支持細胞對體外培養(yǎng)精原干細胞的作用途徑研究.pdf

1、目的：
　　 通過不同培養(yǎng)條件對精原干細胞(Spermatogonial Stem Cells,SSCs)進行體外培養(yǎng),觀察每種培養(yǎng)條件下SSCs24h貼壁率,增殖特性并繪制其增殖曲線,比較上述指標(biāo)在不同培養(yǎng)條件下的差異,從而探討支持細胞對體外培養(yǎng)精原干細胞的作用途徑。
　　 方法：
　　 選用7d齡雄性昆明種小鼠,兩步酶消化法獲得睪丸組織細胞懸液,差異時間貼壁法分離精原干細胞和支持細胞,免疫熒光法和油紅O染色法

2、分別對其進行生物學(xué)鑒定,流式細胞儀對精原干細胞進行純度分析。按培養(yǎng)條件的不同將實驗分為3組:精原干細胞與支持細胞共培養(yǎng)組(A組),條件培養(yǎng)基組(B組),常規(guī)培養(yǎng)基組(C組)。其中B組所用條件培養(yǎng)基按單純支持細胞培養(yǎng)上清液:雙倍濃縮的DMEM/F12:胎牛血清=4.5:4.5:1的比例配置;A、C組所用常規(guī)培養(yǎng)基即含體積分數(shù)10％胎牛血清的DMEM/F12。臺盼蘭法測定各組貼壁率,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法測定各組精原干細胞的吸光度并繪制

3、增值曲線。倒置顯微鏡下觀察各組精原干細胞增殖特點及集落形成情況。比較各組精原干細胞24h貼壁率、增值曲線及存活時間。
　　 結(jié)果：
　　 A組精原干細胞的24h貼壁率大于B組及C組(P＜0.05),而B、C組間無差異(P＞0.05);A組精原干細胞接種起即穩(wěn)定增殖,于(7-10d)形成穩(wěn)定集落并維持約30d的特性。B組和C組均表現(xiàn)為精原干細胞經(jīng)短暫的增殖后呈現(xiàn)快速減少的趨勢,培養(yǎng)一周后,精原干細胞數(shù)量明顯減少。