海洋分枝桿菌中P450蛋白和人源TCF蛋白截短體的晶體學(xué)研究.pdf

1、海洋分枝桿菌(Mycobacterium marinum)是一種非結(jié)核桿菌，主要感染魚類，當(dāng)其感染了人類時，細(xì)菌會主要分布在皮膚上，很少有深入感染。海洋分枝桿菌與結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，簡稱Mtb或TB)親緣關(guān)系密切，其氨基酸序列相似性高達(dá)85％，廣泛用作研究結(jié)核分枝桿菌致病性的模式細(xì)菌。細(xì)胞色素P450是一種單加氧酶，廣泛存在于從細(xì)菌到人類的各種生物體內(nèi)，在生命代謝過程中發(fā)揮著重要作用。結(jié)核

2、分枝桿菌中含有20種P450，其基因密度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他生物，這說明P450蛋白在其致病性及抗藥性功能中發(fā)揮著重要作用。目前對CYP126A3和CYP105Q4的底物及功能方面的研究較少，經(jīng)蛋白序列比對發(fā)現(xiàn)兩種蛋白與結(jié)核分枝桿菌中的兩種P450蛋白分別有39%和33%的同源性。我們希望通過對兩種蛋白結(jié)構(gòu)的研究推測其在海洋分枝桿菌中可能的功能及其底物類型，進(jìn)而為了解結(jié)核桿菌的致病性及抗藥性機(jī)制提供一定的線索。
　　T細(xì)胞因子（TCF）在

3、經(jīng)典Wnt信號通路中有著至關(guān)重要的作用，它能夠招募β-catenin與目的基因進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控下游目的基因的表達(dá)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)TCF蛋白中存在兩個DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域即HMG DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和C-clamp結(jié)構(gòu)域。C-clamp結(jié)構(gòu)域在TCF蛋白與DNA的結(jié)合及對下游基因的激活具有重要作用，特別是對一些較弱的Wnt反應(yīng)元件（WREs）。而這些較弱的WREs通常對細(xì)胞的生長和細(xì)胞周期發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。且C-clamp結(jié)構(gòu)域從果蠅到

4、人體都很保守，這說明其在生物體基因調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。
　　本論文利用結(jié)構(gòu)生物學(xué)的手段和方法，對所研究的蛋白進(jìn)行了克隆，表達(dá)，純化，結(jié)晶條件的嘗試和數(shù)據(jù)的收集。通過 X射線衍射技術(shù)，收集得到來源于海洋分枝桿菌的CYP126A3蛋白一套分辨率為1.75?的數(shù)據(jù)。通過數(shù)據(jù)的分析處理得知，該晶體一個不對稱單位只有一個蛋白分子，溶劑含量為52.1%，馬修斯常數(shù)為2.57?3Da-1。該晶體的晶胞參數(shù)為a=63.08，b=105.84，c