簡介：LIII111IIUILLIIIIILLLLLLIIILLIIILY3336735學校代碼學號或申請?zhí)柮茑峀大孚專業(yè)博士學位論文MICRORNA125B對人急性髓細胞白血病細胞生物學作用及分子機制作者姓名導師姓名專業(yè)學位名稱培養(yǎng)院系完成時間王琰孫玲教授內科學血液內科鄭州大學第一附屬醫(yī)院2017年8月原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學位論文J是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內容外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者多嘏日期上田7年P月F日學位論文使用授權說明本人在導師指導下完成的論文及相關的職務作品，知識產(chǎn)權歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關的學術論文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。學位論文作者主嵌日期加7年，工月J’日

簡介：小電導CA2激活K通道SMALLCONDUCTANCECA2ACTIVATEDKCHANNELS，SK，KCA2幾乎存在于所有可興奮細胞的胞漿膜上，依賴于細胞內的CA2進行激活。SK通道家族由SK1、SK2、SK3以及一個在結構和功能上與SK通道相似的中電導CA2激活K通道INTERMEDIATECONDUCTANCECA2ACTIVATEDKCHANNELS，IK或稱SK4組成。SK1、SK2和SK3三個亞型在人類、小鼠和大鼠心肌細胞中均有表達，參與心肌細胞動作電位復極化的構成。研究顯示SK1和SK2主要表達在心房，而敲除SK2通道的動物出現(xiàn)心房細胞復極化延長，增加房顫和房撲等快速性心律失常的易感性。因此，SK2通道可能與室上性快速性心律失常有關，可作為室上性快速性心律失常的治療靶點，但它的調控機制目前還不明確。引起SK2通道開放的細胞內CA2信號來源有兩條途徑位于細胞膜上的電壓門控CA2通道VOLTAGEGATEDCA2CHANNELS，VGCCS及內肌質網(wǎng)ENDOSARCOPLASMICRETICULUM，ERSR膜上RYRSRYANODINERECEPTS敏感的CA2釋放通道。已有研究報道指出心肌細胞膜的CAV13L型CA2通道通過ΑACTININ與SK2通道進行耦聯(lián)，實現(xiàn)對SK2通道的調控，這提示SK2通道可能不是直接和調控性的CA2通道有生理性相互作用。我們實驗室前期實驗證據(jù)已顯示心肌細胞膜表面的SK2通道與SRRYR2受體通道有功能性耦聯(lián)，但它們二者之間耦聯(lián)的中間分子并不清楚。本研究通過質譜分析和生物信息學的方法篩選心肌組織中與JP2相互作用的蛋白質，采用心肌組織和轉染HEK293細胞進行免疫共沉淀和GSTPULLDOWN實驗來驗證JP2與SK2通道、JP2與RYR2之間的相互作用，進一步制備不同片段GSTJP2原核表達質粒來驗證JP2與SK2通道和RYR2發(fā)生相互作用的結構域，并通過功能性實驗檢測JP2敲減后對鈣瞬變CALCIUMTRANSIENTS的影響，以及JP2敲減后心肌鈣相關蛋白的表達。研究方法1采用健康成年C57BL6小鼠，體重2025G，雌雄不拘。2心肌肌質網(wǎng)小泡膜蛋白的分離和檢測用差速離心的方法提取成年C57BL6小鼠心臟肌質網(wǎng)小泡的膜蛋白。并用WESTERNBLOT方法檢測膜蛋白中SK2、JP2和RYR2的蛋白，用心肌組織蛋白做陽性對照。3質譜分析心肌肌質網(wǎng)小泡膜蛋白裂解液中加入JP2抗體或鼠源無關的抗IGG抗體，再用PROTEINGSEPHAROSE捕獲制備免疫共沉淀復合物，進行電泳后，考馬斯亮藍染色，選擇有差異的目標蛋白條帶作為質譜分析樣品，送北京大學醫(yī)學部進行質譜分析。4生物信息學根據(jù)文獻將蛋白質篩選，用GENEONTOLOGY網(wǎng)站進行分類，并在STRING網(wǎng)站上查出它們之間的相互作用。5WESTERNBLOT鑒定將制備的免疫共沉淀復合物進一步用特異性SK2和RYR2抗體進行檢測。6構建原核表達載體使用BAMHⅠ和NOTⅠ雙酶切原核表達載體PGEX4T1，將JP2全長、氨基端片段JP2N11253和JP2N2216350、羧基端片段JP2C340696插入，構建融合基因PGEX4T1GSTJP2、PGEX4T1GSTJP2N1AA1253、PGEX4T1GSTJP2N2AA216350和PGEX4T1GSTJP2CAA340696。并用雙酶切和測序方法鑒定構建的重組質粒。7GST融合蛋白的原核表達和純化將已鑒定的GST、GSTJP2以及GSTJP2不同片段重組質粒分別轉化宿主菌ECOLIBL21，用IPTG26℃過夜誘導表達靶蛋白，并用GSTBINDTM樹脂層析柱純化融合蛋白。8構建PSK2IRESEGFP和PJP2PCDNAEGFP質粒，共轉染HEK293細胞以PCMV6ENTRYSK2和PCDNA31JP2為模板，制備PSK2IRESEGFP和PJP2PCDNAEGFP質粒，用雙酶切和測序方法鑒定構建的質粒。按照LIPOFECTAMIM2000說明書轉染質粒。9GSTPULLDOWN分析將結合了GST融合蛋白的層析柱中加入心臟裂解液或HEK293細胞裂解液，過夜孵育后用谷胱甘肽ELUTIONBUFFER洗脫，并用SK2或RYR2抗體進行檢測。10COIP法檢測體外JP2和SK2相互作用將共轉染SK2和JP質粒的HEK293細胞裂解液與抗體過夜孵育，再用PROTEINGSEPHAROSE制備免疫共沉淀復合物再分別用抗SK2和抗JP2抗體進行檢測。11尾靜脈注射腺病毒給健康成年C57BL6小鼠尾靜脈注射總量為1109PFU的攜帶陰性對照SIRNAADNC或JP2SIRNAADSIJP2的腺病毒。注射后7天分離成年小鼠心肌細胞。12WESTERNBLOT的方法測定注射腺病毒成年小鼠心臟JP2蛋白表達，并檢測對SK2通道蛋白表達的影響。13鈣瞬變的測定將ADNC和ADSIJP2組成年小鼠心肌細胞懸液進行梯度復鈣，并加入終濃度為2ΜM的FURA2AM，用1HZ場刺激誘發(fā)鈣瞬變，采用IONOPTIX心肌細胞收縮及離子濃度同步測量系統(tǒng)測量鈣瞬變，數(shù)據(jù)采用美國IONOPTIX公司的IONWIZARD66軟件進行分析。14WESTERNBLOT的方法測定RYR2、CAV12、NCX、SERCA2鈣處理相關蛋白的表達。15統(tǒng)計學分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤表示，用SPSS110統(tǒng)計學軟件進行分析。以配對T檢驗或單因素方差分析ONEWAYANOVA進行統(tǒng)計學處理。統(tǒng)計分析以P＜005為有顯著性差異。實驗結果1WESTERNBLOT檢測顯示肌質網(wǎng)小泡膜蛋白中有SK2、JP2和RYR2三種蛋白的表達。2在心肌肌質網(wǎng)小泡膜蛋白中加入JP2抗體（免疫共沉淀實驗組）或鼠源無關的抗IGG抗體（陰性對照組）制備質譜分析樣品，電泳后考馬斯亮藍染色，觀察對照組和實驗組的蛋白質泳帶，選出13條差異目標條帶。質譜分析后得到35013個與JP2可能有相互作用的蛋白質，最終篩選出90個相關的蛋白質，其中包括SK2和RYR2蛋白。通過信息分析學進一步對蛋白質進行分類，并測定它們之間的相互作用。3STRING網(wǎng)站預測結果顯示JP2和RYR2兩者的直系同源蛋白可以在其他物種中共表達，可以預測它們之間可能存在相互作用由于目前只能同源模建出小鼠SK2的CAM區(qū)（序列為655785），不能預測SK2和JP2之間是否有相互作用但通過WESTERNBLOT的方法用特異性SK2和RYR2抗體檢測到肌質網(wǎng)小泡裂解液中JP2可以沉淀SK2和RYR2蛋白。4GSTJP2融合蛋白可以PULLDOWN心肌組織裂解液中的SK2，提示GSTJP2與心肌中SK2有相互作用，并且這種相互作用主要發(fā)生在JP2氨基末端的MN區(qū)，尤其是GSTJP2N1AA1253片段作用明顯，而GSTJP2的羧基末端GSTJP2C片段AA340696可以和心肌組織裂解液中的RYR2結合體外實驗結果顯示GSTJP2的MN1區(qū)1253片段可以和HEK293細胞裂解液中的SK2蛋白結合。5將HEK293細胞共轉染SK2和JP2質粒，用特異性JP2或SK2抗體孵育細胞蛋白裂解液進行COIP實驗，結果顯示SK2可以共沉淀JP2，JP2可以和SK2結合，提示體外JP2和SK2之間可能有相互作用。6成年小鼠尾靜脈注射陰性對照SIRNA或JP2SIRNA的腺病毒，WESTERNBLOT結果顯示，與空白對照組CTRLNT和陰性對照組ADNC相比，ADSIJP2組JP2表達減少到了47％和48％，而SK2通道蛋白表達無明顯變化。7成年小鼠心肌細胞JP2敲減后，用IONOPTIX心肌細胞收縮及離子濃度同步測量系統(tǒng)測量鈣瞬變，與ADNC相比，ADSIJP2組鈣瞬變的幅度顯著減少，鈣瞬變到達峰值50％的時間卻顯著增加，而細胞內靜息CA2水平和鈣瞬變衰減50％的時間沒有顯著變化。使用CAFFINE測量RYR2依賴性肌質網(wǎng)CA2儲存水平，與陰性對照組相比，鈣瞬變的幅度亦顯著減少。因此，敲減成年小鼠心肌JP2的表達，會減少心肌肌質網(wǎng)CA2的釋放。8用WESTERNBLOT的方法檢測成年小鼠心肌鈣處理相關蛋白的表達，與陰性對照組相比，ADSIJP2組心肌組織RYR2、CAV12、NCX、SERCA2的表達無顯著變化。實驗結論小鼠心肌組織JP2與SK2、JP2和RYR2蛋白有相互作用，JP2分別通過羧基末端連接RYR2，而通過氨基末端的MN結構域連接SK2，從而實現(xiàn)三者的功能聯(lián)系。

簡介：LIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIY3336102努類垮I密級R656。5凳開單位代碼10422學號XF∽FW年秭0二繁IJJ九。一夏SHANDONGU，NLVEF婚ITY博士學位論文DISSERTATIONFORDOCTORALDEGREE專業(yè)學位論文題昏CXCR7一CXCLL2生物學軸在胃癌血管生成及侵襲轉移中的分子機制研究作者姓名李遭諾培養(yǎng)。單，位山東大學醫(yī)學院專業(yè)名稱臨床醫(yī)學普外指導教師孫宏治教授合作導師ONL，紅N，嗣N詹茬J螢V，牛掣，’‘”BI東大學博士學位論文目錄中文摘要5英文摘要14符號說明26綜述28第一部分CXCRT／CXCLL2在不同胃癌組織中的表達及與臨床病理因素的關系47前言47材判與方法49結果55討論61小結64參考文獻64第二部分慢病毒載體介導的RNAI沉默CXCR7后對人胃癌細胞株SGC7901靶向抑制的實驗研究69前言69捌料與方法70結果78討論82小結85參考文獻85第J部分CXCR7一SHRNA調控ID一1對胃癌移植瘤及血管生成的影響9】前言91材料與方法92結果95討論104小結106參考義獻】06致謝11I7

簡介：學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學位是本人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內容外，不包含其他人或其它機構已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學位論文作者簽名蚴ET期201L，OS、2O學位論文使用授權聲明研究生在校攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬南京師范大學。學校有權保存本學位論文的電子和紙質文檔，可以借閱或上網(wǎng)公布本學位論文的部分或全部內容，可以采用影印、復印等手段保存、匯編本學位論文。學?？梢韵驀矣嘘P機關或機構送交論文的電子和紙質文檔，允許論文被查閱和借閱。保密論文在解密后遵守此規(guī)定保密論文注釋本學位論文屬于保密論文，保密期限為年。學位論文作者簽名琊湮B指導教師簽名VN孥目錄目錄摘要IABSTRACTIII第1章緒論111研究背景112研究意義2121經(jīng)濟地理學理論發(fā)展的新趨勢2122我國生物技術研究活躍的領域2123本文研究的實踐意義。313研究方法414研究內容與技術路線5141研究內容5142研究難點一6143可能的創(chuàng)新點7144技術線路圖。7第2章研究綜述921相關概念界定9211科學合作。9221地理鄰近與社會、制度鄰近。922國內對科學合作的相關研究綜述9221管理學領域對于科學合作的研究綜述10222管理學對科學合作的空問特性地域性研究1023國外對科學合作的相關研究綜述11231地理鄰近對科學合作作用機制研究1L232制度鄰近、社會鄰近對科學合作作用機制研究14233認知鄰近對于科學合作作剛綜述14234地理鄰近因子與制度、社會鄰近因子相互作用機制研究1524國內外研究評述15第3章基礎數(shù)據(jù)獲取及處理1731數(shù)據(jù)獲取方法選擇1732數(shù)據(jù)獲取17

簡介：華中師范大學碩士學位論文室內空氣甲醛誘發(fā)氣道高反應的神經(jīng)分子生物學機制的研究姓名童志前申請學位級別碩士專業(yè)生化與分子生物學指導教師楊旭20031201⑧碩士學位論文MAS’RER’S’IHESIS后測量呼吸器官中P物質含量變化，對比分析。結果1_吸入242MG／M3甲醛的小鼠呼吸器官中P物質含量較空氣灌流組顯著上升PO05。腹部皮下預注射MGS04O2M，O5ML，再用242MG／MS甲醛灌流的小鼠呼吸器官中P物質含量，較242MG／M3甲醛灌流組顯著下降PO，05。尾靜脈預注射CAPSAZEPINE510～M，O5ML，再242MG／M3甲醛灌流的小鼠呼吸器官中P物質的含量，較242MG／M3甲醛灌流組顯著下降P001。結論甲醛誘發(fā)的氣道神經(jīng)源性炎癥的受體機制可能是通過激活感覺神經(jīng)末梢CFIBER上的類香草素受體VKL或，和NMDARECEPTOR，觸發(fā)神經(jīng)末梢軸索反射，釋放大量的速激肽例如SP，誘發(fā)氣道神經(jīng)源性炎癥。關鍵詞甲醛FM；氣道神經(jīng)源性炎癥多重化學物敏感癥MCS不良建筑綜合征SBS；P物質SP；類香草素受體亞型LVRL；N甲基一D一天冬氨酸受體NMETHYLDASPARTATERECEPTORNMDARECEPTOR；CAPSAZEPINECPZ第二章類香草素受體CDNA體外擴增、克隆和鑒定摘要有關類香草素受體VANILLOIDRECEPTOR，VR的研究受到著名國外雜志科學、自然的報道，麗目前相關的論述在國內極少見之于報刊。本研究利用本實驗室改進的用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細胞技術、堿裂解法小量制備質粒DNA的技術，成功地將含有類香草素受體的亞克隆體VRL的PCDNA3質粒轉化到T61大腸桿菌中并擴增得到大量具有目標基因的PCDNA3質粒。這項研究為構建類香草索受體模型細胞在非洲爪蟾卵母細胞體外表達、類香草素受體的電生理特征甲醛刺激反應的研究、呼吸道疾病的新

簡介：一JI『犬弊一JII犬學博士學位論文題目擔查掛茴姿堡盟生焦壘盆王皇塹生壁杰作者董焦里完成日期蘭墜年衛(wèi)月一日培養(yǎng)單位生全盟堂芏墮指導教師墼墨垂蕉撞專業(yè)堡籃塋研究方向坌量堡盟堂盈垂旦蘭垂授予學位日期年月日四川大學博士學位論文G一100凝膠過濾層析和改進的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳1N．PAGE等方法，從粗毛栓菌RGALLICA分泌的胞外蛋白中分離了14種漆酶同工酶依次命名為LAEL至LAEL4，純化產(chǎn)物通過SDSPAGE電泳檢查，均已經(jīng)達到了電泳純。生物物理性質測定表明，純化的漆酶同工酶分子量都是60，000DASDSPAGE，并且為單體多糖含量為10～13．5％每個蛋白質分子含有4個銅離子；具有610AM典型I型銅離子的的藍色吸收，以及330NM弱的II型銅離子的特征吸收；等電點在2．8～5．3之間；它們的非變性凝膠遷移率卻各不相同。生化性質測定顯示，在PH6～10的范圍內，漆酶是比較穩(wěn)定的；最適反應溫度為70。C，但PH值可嚴重影響其熱穩(wěn)定性；金屬離子對漆酶活性有一定程度的抑制，其中FE2的作用最強。在試驗的幾種抑制劑中，NAN3抑制作用最強；對ABTS、DMP和愈創(chuàng)木酚最適反應PH值依次為2．2，3．0和4．O；K．M值測定表明ABTS是最適底物，但純化的14種漆酶的KM值存在很大差異。漆酶能夠有效氧化多種芳香、非芳香化合物以及偶氮染料和生物活性染料對20種有機化合物最適反應PH值為2．2～5．4之間；通過測定耗氧速率，ABTS仍是漆酶最適反應底物。漆酶LAEL0和LACLL的N．末端的氨基酸序列測定結果分別為A．I．GPV．AD．L．T．I．SN和S／A．I．GP．V詛．DLOI．SN。同源性分析顯示，2種漆酶N端氨基酸序列與栓菌屬的其它菌株的漆酶N一端序列有較高的同源性。根據(jù)漆酶基因序列的保守性設計了多對簡并引物，通過PCR方法從粗毛栓菌基因組DNA中克隆到3個DNA片段LAC9147，LAC9201和K9450；采用RTPCR方法克隆到2個333BP的EDNA片段LACE333A和LACC333B以及1個長1488BP的EDNA片段LACA。對6個漆酶基因片段的核苷酸及其編碼的氨基酸序列進行同源性分析，結果表明LAC9147與LAC9450完全相同，它們應是來自同一個基因；該基因與LACC333A同源性很高，達98．9％。此外，LACA和LACE333B之間也有較高同源性達99．3％；LAC9201與其它5個DNA序列同源性相對較低。因此推測6個DNA片段可能來自5個不同的漆酶基因。LACA序歹4編碼由496個氨基酸殘基組成的漆酶，結構中含有漆酶特有的3種類型的C一結合位點，4個N．糖基化位點以及2個二硫鍵位點。同源性分析XL

簡介：山東師范大學碩士學位論文用于細胞內具有重要生物學意義的活性小分子物種的高選擇性識別的新型熒光探針的合成研究及其在生物體系中的應用姓名于法標申請學位級別碩士專業(yè)分析化學指導教師唐波20090405近紅外熒光活性物種檢測成的機理常見的有光誘導電子轉移、電荷轉移激發(fā)態(tài)、單體一激基締合、熒光共振能量轉移、電子能量轉移。為了實現(xiàn)高選擇性、高靈敏度快速識別和檢測生物體內的礦、C1’和FE2，并使之達到可視化的目的，本論文開展了以下兩方面的工作一設計合成了一種近紅外中性PH值熒光探針。探針結構采用“熒光團一橋體一受體’’設計模式，通過光誘導電子轉移機理來操控熒光強度的增減。在結構設計策略基礎上，我們選擇了具備有高吸光系數(shù)的七甲川花菁CY染料作為熒光團，4’一芐胺基2，2’67，2_三聯(lián)吡啶TPY為質子受體。通過PH滴定實驗，我們發(fā)現(xiàn)此探針可用于監(jiān)測生理PH值微小的波動。經(jīng)測定，探針的P‰約為710。在PH值670790范圍內，熒光強度對H濃度變化有強的依賴性和迅速響應靈敏性，并且在此范圍內熒光強度和PH值之間有著良好的線性關系。此探針可以在生化體系中有效地避開生物自發(fā)熒光和生物內源性物種的干擾。同時探針也展現(xiàn)出高靈敏性、良好的光穩(wěn)定性和優(yōu)異的胞膜穿透性等優(yōu)點。本文成功地實現(xiàn)了對HEPG2細胞和HL7702細胞內H原位監(jiān)測成像。二設計合成了一種連有三聯(lián)毗啶基團的磺酸花菁結構的熒光分子探針用于選擇性檢測生物體內的FE2和C1。。探針的工作原理是基于探針金屬離子陰離子絡合配位和重原子的三重態(tài)熒光淬滅效應。探針本身有強的熒光，在氯離子存在下與FE2絡合后，導致磺酸花菁的熒光猝滅，而且熒光強度的猝滅程度分別與FE2的濃度和CL。的濃度成一定的比例關系。探針在與FE2和CL’反應前后的顏色由藍色變?yōu)樽仙瑢嶒灲Y果顯示探針對FE2和CL。有高度的選擇性。據(jù)此，我們分別固定了FE2和CL‘濃度，成功地實現(xiàn)了對FE2和C1。的分別檢測，探針的熒光強度變化分別與亞鐵離子和氯離子的濃度呈現(xiàn)較好的線性關系。探針對介質的酸堿度不敏感，熒光性質穩(wěn)定。該探針成功用于血漿和血清中FE2和CL’的選擇性檢測。選擇性實驗表明該探針是檢測生物體內FE2和CL’的理想近紅外熒光探針。關鍵詞氫離子氯離子亞鐵離子近紅外熒光探針共聚焦顯微成像比色法II

簡介：浙江大學博士學位論文納米硒對AVIAN肉雞的生物學效應及其分子機理的研究姓名胥保華申請學位級別博士專業(yè)特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導教師許梓榮陳盛祿20030501醛MDA含量顯著升高仄0O；；而納米硒組無明顯變化。4、肉雞胸肌肌肉品質的分析可見，在添加050MG／KG硒時高劑量，納米硒與硒代蛋氨酸和亞硒酸鈉相比，顯著降低了肌肉滴水損失仄O05、提高了肌肉紅色色度仄005、增加了肌肉中肌紅蛋白含量P005。本研究結果提示1納米硒作為硒源在抗氧化能力、提高肉雞生長性能、體液免疫效能和改善肌肉品質等方面表現(xiàn)出更強的營養(yǎng)生物學作用2納米硒調控肉雞肝臟組織CGPXMRNA穩(wěn)定性的能力更強；3納米硒的WEINBERG劑量一效應的最適劑量范圍寬于硒代蛋氨酸和亞硒酸鈉，顯示出對動物的安全性更高，這對于飼料新硒源的開發(fā)利用具有實踐意義。關鍵詞納米硒，AVIAN肉雞，生物學效應，谷胱甘肽過氧化物酶，細胞培養(yǎng)

簡介：越橘（VACCINIUMVITISIDAEALINN），俗稱藍莓，為杜鵑花科ERICACEAE越橘屬（VACCINIUMLINN）灌木或小喬木。全世界越橘屬植物約有450個種，我國已知有91個種，28個變種，主要分布在我國東北和西南地區(qū)。北美地區(qū)既是越橘原產(chǎn)地也是主要產(chǎn)區(qū)。越橘果實為藍色小漿果，富含多種維生素、黃酮、花青素，具有顯著提高視力和抗癌保健功效，近年來世界各地需求量不斷增加。南高叢越橘品種V3及LEGACY引種西南地區(qū)多年，V3長勢旺盛，但果實很小；LEGACY果實中等，長勢較為旺盛，但在重慶每年春夏梅雨季節(jié)，葉片易出現(xiàn)大量褐色病斑，抗病性較差。由于多倍體植株具有器官巨大性、抗性增強及營養(yǎng)成分增加等特點，本實驗室連續(xù)若干年采用秋水仙堿對北高叢、南高叢越橘不同品種進行加倍，陸續(xù)得到了不同表型的變異植株。在誘變初期雖已經(jīng)對變異株的形態(tài)學及細胞學進行了分析鑒定，但在田間栽培過程中，變異株還陸續(xù)有新的表型特征出現(xiàn)。加倍后的多倍體回復突變問題一直是研究中的空白領域，植株在回復突變中的生物學特性及分子水平的變化等指標的記錄是進行基礎研究的重要數(shù)據(jù)。因此，本研究運用ISSR分子標記技術在DNA水平對變異株進行分析，并結合形態(tài)學和細胞學檢測方法對變異植株與正常植株的解剖結構、生理指標、染色體數(shù)目進行分析研究和差異顯著性比較，進一步確認變異株在回復突變過程中的各方面指標的變化，旨在為越橘的多倍體育種提供基礎研究數(shù)據(jù)。主要研究結果如下1V3變異株移栽田間生長三年后，形態(tài)學鑒定顯示平均高度為對照的110％，莖直徑為對照的132，葉長、葉寬為對照的144、137。與對照相比，變異株長勢更好但果實較小，三棵變異株之間無顯著差異。LEGACY經(jīng)秋水仙素誘變后，根據(jù)表型特征分為L1、L2兩種類型。L1變異株表現(xiàn)多倍體的特性，經(jīng)鑒定莖粗，葉長、葉寬與對照相比分別增加了40、56、52，為顯著差異；L2變異株為分枝量增大類型，移栽田間后株高相比對照下降325，分枝量增加1944，為極顯著差異，葉長寬分別增加34、38，與對照相比差異顯著。2經(jīng)葉表皮氣孔觀察，氣孔密度方面V3變異株下降205；L1變異株下降116，與對照相比差異顯著；保衛(wèi)細胞葉綠體數(shù)目V3變異株增加146，L1變異株增加356，L2變異株增加246，與對照相比均為顯著差異。氣孔保衛(wèi)細胞平均長度、寬度L1變異株分別增加167、184，與對照差異顯著；V3、L2與對照相比差異不顯著。兩個品種的變異株葉片橫切結構顯示葉片主脈直徑、上表皮厚度、柵欄組織及海綿組織厚度均顯著增加，LEGACY變異株的葉片結構緊密度（CTR）與對照在5水平上存在差異，柵海比明顯高于對照，表明LEGACY變異株抗旱能力較對照有增強。3去壁低滲火焰干燥法對變異株莖尖染色體鑒定結果表明越橘V3及L1變異株均為二倍體細胞和四倍體細胞共存的嵌合體，多倍體細胞比率分別為4552、3862，較其誘導初期鑒定結果（70、4906）相比呈下降趨勢，表明在越橘異倍型嵌合體中，二倍體細胞分裂增殖速度較四倍體細胞快，加倍后有回復突變傾向。4V3變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對照顯著增加，丙二醛含量顯著下降；LEGACY變異株的葉綠素含量、可溶性糖含量、脯氨酸含量均較對照增加，丙二醛含量下降，呈極顯著差異。表明變異株具有生長優(yōu)勢，抗逆性更強。5采用改良CTAB法獲取高質量越橘DNA。通過直觀分析和方差分析結合建立了越橘ISSRPCR（20ΜL）最佳反應體系，各組分的濃度為10BUFFER2ΜL；TAQ酶075U；MG21875MMOLL1；DNA80NG；DNTP01MMOLL1；引物02ΜMOLL1。在此基礎上探討了引物UBC835的最佳退火溫度、循環(huán)次數(shù)和延伸時間，結果分別為542℃、35次、60S。電泳結果顯示優(yōu)化體系穩(wěn)定性較高。6對V3、LEGACY變異株及在田間栽培中出現(xiàn)表型變異的南高叢品種南好變異株（B1、B2、B3）及10個由本實驗室長期栽培保存的北高叢和南高叢越橘品種共21個樣品進行ISSR多態(tài)性擴增。從70個ISSR引物中篩選出10個多態(tài)性高且較穩(wěn)定的引物，共擴增出95個位點，多態(tài)性位點90個，多態(tài)比率為9470。UPGMA聚類顯示21個樣品的遺傳距離介于057083，均值07，在系數(shù)057處材料被分為南北高叢兩大分支。3個品種的變異株均表現(xiàn)出很高的多態(tài)性。與對照株相比，變異株在ISSRPCR擴增中的條帶差異為缺失、新增、既缺失又新增三種類型。A1、A2、A3變異株與對照V3之間遺傳相似系數(shù)為0800、0711、0722；L1、L2變異株與對照LEGACY之間遺傳相似系數(shù)為0800、0767；B1、B2、B3與對照南好之間遺傳相似系數(shù)為0633、0589、0578。結合變異株生物學差異和ISSR多態(tài)性分析，表明V3、LEGACY及南好的變異植株在DNA分子水平上發(fā)生改變。

簡介：分類號分類號S8553授予學位單位代碼授予學位單位代碼10434學號2015120238山東農(nóng)業(yè)大學山東農(nóng)業(yè)大學全日制碩士專業(yè)學位論文毛皮動物犬瘟熱病毒分離鑒定及分子生物學特性研究毛皮動物犬瘟熱病毒分離鑒定及分子生物學特性研究BIOLOGICALACTERISTICSISOLATEDOFCANINEDISTEMPERVIRUSOFFURBEARINGANIMALS20172017年66月66日姓名劉傳毅劉傳毅學位類別學位類別獸醫(yī)碩士獸醫(yī)碩士專業(yè)獸醫(yī)研究方向研究方向獸醫(yī)傳染病學獸醫(yī)傳染病學學院動物科技學院動物科技學院指導教師指導教師謝之景教授謝之景教授關于學位論文原創(chuàng)性和使用授權的聲明本人所呈交的學位論文，是在導師指導下，獨立進行科學研究所取得的成果。對在論文研究期間給予指導、幫助和做出重要貢獻的個人或集體，均在文中明確說明。本聲明的法律責任由本人承擔。本人完全了解山東農(nóng)業(yè)大學有關保留和使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留和按要求向國家有關部門或機構送交論文紙質本和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權山東農(nóng)業(yè)大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文和匯編本學位論文，同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫，并向社會公眾提供信息服務。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。論文作者簽名導師簽名日期

簡介：分類號分類號密級密級研究生學位論文論文題目（中文）論文題目（中文）沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學研究沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學研究論文題目（外文）論文題目（外文）STUDYONMOLECULARBIOLOGYOFEMBELLISIAASTRAGALI研究生姓名研究生姓名劉建利劉建利學科、專業(yè)學科、專業(yè)草學草學草地保護學草地保護學研究方向研究方向牧草病理學牧草病理學學位級別學位級別博士導師姓名、職稱導師姓名、職稱李彥忠李彥忠教授教授論文工作論文工作起止年月起止年月2012年9月至月至2016年5月論文提交日期論文提交日期2016年5月論文答辯日期論文答辯日期2016年5月學位授予日期學位授予日期2016年6月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市I沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學研究中文摘要沙打旺黃矮根腐病菌分子生物學研究中文摘要沙打旺（ASTRAGALUSADSURGENS）是我國特有豆科牧草，適宜于干旱、半干旱和半荒漠地區(qū)，具有治理水土流失等生態(tài)作用。沙打旺黃矮根腐病是由沙打旺埃里磚格孢（EMBELLISIAASTRAGALI）引致的沙打旺上最重要的病害之一，為系統(tǒng)性病害、氣傳病害和種傳病害。此前研究表明該病菌的形態(tài)特征及在寄主體內的生活特性與瘋草內生真菌ALTERNARIASPPUNDIFILUMSPPEMBELLISASPP相似，但由于尚未見其分子生物學方面的報道，故二者相似的論斷尚缺少分子生物學的佐證。為減少種子傳播途徑和分子育種，減少病害的發(fā)生，有必要研制出種帶該病菌的快速檢測技術，以及挖掘出其致病基因。為此，本論文開展了相關研究，得到如下主要結果。1基于3磷酸甘油醛脫氫酶（GPD）、RNA聚合酶II第二大亞基（RPB2）和轉錄延伸因子1Α（TEF1）的聯(lián)合多基因構建的系統(tǒng)發(fā)育樹，確定該病菌與鏈格孢屬波浪芽管孢組GENUSALTERNARIASECTIONUNDIFILUM的模式種ABNMUELLERIDAOM231361均屬于同一組；基于核糖體編碼基因內轉錄間隔區(qū)（ITS）和GPD多基因構建的系統(tǒng)發(fā)育樹，顯示該病菌與6種瘋草中的4種瘋草內生真菌不同，屬另一物種，兩個系統(tǒng)樹中上述兩個分支的MP自展支持率和貝葉斯后檢支持率都分別為100和100；再加上此菌也具有鏈格孢屬波浪芽管孢組典型形態(tài)特征“波浪芽管”，鑒于種加詞“ASTRAGALI”已被其他真菌占用。故將其更名為甘肅鏈格孢ALTERNARIAGANSUENSECOMBNOV，厘清了沙打旺黃矮根腐病菌與瘋草內生真菌之間的關系。2根據(jù)細胞質膜三磷酸腺苷水解酶基因片段（ATPASE）設計出此菌的特異性檢測引物AATPFGTCGAGAGTTTTTTCTT和AATPRGGTGGAGCTGGGTTGTTTTA，利用此特異引物進行普通PCR，可檢測出沙打旺種子中5PGΜL以上的此病菌DNA，帶菌率15的種子；熒光定量PCR擬合方程為CT3226LOGDNA29055，相關系數(shù)為09987，最低可以檢測05PGΜL沙打旺黃矮根腐病菌DNA。運用本方法可以準確快速檢驗檢疫沙打旺種帶黃矮根腐病菌，預防該病在新建植人工栽培沙打旺草地致病成災。3根據(jù)線粒體內核糖體小亞基編碼基因（MTSSU）基因設計出瘋草內生真菌特異性檢測引物OMTSSUF（CATAGAAAAAAAAATAAACAAACTG）和OMTSSUR

簡介：分類號密級華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文豬白細胞介素一34PIL34的分子克隆、表達和生物學活性驗證MOLECULARCLONING，EXPRESSIONANDBIOACTIVITYVERIFICATIONOFPORCINEINTERLEUKIN一34PIL一34研究生胡彝指導教師陳煥春院士指導小組陳煥春院士方六榮教授肖少波副教授江云波副教授專業(yè)預防獸醫(yī)學研究方向動物病原分子生物學和基因工程獲得學位名稱農(nóng)學碩士獲得學位時間2010年6月華中農(nóng)業(yè)大學動物科學動物醫(yī)學院二OO年六月華中農(nóng)業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性聲明及使用授權書學能論文否如需保密，解密時間年月日是否保密獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定與我一同工作的同態(tài)對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意。研究生簽名塌斯時間。。，D年占月，7日學位論文使用授權書本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學關于保存。使用學位論文的規(guī)定”，印學生必須按照學校要求提交學位論文的印刷本和電予版本；學校有權保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表傳播學位論文的全部或部分內容J‰。注保密學位論文在解密后適用于本授權書學夠謄名塌畸導師麟膳蝣。簽名日期■DLO年‘月I，日簽名日期≯矽年多月，，日

簡介：福建農(nóng)林大學碩士學位論文花生抗青枯病的分子生物學基礎研究姓名張沖申請學位級別碩士專業(yè)微生物學指導教師莊偉建20100601花生抗青枯病分子生物學基礎研究3根據(jù)已經(jīng)登錄的RRSIR基因序列設計引物，通過RTPCR從擬南芥ND1中克隆得到4137BP的抗青枯病基因RRSLR，與GENBANK上登錄的原序列同源性達99％，將該基因片斷連入植物表達載體PSCL301，構建帶抗青枯病基因的植物表達載體PSCL301RRSL，轉化農(nóng)桿菌EHAL05。然后準備對煙草進行了遺傳轉化進而進行功能驗證，后續(xù)工作正在進行中。本項日還同時開展了花生對青枯病的抗性遺傳和抗性基因克隆研究。上述研究為克隆和深入研究花生抗青枯病的分子機理，提供了前期的工作基礎。關鍵詞G花生；青枯??；抗性鑒定；全長CDNA文庫；RRSLR2

簡介：分類號分類號密級級學號號20091030452009103045單位代碼單位代碼1075910759石河子大學石河子大學碩士學位論文奶牛新孢子蟲病分子生物學檢測方法的研究奶牛新孢子蟲病分子生物學檢測方法的研究研究生唐慧芬指導教師季新成季新成副研究員副研究員申請學位門類級別理學碩士學科、專業(yè)名稱生物化學與分子生物學生物化學與分子生物學研究方向免疫與育種所在學院生命科學學院中國〃新疆〃石河子2012年6月RESEARCHOFMOLECULARBIOLOGYDETECTIONMETHODFNEOSPOSISADISSERTATIONSUBMITTEDTOSHIHEZIUNIVERSITYINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFTHEDEGREEOFMASTEROFNATURALSCIENCEBYTANGHUIFENIMMUNIZATIONBREEDINGDISSERTATIONSUPERVISASSOCIATERESEARCHERJIXINCHENGSHIHEZIXINJIANGCHINAJUNE2012

簡介：福建農(nóng)林大學博士學位論文煙草花葉病毒弱毒疫苗的研制及其分子生物學姓名邵碧英申請學位級別博士專業(yè)植物病理學指導教師林奇英謝聯(lián)輝200151福建農(nóng)林大學博士學位論文接收號分別為AF395127、AF395128、AF395129，結果表明，強、弱毒株基因組均為6395個核苷酸，具有4個開放閱讀框ORF，分別編碼126KDA蛋I芻693419NT1116AA和183KDA通讀蛋白694919NT，1616AA、運動蛋白49035709NT269AA、外殼蛋白5712619INT，159AA。5’端非編碼區(qū)NR為68NT168M，通讀蛋白和運動蛋白基因有17個堿基重疊，運動蛋白和外殼蛋白基因間隔區(qū)為2NT5710571INT，3’端NR區(qū)為204NT61926395NT。TMVW和TMVU1相比，基因組同源率達到98％，TMVW為普通株系。TMV017、TLVLV152基因組核苷酸發(fā)生變異的部位主要在126／183KDA蛋白ORF。和1NⅣW相比，TMV017僅在126KDA蛋白ORF中有18個堿基發(fā)生變異，10個引起氨基酸的變異；而TMV一152在126／183KD蛋白ORF中有16個堿基發(fā)生變異，其中有11個引起氨基酸的變異。TMV017和TMV152有11個共同變異的堿基，其中8個引起氨基酸的變異。TMV152在MPORF中有1個堿基引起氨基酸的變異。其它區(qū)域，三者完全相同。首次嘗試將弱毒株的缺失復制酶基因轉化煙草。構建了含TMVW、TMV017各2個126KDA蛋白ORF的部分片段，E1E28732813NT、R1E2692813NT的植物表達載體。經(jīng)農(nóng)桿菌TI質粒介導轉化煙草。再生植株總DNA的SOUTHERN點雜交檢測結果初步表明，4個片段均己整合到煙草基因組中。再生植株總RNA的RTPCRSOUTHERN點雜交檢測結果初步表明，4個片段均有轉錄。用含NDVWE1E2的重組克隆和載體PGEX2T，構建了重組原核表達載體，誘導表達出融合蛋11194KDA，制各了抗血清。免疫斑點雜交檢測抗血清的適宜工作濃度為1100。轉化植株能延遲、減輕攻擊病毒ND砩，的癥狀表現(xiàn)，含TMVWE1E2片段的轉化植株中有1株抗性水平高。J關鍵詞煙草花葉病毒，弱毒株，交互保護作用，基因組RNA，序列分析，繃腿臆脯嗲舡程