人源TRIM2和結(jié)核分枝桿菌TreS的表達(dá)純化和晶體生長.pdf

1、TRIM(TripartiteMotif)蛋白家族（或者稱為RBCC家族）是一類含有RING(R)、B-box以及Coiled-Coil區(qū)的多結(jié)構(gòu)域蛋白，它不僅參與細(xì)胞生長、發(fā)育，并與各種人類疾病（癌癥、遺傳病）以及抗病毒感染等密切相關(guān)。TRIM家族蛋白內(nèi)部結(jié)構(gòu)元件的排列順序（R-B-CC-Cterm）的一致性揭示了它是通過整體結(jié)構(gòu)行使功能。TRIM2蛋白由RING、B-box、Coiled-coil區(qū)和NHL四個結(jié)構(gòu)域組成，在神經(jīng)系統(tǒng)

2、中高度表達(dá)并與神經(jīng)元活動密切相關(guān)。TRIM2的N端的RING結(jié)構(gòu)域具有泛素連接酶的活性，通過結(jié)合并泛素化神經(jīng)纖維輕亞基(NF-L)來調(diào)節(jié)其代謝。其C端的NHL結(jié)構(gòu)域參與了與非常規(guī)動力蛋白myosinV的相互作用。TRIM2的錯義突變或者功能缺失將導(dǎo)致NF-L在軸突的堆積，形成神經(jīng)組織的腫脹，進(jìn)而引起神經(jīng)退行性病變。本文主要對TRIM2的全長及各個截短片段進(jìn)行了克隆構(gòu)建和蛋白的純化，并進(jìn)行晶體的生長嘗試，獲得了其中的截短體(320-744

3、aa)酶解后的晶體和初步的衍射數(shù)據(jù)。本文為人源蛋白TRIM2的結(jié)構(gòu)的研究奠定基礎(chǔ)，對于進(jìn)一步揭示該蛋白參與和行使功能的分子機(jī)理的信息具有重要意義。
　　 由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）引起的結(jié)核病是目前世界上致死率最高、傳播范圍最廣的細(xì)菌性疾病之一。海藻糖合成酶(TrehaloseSynthase，TreS)是催化海藻糖合成通路中的酶，在結(jié)核桿菌中主要功能是催化麥芽糖和海藻糖之間的相互轉(zhuǎn)化，

4、同時還可以將糖原轉(zhuǎn)化成為海藻糖。最新研究表明TreS還可以催化海藻糖向α-葡聚糖的轉(zhuǎn)化，這個通路稱為結(jié)核桿菌的自我毒性通路。為了深入了解結(jié)核分枝桿菌中TreS蛋白發(fā)揮功能的分子機(jī)制，我們采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)和純化了TreS重組蛋白。通過Thermofluor實驗篩選到有利于蛋白穩(wěn)定的緩沖液。由于TreS蛋白在純化過程中聚集狀態(tài)不均一，我們設(shè)計了五個突變體E280A、C251S、C595S、C251S/C595S、C251S/C59