介：分類號R71174密級單位代碼10422學號2010120132∥菇辦謄SHANDONG咖ⅦRSITY博士學位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE專業(yè)學位論文題目羊膜球囊在宮腔粘連電切術后的臨床應用及分子生物學評價CLINICALAPPLICATIONANDMOLECULAREVALUATIONOFAMNIONTICSCAFFOLDBALLONAFTERTRANSCERVICALRESECTIONOFINTRAUTERINEADHESION作者姓名培養(yǎng)單位專業(yè)名稱指導教師合作導師劉丹山東大學醫(yī)學院婦產(chǎn)科學劉培淑教授2013年11月20日山東大學博士學位論文第一部分寧夏宮腔鏡診斷中心20102012年宮腔粘連流行病學調(diào)查前言28日U吾Z巧材料與方法28結(jié)果29討論34結(jié)論38參考文獻39第二部分羊膜球囊在宮腔粘連電切術后的臨床應用的研究前。言42刖舌4Z材料與方法43結(jié)果48討論54結(jié)論59附圖61參考文獻64第三部分宮腔創(chuàng)傷微環(huán)境中解離素一金屬蛋白酶家族成員ADAML5、17表達及意義前’言68RU舌B石材料與方法69結(jié)果8L討論85結(jié)論881J6JL2錄～～～目～一一要要明摘摘說文文號中英符