雪蓮注射液防治骨關節(jié)炎的作用及其機制探討.pdf

1、本研究內容分為六部分： 第一部分：目的：本課題將結合現代醫(yī)學試驗的理論與方法，運用Hulth造模法制作兔OA動物模型，運用雪蓮注射液對膝骨關節(jié)炎動物模型進行干預，通過對軟骨和滑膜標本大體觀察、對軟骨細胞成分、基質的光鏡和電鏡下觀測，以及從細胞因子、透明質酸、氧自由基代謝等多方面指標的改變，探索雪蓮注射液防治OA的作用機理，為臨床使用提供理論支持． 方法： 1.體內實驗：動物隨機編為4組，A組、B組、C組和D組，A、

2、B、C組建立骨關節(jié)炎動物模型，D組正常喂養(yǎng)。 2.體外試驗：分離培養(yǎng)軟骨細胞，傳代細胞分Ⅰ、Ⅱ組，Ⅰ組給予不同濃度雪蓮注射液刺激，Ⅱa組予不同濃度雪蓮注射液干預24小時再予脂多糖(LPS，Lipopolysaccharide)刺激，Ⅱb組先予脂多糖(LPS)刺激24小時再予不同濃度雪蓮注射液干預，72小時后收集上清液檢測IL-1 β水平。 結果： 1.X片觀察：C組與D組相比，關節(jié)內側間隙明顯變窄，關節(jié)面粗糙，變

3、形，關節(jié)邊緣有明顯骨贅，軟骨下骨骨密度明顯增高，說明造模成功． 2.光鏡、電鏡觀察發(fā)現，A組動物在各個時間點的軟骨結構、細胞排列和形態(tài)、軟骨基質對Safranin-O異染性均優(yōu)于B、C組． 3.雪蓮注射液能夠降低骨關節(jié)炎模型動物關節(jié)液與體外培養(yǎng)軟骨細胞分泌IL-1β的水平． 4.A組在各時段的HA水平與D組之間沒有顯著性差異(P>0.05)，A組與B、C組各時段的HA水平有顯著(P<0.05)，B、C組和D組的H

4、A水平有顯著性差異(P<0.05)，B、C組間沒有顯著性差異。 5.除D組以外，各組12周時血清中NO含量均高于6周時；24周時血清中NO含量均高于12周時．NO的表達均逐漸升高，說明NO是參與膝OA發(fā)病進程的重要介質，病變的程度越重則含量越高；A組在各時點血清中NO含量均低于B組和C組(P<0.05)，說明雪蓮注射液能有效抑制骨性關節(jié)炎發(fā)病病理過程中的一氧化氮的產生；試驗顯示A組動物滑膜組織中SOD活性顯著高于B、C組(P<0

5、.05)，而MDA含量顯著低于B、C組(P<0.05)，B組與C組無顯著性差異(P>0.05)。 結論：雪蓮注射液能對軟骨細胞蛋白多糖PG表型的表達具有維持和保護作用，使破壞的膠原纖維與彈力纖維得到修復，使軟骨細胞的代謝恢復正常，進而維持其結構的完整性，延緩關節(jié)軟骨退變；有效抑制IL-1、NO的生物活性，增強SOD的生物活性，改善微循環(huán)，降低骨內壓，從而達到保護關節(jié)軟骨的目的；促進滑膜細胞產生透明質酸和調節(jié)關節(jié)液中微量元素，恢復

6、關節(jié)滑液和關節(jié)組織基質的流變學特性，緩解滑膜炎癥，減輕軟骨破壞，改善關節(jié)功能；其主要成分黃酮總甙具有抗炎、鎮(zhèn)痛、消腫的作用，直接對抗炎性介質，改善關節(jié)的內環(huán)境，改善微血管狀態(tài)，降低毛細血管通透性，減少滲出，消除滑膜及周圍組織炎癥，降低細胞因子、金屬蛋白酶水平，使組織代謝恢復正常，延緩關節(jié)軟骨的退變過程。 第二部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關節(jié)炎模型動物軟骨組織形態(tài)學的影響，試圖從形態(tài)學角度闡明雪蓮注射液治療骨關節(jié)炎的作用機理．

7、 方法：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常組(D組)，每組15只。 結果：(1)X片觀察：C組與D組相比，關節(jié)內側問隙明顯變窄，關節(jié)面粗糙變形，關節(jié)邊緣有明顯骨贅，軟骨下骨骨密度明顯增高，說明造模成功．(2)光鏡、電鏡觀察發(fā)現，A組動物在各個時間點的軟骨結構、細胞排列和形態(tài)、軟骨基質對Safranin-O異染性均優(yōu)于B、C組。 結論：(

8、1)從CR平片和光鏡、電鏡觀察比較可以判斷，兔膝骨性關節(jié)炎模型建立成功．(2)雪蓮注射液能夠促進軟骨細胞合成代謝，促進軟骨基質蛋白多糖(PG)的合成，對關節(jié)軟骨具有保護作用。 第三部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關節(jié)炎模型動物關節(jié)液中白介素1水平的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關節(jié)炎的作用機理。 方法：體內試驗：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組印雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常

9、組(D組)，每組15只。 結果：雪蓮注射液能夠降低骨關節(jié)炎模型動物關節(jié)液與體外培養(yǎng)軟骨細胞分泌IL-1β的水平。 結論：雪蓮注射液可以通過抑制白介素-1β的水平對骨關節(jié)炎起防治作用。 第四部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關節(jié)炎模型動物軟骨組織膠原表達的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C

10、組)和正常組(D組)，每組15只． 結果：A組在各時點I型膠原陽染面積低于B組和C組，Ⅱ型膠原陽染面積高于B組和C組．D組在各時點關節(jié)軟骨僅在表層存在少量I型膠原陽性染色表達。 結論：應用雪蓮注射液早期干預在翻譯水平能有效緩解基質膠原降解破壞的程度，延緩OA的發(fā)生發(fā)展。 第五部分：目的：探討雪蓮注射液對膝骨關節(jié)炎模型動物關節(jié)液中透明質酸含量的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本

11、大耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(c組)和正常組(D組)，每組15只． 結果：雪蓮注射液能夠促進骨關節(jié)炎模型動物關節(jié)液中透明質酸含量的提高． 結論：雪蓮注射液可以通過提高關節(jié)液中透明質酸的水平對骨關節(jié)炎起防治作用． 第六部分：目的：探討中藥雪蓮注射液對膝骨性關節(jié)炎模型動物氧自由基代謝的影響，從而探討雪蓮注射液治療骨關節(jié)炎的作用機理。 方法：健康日本大

12、耳兔60只，隨機編為4組即雪蓮注射液實驗組(A組)、生理鹽水對照組(B組)、空白對照組(C組)和正常組(D組)，每組15只． 結果： (1)除D組以外，各組12周時血清中NO含量均高于6周時；24周時血清中NO含量均高于12周時．NO的表達均逐漸升高，說明NO是參與膝OA發(fā)病進程的重要介質，病變的程度越重則含量越高． (2)A組在各時點血清中NO含量均低于B組和C組(P<0.05)，說明雪蓮注射液能有效抑制骨性關