CyPA與ROS在OX40-OX40L受體配體軸介導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 本研究觀察頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊模型小鼠體內(nèi)血脂水平，OX40、親環(huán)素A(CyPA)的表達(dá)及CD4+OX40+淋巴細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平的變化，并探討OX40/OX40L相互作用對(duì)淋巴細(xì)胞CyPA分泌及ROS水平的影響。
　　 方法：
　　 本研究分體內(nèi)體外兩部分。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以C57BL/6J小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用高脂飲食及頸動(dòng)脈硅膠圈植入法快速制作頸動(dòng)脈粥樣斑塊模型;體外實(shí)驗(yàn)分離培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)

2、行研究。蘇木精-伊紅（HE）染色分析頸動(dòng)脈斑塊形成情況與病理形態(tài)學(xué)變化。免疫組化檢測(cè)頸動(dòng)脈粥樣斑塊中CyPA表達(dá)，WesternBlot檢測(cè)體內(nèi)外脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)CyPA的表達(dá)及分泌水平，流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)體內(nèi)外脾臟淋巴細(xì)胞中OX40、CD4+OX40的表達(dá)及OX40+、CD4+OX40+細(xì)胞內(nèi)的ROS水平。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與正常對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠血清TC、LDL明顯升高，HDL則明顯降低，TG變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、意義。
　　 (2)正常對(duì)照組頸動(dòng)脈管壁呈半透明狀，無(wú)脂紋和斑塊形成，內(nèi)膜光滑平整，彈力板完整。模型小鼠患側(cè)頸動(dòng)脈有明顯斑塊形成，含大量泡沫細(xì)胞，富含脂質(zhì)，可見膽固醇結(jié)晶，彈力板變性、斷裂。
　　 (3)無(wú)論正常C57BL/6J小鼠，還是頸動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠，OX40+、CD4+OX40+淋巴細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯高于OX40-、CD4+OX40-細(xì)胞。
　　 (4)與對(duì)照小鼠相比，模型小鼠脾臟中OX40+細(xì)胞數(shù)

4、明顯增加，P＜0.05;CD4+OX40+細(xì)胞數(shù)增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (5)與正常對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組C57BL/6J小鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及脾臟淋巴細(xì)胞中可見大量CyPA表達(dá)。
　　 (6)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細(xì)胞中anti-OX40刺激OX40-OX40L軸后，淋巴細(xì)胞OX40表達(dá)和ROS水平明顯上調(diào)，且隨時(shí)間的增加而增加，36h達(dá)最大差異。Anti-OX40L特異性抑制OX40-OX40L軸能明顯降低淋巴細(xì)

5、胞OX40表達(dá)和ROS水平，36h達(dá)最大差異。
　　 (7)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細(xì)胞中anti-OX40刺激OX40-OX40L軸后6h，即可在培養(yǎng)液內(nèi)檢測(cè)到CyPA，利用Anti-OX40L特異性抑制OX40-OX40L軸后可明顯抑制CyPA分泌。
　　 結(jié)論：
　　 (1)植入頸動(dòng)脈硅膠圈及喂養(yǎng)高脂飼料可以快速誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠產(chǎn)生頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊。
　　 (2)OX40的表達(dá)有助于提升細(xì)胞內(nèi)R